• Title/Summary/Keyword: Negative Stain

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경부 결핵성 임파선염 환자에서 PCR-RELP를 이용한 결핵균의 검출 및 확인 (Detection and Identification of Mycobacterium Tuberculosis in Patients with Tuberculous Cervical Lymphadenitis by PCR-RFLP)

  • 이상숙;조영록;전지민;최용석;손은주;박남조;박준식
    • 대한두경부종양학회지
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    • 제12권2호
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    • pp.169-176
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    • 1996
  • 결핵의 진단은 특징적 병리조직양상, 항산균 염색에 의한 균 증명과 M. tuberculosis균 배양으로 이루어지나 형태적으로는 결핵이 의심되더라도 항산균이 조직표본이나 도말에서 검출되지 않거나 M. tuberculosis가 배양되지 않아 정확한 원인적 진단이 불가능할 경우가 많다. 이에 저자들은 경부 결핵성 임파선염으로 적출되어 보내어진 경부 임파선 조직의 신선한 조직이나 통상적으로 처리되어 제작된 파라핀 블록을 이용하여 M. tuberculosis에 특수한 반복성 DNA sequence인 IS986를 표적으로 한 primers을 사용하여 nested PCR방법을 이용하여 예민도가 높은 M. tuberculosis 검출로 빠른 시간 내에 결핵을 진단하고자 본 연구를 실시하였다. 최근 유전자 기술의 진보로 M. tuberculosis의 여러 항원들의 유전자가 클론화되고 그 염기 배열이 밝혀졌으며 이에 저자들은 결핵의 확진을 위하여 파라핀 포매조직을 대상으로 nested PCR에 의한 188bp의 DNA를 증폭한후 증폭한 DNA분절의 염기 배열을 결정한 후 Bst UI와 Hha I 효소를 이용한 소화과정을 거친 후 restriction fragment length polymorphism(RFLP)을 은염색에 의해 그 패턴에 의해 M. tuberculosis를 확인하고 또한 다른 종의 Mycobacteria를 배제시킬 수 있었다. 본 방법은 1$\sim$2일에 끝나며, 방사선물질을 사용하지 않으면서도 감도 및 특이성이 우수하여 일반 병리실힘실에서도 M. tuberculosis를 포함한 각종 항산균의 신속한 검출법으로 손쉽게 사용할 수 있다고 생각되어 이에 보고하였다.

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난소 종양의 임상적 양상을 보인 소아 복막 결핵 (A Case of Abdominal Tuberclosis Mimicking Ovarian Cancer)

  • 염정숙;김재희;조재민;이정희;박은실;서지현;임재영;박찬후;우향옥;윤희상
    • Pediatric Gastroenterology, Hepatology & Nutrition
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    • 제8권2호
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    • pp.238-242
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    • 2005
  • 복부 팽만과 복수, 복부 종괴 및 혈청 CA-125가 상승하는 경우 반드시 복막 결핵을 의심해야 하며 보다 정확하고 빠른 진단을 위해 복막 천자를 통한 염색 및 균 배양뿐 아니라 ADA, 중합 효소 연쇄 반응 및 진단적 복강경 검사 등이 필요하다. 저자들은 난소 종양의 임상 양상을 보인 5세 여아에서 복막 결핵을 진단한 예가 있어 문헌 고찰과 함께 보고하는 바이다.

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사람 연골하골 중간엽 줄기세포의 효율적인 골형성 유도 (Induction of Effective Osteogenesis by Mesenchymal Stem Cells from the Human Subchondral Bone)

  • 허정은;조윤제;유명철;백용현;이재동;최도영;박동석
    • Journal of Acupuncture Research
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    • 제23권5호
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    • pp.69-77
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    • 2006
  • Background : Mesenchymal stem cells (MSCs) are present in most of the tissue matrix, taking part in their regeneration when injury or damage occurs. The aim of this study was to investigate the presence of cells with pluripotential characteristics in human subchondral bone and the capacity of these cells to differentiate to osteoblast. Methods : Human subchondral bone were digested with collagenase. Isolated cells were cultured with a-MEM, 15% FBS, 10-8M dexamethasone and 50 ng/mL ascoric acid. Cells from 0 day(isolated cells), 7 day (first subculture) and 14 days (third subculture) were used to carry out phenotypic characterization experiments flowcytometry analysis with 11 monoclonal antibodies) and osteogenic differentiation experiments. Osteogenic differentiation of cells was assessment by quantification of bone extracellular matrix components by following analysis: alkaline phosphatase(ALP) stains to detect ALP activity, RT-PCR and western blot to detect osteocalcin (OCN), osteopontin (OPN) and type I collagen(Col I), and Alizarin red stains to detect calcium deposition. Results : Flowcytometry analyses showed that in our population more than 98% of cells were positive for MSC markers: SH-2(CD105, 99%), CD29 (95%), CD73 (95%). Cells were negative for hematopoietic markers (CD11b, CD34, and CD45). Furthermore, cells showed positive stain to multipotent markers such as CDl17 (c-kit) (15.1%), and CD166 (74.9%), and cell adhesion molecules such as CD54 (78.1%) and CD106 (63.5%). The osteogenic specific marker analyses showed that the culture of these cells for 7 and 14 days stimulates ALP, OCN, OPN and Col I synthesis by RT-PCR and Western blot analysis. Also, after 14 days in the culture of MSCs induces mineralization by Arizarin red stain. Conclusion : In this work, we demonstrated a new and efficient method for osteoblastic differentiation of human subchondral bone stem cells. As MSCs takes part in reparative processes of adult tissues, these cells could play an important role in osteogenesis.

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신선조직 검체에서 결핵균 검출을 위한 자동화 중합효소연쇄반응 검사의 유용성 (Usefulness of Automated PCR Test for the Detection of Mycobacterium Tuberculosis in Fresh Biopsy Tissues)

  • 최우순;신소영;김종옥;김명숙;이혜경
    • Tuberculosis and Respiratory Diseases
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    • 제61권1호
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    • pp.54-59
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    • 2006
  • 연구 배경 : 결핵의 대부분을 차지하는 폐결핵 진단에 객담, 기관지 세척액, 흉수액을 이용한 TB-PCR 검사의 유용성에 대해서는 여러 연구가 있었으나 폐 이외의 결핵 진단을 위한 신선 생검 조직 검체에서의 TB-PCR법 연구는 아직 미흡하다. 이에 저자들은 자동분석법인 COBAS AMPLICOR MTB PCR assay (Roche Molecular System)를 이용하여 신선 생검 조직 검체로 TB-PCR법의 유용성을 알아보았다. 방법 및 대상 : 2004년 10월부터 2005년 12월까지 가톨릭대학교 대전성모병원 병리과와 진단검사의학과에 결핵의진 하에 조직검사와 신선조직을 이용한 항산균 도말검사, 배양검사, TB-PCR 검사가 공히 의뢰된 환자 42예를 대상으로 하였다. 결 과 : 신선 생검 조직 42예를 대상으로 실시한 결과, 임상소견에서 결핵으로 진단된 경우는 18예 이었으며, 그 중 림프절 12예와 폐 조직 2예, 충수 조직 1예, 총 16예(88.9%)에서 PCR 양성을 보였고, 민감도와 특이도, 양성예측도, 음성 예측도는 88.9%, 100%, 100%와 92.3%로 나타났다. 조직학적으로 육아종 소견과 건락성 괴사의 소견 보인 18예(100%)는 모두 결핵으로 진단되었고 그 중 16예(88.9%)에서 PCR 양성을 보였다. 결 론 : 신선 생검 조직 검체를 이용한 TB-PCR 자동분석기의 결과는 임상소견 및 현미경적 소견과 비교 분석 시 민감도와 특이도가 높은 유용한 검사라고 생각되었다.

C-14 요소호기검사의 정량치가 Helicobacter pylori 감염 정도를 반영할 수 있을까? (Can the C-14 Urea Breath Test Reflect the Extent and Degree of Ongoing Helicobacter pylori Infection?)

  • 임석태;손명희;이승옥;이수택;정명자
    • 대한핵의학회지
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    • 제35권1호
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    • pp.61-68
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    • 2001
  • 목적: H. pylori는 현재 인체에서 매우 높은 감염률을 보이고 있고 세균의 위내 집락형성이 위염, 궤양성 질환 및 위암 등 많은 위장 질환의 발생과 관련이 있다고 알려져 있다. 본 연구는 비관혈적이고 편리하게 사용될 수 있는 C-14 요소호기검사의 진단성능을 알아보고 정량적 측정치가 내시경 생검에 의한 H. pylori 분포 정도와 상관관계가 있는지를 비교분석함으로써 치료후 추적관찰에 침습적인 내시경적 검사를 대체할 수 있는 유용성이 있는지를 알아보고자 하였다. 대상 및 방법: 최근 4주 이내에 H. pylori 박멸요법을 받지 않는 150명의 환자(남:녀=83:67, 나이, $48{\pm}11.2$세)를 대상으로 균박멸요법 시행전에 위십이지장내시경 및 생검, CLO 검사, C-14 요소호기검사를 시행하였다. 조직생검 결과를 금과옥조로 하여 침습적인 CLO 검사와 비침습적인 C-14 요소호기검사의 H. pylori 감염 진단성능을 비교분석 하였고 Wyatt법에 의한 조직검사의 등급(0-4)과 C-14 요소호기검사의 정량적 수치와의 상관관계를 분석하였다. 결과: H. pylori 감염에 대한 CLO 검사의 민감도 83.2%, 특이도 81.4%, 양성예측도 91.8%, 음성예측도 81.4%, 정확도는 82.7% 이었다. C-14 요소호기검사는 민감도 92.5%, 특이도 88.4%, 양성예측도 97.1%, 음성예측도 88.4%, 정확도는 91.3% 이었다. 병리조직검사에서 등급 0은 $45{\pm}27dpm$, 등급 1은 $707{\pm}584dpm$, 등급 2는 $1558{\pm}584dpm$, 등급 3은 $1851{\pm}604$, 등급 4는 $2719{\pm}892dpm$으로 조직검사의 등급이 높을수록 C-14 요소호기검사의 정량적 수치가 높게 측정되었다(r=0.848, p<0.01). 결론: C-14 요소호기검사는 H. pylori 감염을 진단하는데 CLO 검사에 비하여 높은 민감도와 정확도를 보이는 비침습적이고 간편한 임상적으로 유용한 검사 방법이며, 정량적 수치는 병리조직검사에 의한 H. pylori 분포와 유의한 상관관계를 보여 치료 후 추적관찰에 내시경적 검사와 더불어 균박멸 유무를 진단하는데 유용한 지표로 이용될 수가 있을 것으로 사료된다.

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Helicobacter pylori 감염 유무와 정도 반영에 대한 C-14와 C-13 요소호기검사 정량치 비교 (Comparison of the Quantitative Values of C-14 and C-13 UBT to Reflect the Presence and Degree of Ongoing Helicobacter pylori Infection)

  • 임석태;김동욱;정환정;손명희
    • Nuclear Medicine and Molecular Imaging
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    • 제42권3호
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    • pp.229-234
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    • 2008
  • 목적: 최근 들어 H. pylori에 의한 염증이 진행되면 만성 위축성위염을 일으키고 나아가서는 위암을 일으킨다는 학설이 대두되면서 UBT의 이용이 증가되고 있다 저자들은 H. pylori 감염과 분포 정도를 평가하는데 C-14 와 C-13 UBT의 진단성능과 유용성에 차이가 있는지를 알아보았다. 대상 및 방법: 소화불량, 위 팽만감, 상복부동통 등의 상부위장관증상이 있어 위십이지장내시경을 시행 받은 환자 중 균박멸요법을 시행 전에 조직검사, C-14 및 C-13 UBT를 모두 시행 받은 38명(남:녀=28:10, 나이; $53.4{\pm}13.0$세)을 대상으로 하였다. 조직생검 결과를 최적 기준으로 하여 C-14 와 C-13 UBT의 진단성능을 비교하였고 Wyatt법에 의한 조직검사의 등급(0-4)과 C-14 및 C-13 UBT의 정량적 측정치와의 상관관계를 비교하였다. 결과: 조직생검에서 25명(65.8%)에서 H. pylori 감염에 대한 양성을 보였다. H. pylori 감염 진단하는데 C-14 UBT는 민감도 92.0%, 특이도 92.3%, 양성예측도 95.8%, 음성예측도 91.7%, 정확도는 92.1% 이었으나, C-13 UBT는 민감도 96.0%, 특이도 84.6%, 양성 예측도 92.3%, 음성예측도 91.7%, 정확도는 92.1% 이었다. 조직검사 등급에 따른 C-14 UBT 측정치와의 상관성이 C-13 UBT 측정치에 비하여 우수하였다(각각 r=0.948 vs r=0.818, p<0.001). 결론: H. pylori 감염을 진단하는데 C-14 와 C-13 UBT는 유의한 차이는 없으나 C-14 UBT 측정치가 H. pylori 감염 정도를 평가하는데 좀 더 유용할 것으로 생각된다.

객담 결핵균 도말검사가 음성일때 중합효소연쇄반응검사와 진단적 신뢰도에 관한 연구 (How Reliable is Sputum PCR Test in the Diagnosis of Pulmonary Tuberculosis When Sputum Smear is Negative?)

  • 백승훈;이재명;강민종;손지웅;이승준;김동규;이명구;현인규;정기석;이경화;조현찬
    • Tuberculosis and Respiratory Diseases
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    • 제50권2호
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    • pp.222-228
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    • 2001
  • 목 적 : 객담 항산균 도말 양성환자에서 direct amplification test (DAT) 양성이면 폐결핵으로 확진이 가능하다. 그러나 객담 항산균 도말음성이고 DAT는 양성인 경우에는 DAT 결과가 얼마나 신뢰성이 있는지 의문이었다. 따라서 저자들은 폐결핵이 의심되는 환자에서 객담 항산균 도말 음성이고 DAT 양성일 때 폐결핵진단에 있어서 DAT의 유용성올 살펴보고자 하였다. 방 법 : 1998년 6월1일부터 1999년 5월30일 까지 한림대학교 의료원에서 폐결핵이 의심되어 결핵균 항산균 도말, 배양검사 및 DAT를 시행한 909명을 대상으로 하였다. 활동성 폐결핵의 확진은 결핵균 배양 양성이거나 조직학적으로 건락성 육아종이 증명된 경우로 정의하였다. 임상적 폐결핵의 진단 조건은 방사선 소견상 결핵성 폐침윤이 의심되고 폐렴, 폐암 등이 배제된 환자로 결핵균 배양은 음성이나, 항결핵제 3개월 이상 투여 후 증상 및 방사선 소견상 호전이 있는 경우로 정의하였다. DAT는 Mycobacterium tuberculosis complex에 특징적으로 존재 하는 insertion sequence (IS6110)의 특정 부위만을 특이적으로 증폭시킬 수 있는 TB-$CRkit^{TM}$(한국생공, 대전)를 이용하였으며, 특이도를 높이기 위해 nested PCR검사를 시행하였다. 결 과 : 대상 환자 909 명 중 객담 항산균 도말검사는 335명에서 양성(36.6%)이었으며, 객담 결핵균 PCR이 374명에서 양성(41.1%)으로 판명되었다. 객담 항산균 도말 음성이면서 객담 결핵 PCR 양성인 환자는 39명(4.3%)으로 남자 22명, 여자 17명 이었다. 객담 결핵 PCR 양성인 환자 39 명중 32명에서 폐결핵으로 진단되었다. DAT는 확진된 결핵환자만을 대상으로 할 때 61.5%의 양성 예측율을, 확진된 폐결핵 환자와 임상적으로 진단된 결핵환자를 대상으로 할 때 82.1% 양성 예측율을 나타냈었고 위양성율은 18.0%였다. 결 론 : 이상의 결과로 임상적으로 폐결핵이 의심되는 객담 항산균 도말 음성인 환자에서 객담 DAT 양성일 때 폐결핵의 조기 진단에 중요한 수단으로 이용 될 수 있을 것으로 사료되었다.

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야외 송아지 설사변에서 작은와포자충 검출에 대한 평가 (Evaluation for detection of Cryptosporidium oocysts in diarrheal feces of calves)

  • 위성환;주후돈;강영배
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제34권2호
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    • pp.121-126
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    • 1996
  • 작은와포자충이 송아지에서 설사에 직접적으로 영향을 미치는지를 알아보고자 야외에서 설사를 발현하는 4개월 이하의 송아지 분변 총 201건를 수거하여 DMSO-modified acid fast 염색법 (MAFS), commercial kit(Meridian Diagnostics, Cincinnati, Ohio) 그리고 본 실험실에서 만 든 단세포군항체(C6)를 이용한 간접형광항체법(IFA)으로 작은와포자충의 검출을 시도하였다. 작 은와포자충의 검출은 MAFS에서 29건(14.4%) commercial kit와 IFA에서 각각 23건씩(11.4%) 검출되었다. 작은와포자충 오오시스트의 검출에 사응된 진단기법간의 진단일치율을 비교 하였던 바 msS를 기준으로 하였을 때 IFA는 민감도 69%. 특이성 98%였다. Commercial kit와 IFA진단법에서는 양성 22건, 음성 177건이 서로 일치하였으며. commercial kit를 기준으로 할 때 IFA의 민감도는 96%, 특이성 99% 고리고 진단일치에 대한 기대치는 99%였다. 따라서 본 실험에 사용된 IFA는 commercialkit와 일치율이 높아 진단목적으로 사용될 수 있을 것으로 생각된다. 한편, IFA에서 작은와포자충이 검출된 23건의 분변에 대해 분변 g당 작은와포자충 오오시스트의 수(OPG)를 측정하였다. 14건이 $10^3$ 이하의 OPG수준을 나타냈으나 $10^5$ 이상의 OPG도 4건이었다. 작은와포자충에 감염되어 설사가 발현될 때의 OPG의 수준이 $10^5$ 이상임을 감안해 보면, 이번 조사된 송아지 설사변 201건 중 4건(5%)은 작은와포자충에 의한 설사로 분석되었다. 이러한 결과를 종합해보면, 국내메서 발생되는 송아지 설사 원인중 약 5%는 설사와 관련되는 다른 원인체와 관계없이 작은와포자충 단독감염만으로도 임상적으로 설사가 발현되고 있는 것으로 판단되었다.

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무기인산염이 외방성 수직골 형성에 미치는 영향 (The effect of polyphosphate on exophytic bone formation)

  • 이진;박준봉;허익;정종혁;권영혁
    • Journal of Periodontal and Implant Science
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    • 제38권1호
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    • pp.59-66
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    • 2008
  • Purpose: It has been shown that the inorganic polyphosphate is effective for the regeneration of bones through the preliminary animal test of rabbits. The most effective concentration of the polyphosphate, however, is not known yet. Moreover, the effectiveness of carriers inside human body is not confirmed.. Materials and Methods: In this study, we examined the effect of the concentration of the inorganic polyphosphate on the process of the bone regeneration using the 6 weeks old rabbits with the weight of 2.0 kg in average. We performed the experiment using TR-ePTFE membrane(membrane) filled with collagen immersed in 4%, 8% of inorganic polyphosphate, respectively, following removal of the proper sized cortical bones from the rabbit calvaria. The experimental results were compared with the one of the following four groups: The negative control group for membrane only, the positive control group for membrane filled with collagen, the first experimental group for membrane filled with collagen immersed in 4% of inorganic polyphosphate, and the second experimental group for membrane filled with collagen immerse in 8% of inorganic polyphosphate. The fragments of the tissue with membrane obtained from each group of the sacrificed rabbits for 8 or 16 weeks sustained after surgery were then prestained by the Hematoxylin-Eosin stain and coated by resin to form non-decalcified specimens for the histologic examination and analysis. New bone formation was assessed by histomorphometric and statistical analysis. Results: 1. All groups have shown better bone regeneration at 16weeks than 8weeks. 2. Negative control group has shown more bone regeneration relative to the other groups at 8 and 16 weeks. 3. All experimental groups have shown better bone regeneration relative to positive control group. 4. At 16 weeks, the first experimental group has shown more bone regeneration compared to the second experimental group. Exophytic bone formation is not good at the first and the second experimental groups compared with negative control group. But, the use of 4% inorganic polyphosphate was more effective to bone formation than the use of 8% inorganic polyphosphate. Conclusion: With above results, it is suggested the use of inorganic polyphosphate with vehicle under TR-ePTFE membrane.

The Protective Effects of Statins towards Vessel Wall Injury Caused by a Stent Retrieving Mechanical Thrombectomy Device : A Histological Analysis of the Rabbit Carotid Artery Model

  • Lee, Seung Hwan;Shin, Hee Sup;Oh, Inho
    • Journal of Korean Neurosurgical Society
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    • 제64권5호
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    • pp.693-704
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    • 2021
  • Objective : Endovascular mechanical thrombectomy (MT) has been regarded as one of the standard treatments for acute ischemic stroke caused by large vessel occlusion. Despite the wide use of stent retrievers for MT, arterial intimal damage caused when deployed stent is pulled has been a certain disadvantage. We hypothesized that statin could protect and stabilize vessel damage after endovascular MT using a stent retriever. In this animal study, we observed the protective effects of the statins towards MT-induced vessel wall injury. Methods : Twenty-eight carotid arteries of fourteen rabbits were used in the experiments with MT using stent retriever. We divided the rabbits into four groups as follows : group 1, negative control; group 2, positive control; group 3, statin before MT; and group 4, statin after MT. After MT procedures, we harvested the carotid arteries and performed histomorphological and immunohistochemical analyses. Results : In histomorphological analysis with hematoxylin and eosin and Masson's trichrome stain, significant intimal thickening (p<0.05) was observed in the positive control (group 2), compared to in the negative control (group 1). Intimal thickening was improved in the statin-administered groups (groups 3 and 4 vs. group 2, p<0.05). We also observed that statin administration after MT (group 4) resulted in a more effective decrease in intimal thickness than statin administration before MT (group 3) (p<0.05). We performed immunohistochemical analysis with the antibodies for tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), cluster of differentiation (CD)11b, and CD163. In contrast to the negative control (group 1), the stained percentage areas of all immunological markers were markedly increased in the positive control (group 2) (p<0.05). Based on statin administration, the percentage area of TNF-α staining was significantly reduced (p<0.05) in group 3, compared to the positive control group (group 2). However, significant differences were not observed for CD11b and CD163 staining. In group 4, no significant differences were observed for TNF-α, CD11b, and CD163 staining (p≥0.05). The differences in the percentage areas of the different markers between the statin-administered groups (groups 3 and 4) were also not revealed. Conclusion : We presented that statin administration before and after MT exerted protective effects towards vessel wall injury. The efficacy of statins was greater post-administration than pre-administration. Thus, statin administration in routine prescriptions in the peri-procedural period is strongly advised.