Human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (hGM-CSF) is a glycoprotein that stimulates the production of granulocytes, macrophages and white blood cells. hGM-CSF secreted by transgenic Nicotiana tabacum suspension cells was unstable in the culture medium and rapidly degraded by extracellular preteases. In order to reduce extracellular pretense activity, culture temperature was lowered. Then, the production of hGM-CSF by transgenic plant suspension cell cultures could be enhanced by reduced degradation of hGM-CSF at low temperature.
Response surface methodology was employed to study the interactive effect of sucrose, nitrogen, temperature and to optimize their levels to enhance the production of human granulocyte-macrophage colony-stimulation factor from Nicotiana tabacum cell suspension cultures. A 15-runs Box-Behnken design including three center points was the response surface method selected for the initial set of experiments. The analysis of the data from the Box-Behnken experiments showed interactive effects of sucrose:nitrogen, sucrose:temperature and nitrogen:temperature. The optimal combinations of sucrose, nitrogen and temperature for hGM-CSF production from surface plot were sucrose 90 g/L, nitrogen 41 mM and 22$^{\circ}C$, respectively. The optimization of there factors enhanced the hGM-CSF production by 2 times because high sucrose concentration stimulated the secretion of hGM-CSF and low temperature prevented hGM-CSF degradation in media by pretenses.
Effect of immobilization on the production of human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (hGM-CSF) by Nicotiana tabacum cells was investigated using polyurethane foam as immobilization matrices. The cell activity and the hGM-CSF production were maintained for 16 days in spite of 3 times of media exchange. Under the same conditions of temperature and agitation rate, maximum concentrations of hGM-CSF in a 500-mL spinner flask and 100-mL Erleuneyer flasks were 17.3 ${\mu}g/L$ and 9.8 ${\mu}g/L$, respectively. Consequently high hGM-CSF production could be possible in spinner flask when the rate and amount of media exchange were optimized.
Baek, Eseul;Park, Minju;Yoon, Ju-Yeon;Palukaitis, Peter
Research in Plant Disease
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v.23
no.3
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pp.288-293
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2017
Chrysanthemum chlorotic mottle viroid (CChMVd) fused to the leader sequence of a reporter gene (mRFP) expressed transiently in agroinfiltrated Nicotiana benthamiana, was used to show that CChMVd can traffic into chloroplasts, thought to be the site of its replication. Fluorescence from mRFP was detected in chloroplasts, but only if the viroid transcription fusions were present, either from the full-length 400-nt CChMVd, or each of two partial fragments (nucleotides 125 to 2 and 231 to 372). The mRFP and its mRNA were detected by western blotting and RT-PCR, respectively, in tissue extracts of plants infiltrated by each fusion construct. Isolated chloroplasts were shown by RT-PCR to contain the RNA sequences of both CChMVd and mRFP, if both were present, but not the mRFP sequence in the absence of the viroid sequences. The results suggest that RNA trafficking was probably due to an RNA structure, and not a particular sequence, as discussed.
A field experiment was conducted to study the effects of fertilizer application rate and number of harvested leaves per plant on selected agronomic, chemical and physical characteristics of burley tobacco(Nicotiana tabacum L. cv Burley 21) in 1988, 1989 and 1990 at Chonju Experiment Station, Korea Ginseng SE Tobacco Research Institute. 175.0 or 227.5 kilogram per 10a of compound fertilizer(N-P2O5-K2O= 10-10-20) were applied as main plot, and 2 or 4 of upper leaves was topped off with 0, 2 or 4 of the lower leaves removed as sub plot. Yield, total alkaloid and total nitrogen content of cured leaves were high in the higher level of compound fertilizer plot, and increasing the level of compound fertilizer had an adverse effect on physical characteristics. Reducing the number of harvested leaves had a negative effect on yield regardless of whether the leaf number was reduced by lower topping or removing the bottom leaves, but increased the rate of higher grades leaves. Differences in total alkaloid, total nitrogen and some physical properties among number of harvested leaf per plant were smaller than expected.
Among 100 species in 54 families of plants tested, leaf extracts from Allium cepa, Allium sativum, Malussieboldii, Reynoutria japonia and Rheum coreanum were inhibitory on mycelium growth of phytophthora spp.. Especially, Allium sativum and Malus sieboldii were strongly inhibitory. Allium sativum, Malussieboldii and Rhem coreanum were strongly inhibitory on zoosporangium germination of P. capsici. Malus sieboldii only were strongly inhibitory on zoosporangium germination of P. nicotiana and P. infestans.And Malus sieboldii were strongly effected on disease control of these pathogens. These results indicate the possibility of finding antagonistic plants in the nature for the control of certain pathogens in soil.
AFLP(Amplified Fragment Length Polymorphism) analysis was conducted to cultivars of tobacco, Nicotiana tabacum in order to select the cultivar-specific markers. AFLP results using 12 primer sets revealed genetic diversity among 12 field grown tobacco cultivars. Polymorphic fragments amplified by PCR was purified and cloned to identify their nucleotide sequences. From the sequences of them, 40 primer sets were designed to select cultivar-specific markers. When genomic DNA isolated from tobacco were used as PCR template, a set of primers, BrSF/BrSR showed Burley-specific band patterns. The results indicate that AFLP technique used in this experiments is useful for identifying tobacco cultivars in a rapid manner.
Potato Virus Y(PVY), vein necrosis strain, in Korea causes severe symptoms on burley tobacco(Nicotiana tabacum L.). As the results, programs to incorporate PVY resistance into commercial cultivars were initiatEd. But the development of the homozygous fertile line resistant to PVY is time consumming. This study was conducted whether the Fl hybrid could be used to reduce the yield losses caused by PVY. Four F1 hybrids were made between male - sterile(ms) NC 107 and KB 107 as maternal parent, and TC 612 and TC 613 as Pollen donor, respectively, and were evaluated for their PVY resistance and negatively associated traits. (ms NC 107 X TC 612) F1, named as KB 109, Ivas applied to yield trial and compared with commercial cultivars for the level of disease resistance, agronomic characteristics, chemical contents and physical properties. All Fl hybrid could be used commercially as the PVY resistant cultivar. Especially KB 109 have the resistance against PVY, tobacco mosaic virus and black shank(Phytophthora parasitica var. nicotianae). It had wider leaves, flowered one day later, and yield of acceptable quality was higher than that of Burley 21, standard cultivar in Korea.
The effects of stalk cutting time and environmental factors such as air temperature, leaf temperature, solar radiation and leaf moisture content during harvesting and curing in burley tobacco(Nicotiana tabacum L.) on weight loss of fresh stalks and sunburning in leaves were investigated at Chonju Experiment Station, Korea Ginseng & Tobacco Research Institute in 1996 and 1997. Twelve to fifteen percent of the fresh weight was lost in 3 to 4 hours after stalk-cutting, and sunburned leaves could be observed in case of stalk cutting between 11:00 and 15:00 O'clock on a clear sunny day, when the air temperature was 34 to 35$^{\circ}C$, leaf temperature 52 to 54$^{\circ}C$, and solar radiation 700 to 940 w/$m^2$. The leaves exposed to this weather condition were sunburned within 1 hour after stalk cutting. But low temperature (below $25^{\circ}C$) with high solar radiation(above 700w/m2) or high temperature(above 3$0^{\circ}C$) with low solar radiation (below 600w$m^2$) did not induce the sunburn damage in leaves. As the leaf temperature and leaf moisture content were higher, the sunburned leaves increased. The leaves at the higher stalk position were more easily sunburned than those at the lower. This result indicates that the immature leaves with higher chlorophyll content might be more susceptible to sunburning.
The effect of phytohormones, light and phosphate on in vitro production of ubiquinone 10 from the suspension cultures of Nicotiana tabacum cv. Xanthi callus was investigated. The inoculum size and cultured time in the suspension culture had to be at least over 2 % of medium volume at 15 days for the excellent growth of Xanthi callus. The growth of Xanthi callus in the suspension culture was improved by addition of NAA and 2,4-D, especially NAA 1.0mg/1 alone, at the light condition. The optimal concentration of phytohormone was 0.1 mg/l 2.4-D and 1.0 mg/l NAA for productivity of ubiquinone 10 in the suspenseion of Xanthi callus. Addition of 3mM KH$_2$PO$_4$ to the medium was more effective in promoting ubiquinone-l0 formation than other concentration in the light condition. Content and production of ubiquinone-l0 in the suspension cultures of Xanthi callus were the highest at the MS media containing 0.5mg/L kinetin, 0.5mg/L 2,4-D, 1.0mg/1 NAA, 3mM phosphate and 2 % inoculum in the light.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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