청국장 제조시 사용되는 균주인 Bacillus sp. SP-KSW3을 메주 제조시 starter로 접종하여 발효시킨 메주를 이용하여 된장을 담근 후 일정기간 숙성시킨 다음 간장을 분리하여 이화학적 성질 등의 변화를 측정하였다. NaCl의 함량은 대조구보다 실험구가 높게 나타났으며, 아미노산도는 실험구보다 대조구가 높게 나타났다. Amylase활성은 대조구가 높게 나타났으며 protease의 활성은 실험구가 약2배 높게 나타났다. Tyrosinase의 저해 활성과 ACE 저해 활성은 숙성 기간이 동일한 경우 대조구 보다 실험구가 약 7% 이상 높은 활성을 나타내었다. 항돌연변이 활성은 2년간 숙성시킨 경우에 실험구가 대조구 보다 높은 활성을 나타내었으며, S. enterica serovar Typhimurium TA100을 사용한 경우 변이원 MNNG와 NPD에 대한 항돌연변이 활성은 각각 35.17%와 28.37%를 나타내었다. 또한, S. enterica serovar Typhimurium TA98을 사용한 경우 변이원 NPD와 NQO에 대한 항돌연변이 활성은 각각 25.48%와 21.64%를 나타내었다. 수소 공여능은 2년간 숙성시킨 실험구가 83.1%로 가장 높게 나타났다. 간장의 isoflavon 중 daidzin은 비슷한 경향을 나타내었으며 genistin은 모두 검출되지 않았다. Aglycone의 일종인 daidzein은 실험구가 각각 3.95 mg/g와 4.62 mg/kg, genistein은 각각 1.25 mg/kg와 3.55 mg/kg으로 나타났다.
참취뿌리의 에탄올 추출물과 용매 분획물에 대한 생리활성 효과를 밝히기 위해 항돌연변이성 및 암세포 성장억제효과를 실시한 결과 에탄올 추출물 자체의 돌연변이성은 없었다. 직접변이원인 N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG)에 대해서는 Salmonella typhimurium TA100의 경우 에탄올 추출물이 79%, 에틸아세테이트 분획물은 82%의 억제효과를 나타내었다. 4-Nitroquinoline-1-oxide(4NQO)에 대해서는 Salmonella typhimurium TA98에서 에탄올 추출물이 48%, 에틸 아세테이트 분획물은 60%의 억제효과를 보였다. 한편 간접 변이원인 benzo(${\alpha}$)pyrene[B(${\alpha}$)P]에 대해서는 에틸아세테이트 분획물의 경우 TA98에서는 78%, TA100에서는 85%의 높은 억제활성을 나타내었다. 그리고 3-amino-1,4-dimethyl-5H-pyrido(4,3-b)indole(Trp-P-1)에 대해서는 TA98에서 89%의 높은 억제효과를 보였다. 한편 참취 에탄올 추출물에 대한 암세포 성장억제 실험에서도 chronic myelogenous leukemia (K562), human gastric carcinoma (KATOIII), human hepatocellular carcinoma (Hep3B) 및 human breast adenocarcioma (MCF-7)에 대하여 높은 세포독성을 나타내었으며 용매 분획물의 경우 KATOIII 세포에서는 모든 분획물이 높은 세포독성을 나타내었으나 그외세포에 대해서는 물분획물을 제외한 에틸아세테이트, 부탄올 및 클로로포름 분획물이 높은 세포독성을 나타내었다.
To confirm the effects of binlang(Areca catechu L.) and tansen(Salvia miltriorrhiza bung) on the mutagenicity induced by hydrogen peroxide, SOS Chromotest with Escherichia coli PQ37 and Ames test with Salmonella typhimurium TA104 were perlormed. Methanol-soluble parts of their water extracts showed high inhibitory effect against the mutagenicity of hydrogen peroxide in two bacterial mutation assays. Step-wise fractionation of methanol-soluble part from tansen was done using ethyl acetate, butanol and water. Among these fraction was further partitioned by Sephadex LH-20 column chromtography, and 6 subfractions were obtained. The fraction III showed the strongest inhibitory effects against the mutagenic activities induced by hydrogen peroxide. The inhibition rates of fraction III at concentration of 500$\mu\textrm{g}$/assay were 28%, 30% and 15% against 4-NQO, MNNG and B(a)P, respectively. But the mutagenic potency of AFB1 was increased.
Zhou, Wei;Quan, Juan-Hua;Gao, Fei-Fei;Ismail, Hassan Ahmed Hassan Ahmed;Lee, Young-Ha;Cha, Guang-Ho
Parasites, Hosts and Diseases
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제56권2호
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pp.135-145
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2018
Due to the critical location and physiological activities of the retinal pigment epithelial (RPE) cell, it is constantly subjected to contact with various infectious agents and inflammatory mediators. However, little is known about the signaling events in RPE involved in Toxoplasma gondii infection and development. The aim of the study is to screen the host mRNA transcriptional change of 3 inflammation-related gene categories, PI3K/Akt pathway regulatory components, blood vessel development factors and ROS regulators, to prove that PI3K/Akt or mTOR signaling pathway play an essential role in regulating the selected inflammation-related genes. The selected genes include PH domain and leucine- rich-repeat protein phosphatases (PHLPP), casein kinase2 (CK2), vascular endothelial growth factor (VEGF), pigment epithelium-derived factor (PEDF), glutamate-cysteine ligase (GCL), glutathione S-transferase (GST), and NAD(P)H: quinone oxidoreductase (NQO1). Using reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR), we found that T. gondii up-regulates PHLPP2, $CK2{\beta}$, VEGF, GCL, GST and NQO1 gene expression levels, but down-regulates PHLPP1 and PEDF mRNA transcription levels. PI3K inhibition and mTOR inhibition by specific inhibitors showed that most of these host gene expression patterns were due to activation of PI3K/Akt or mTOR pathways with some exceptional cases. Taken together, our results reveal a new molecular mechanism of these gene expression change dependent on PI3K/Akt or mTOR pathways and highlight more systematical insight of how an intracellular T. gondii can manipulate host genes to avoid host defense.
솔잎 열수 증류액에 대한 항산화 활성은 $RC_{50}$ 값이 $18.4\;{\mu}L$로서 매우 강한 항산화 활성을 나타내었다. 솔잎 열수 증류액에 대한 항돌연변이 활성은 S. typhimurium TA98과 TA100 균주를 이용한 돌연변이성 실험 결과 솔잎 열수 증류액 자체로서는 변이원성이 없었으며 항돌연변이원성 실험에서는 직접변이원인 WNNG $(0.4\;{\mu}L/plate)$의 경우 S. typhimurium TA100 균주에서 시료농도 $200\;{\mu}L/plate$에서 $45.9\%$의 억제활성을 나타내었으며 4NQO $(0.15\;{\mu}g/plate)$에 대해서는 동일 농도에서 $85.5\%$의 높은 억제활성을 나타내었다. 그리고 간접변이원인 $B(\alpha)P\;(10\;{\mu}g/plate)$에 대해서는 시료농도 $200\;{\mu}g/plate$의 시료농도에서 $88\%$의 높은 억제 활성을 나타내었다. 한편 Trp-P-1 $0.15\;{\mu}g/plate$에 대해서는 $50\;{\mu}g/plate$의 낮은 시료농도에서도 $85\%$의 높은 억제활성을 나타내었으며 모두 농도 의존적으로 억제하는 것으로 나타났다. 솔잎 열수 증류액의 암세포 성장억제효과를 검토한 결과, 폐암세포, 유방암세포에 대해서 각각 $78.7\%$, $62.3\%$의 비교적 높은 억제효과를 보였으며, 특히 위암세포, 자궁암세포, 간암세포에서 각각 $90.8\%,\;93.7\%,\;90.0\%$의 높은 억제효과를 나타내었다.
엉겅퀴 부위별 메탄을 추출 수율을 구한 결과 뿌리 및 잎 추출물은 10% 정도의 수율을 보였으나 줄기 추출물은 2.8%의 낮은 수율을 보였다. 항산화활성 실험 결과 부위별 ethyl acetate 분획물과 butanol분획물에서 강한 항산화 활성을 보였으며, 특히 뿌리의 ethyl acetate 분획물$(RC_{50}:11{\mu}g/m{\ell})$과 butanol 분획물$(RC_{50}:14{\mu}g/m{\ell})$, 잎의 butanol 분획물$(RC_{50}:15{\mu}g/m{\ell})$에서 대조구인 ${\alpha}-tocopherol(RC_{50}:12{\mu}g/m{\ell})$이나 $BHA(RC_{50}:14{\mu}g/m{\ell})$정도의 항산화활성을 보였다. 곰팡이에 대한 포자발아 억제시험에서는 전반적으로 물분획물에서 우수한 활성을 나타냈다. Yeasts에 대한 실험에서는 ethyl acetate 분획물에서 대조구와 유사한 활성을 나타냈다. 박테리아에 대한 항균시험은 역시 ethyl acetate 분획물에서 활성을 나타냈다. Ames test결과 $MNNG(0.4{\mu}g/plate)$의 경우 S. typhimurium TA100 균주에서 시료농도 $1000{\mu}g/plate$에서 핵산 분획물이 88.18%로 가장 높은 억제효과가 나타났다. $4NQO(0.15{\mu}g/plate)$에 대한 S. typhymurium TA98 균주에서 시료농도 $1000{\mu}g/plate$에서는 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 에칠아세테이트 분획물이 77, 75.8%의 억제효과를 나타냈으며, TA100 균주에서도 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 에칠아세테이트 분획물이 72.5, 74.3%의 억제효과를 나타냈다. $Trp-P-1(0.15{\mu}g/plate)$을 사용한 S. typhimurium TA98 균주에서는 시료농도 $1000{\mu}g/plate$에서 엉겅퀴 뿌리 추출물$(1000{\mu}g/plate)$에서 82.25%의 가장 높은 억제효과를 보였으며, TA100균주의 경우, 시료농도 $1000{\mu}g/plate$에서 부탄을 분획물에서 77.75%의 가장 높은 억제효과를 보였다. 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 용매 극성을 이용한 분획물을 대상으로 암세포주에 대한 증식 억제 효과를 실험한 결과, A549, Hep3B, MCF-7 세포주에서 메탄올 추출물이 가장 우수한 억제효과를 나타내었으며 인간유래의 정상 간세포 293에 대하여 시료농도에 따른 세포독성 효과는$1000{\mu}g/ml$ 시료 첨가 시 암세포에 대하여 대부분 60% 전후의 억제율을 보이는데 반해 293에 대해서는 25% 이하의 생육억제율을 보였다. 이는 암세포에 대한 높은 억제효과에 비해 정상세포에 대해서는 비교적 낮은 독성효과를 나타냄을 알 수 있었다.
In vitro antimutagenic activity of methanol extract from brrwn rice and its physico-chemical characteristics were investigated using Salmonella typhimurium reversion assay and SOS chromotest. Methanol extracts of brown rice were not mutagenic compared with direct and indirect, mutagenicities of 4NQO (4-nitroquinoline oxide), 2NF(2-nitrofluorene), Trp-p-1(3-Amino-1,4-dimethyl-5H-pyrido-[4,3-b]indole), and Trp-p-2(3-Amino-1-methy-5H-pyrido-[4,3-b]indole). Antimutagenic activity against the indirect mutagenicties induced by Trp-p-1, Trp-p-2 and AFB1 (aflatoxin B1) was found in methanol extract. Even though antimutagenic activity showed dose-dependent, it remained constant at inhibition rate ranging 60~90% when the concentration was abov 3mg/plate in the S. typhimurium reversion assay and 0.2~0.6 mg/assay in the SOS chromotest. The antimutagenic activity of the methanol extracts was stable at various pH (2, 7 and 10), temperatures (60, 80 and 10$0^{\circ}C$)and heation times (2, 4, 6, 8, 10 min at 10$0^{\circ}C$).
Kim, Youn-Jung;Song, Mi-Kyung;Song, Mee;Ryu, Jae-Chun
Molecular & Cellular Toxicology
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제3권4호
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pp.231-237
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2007
Exposure to DNA-damaging agents can elicit a variety of stress-related responses that may alter the expression of genes associated with numerous biological pathways. We used 19 k whole human genome chip to detect gene expression profiles and potential signature genes in human normal hepatocytes (THLE-3) by treatment of five direct acting mutagens, furylfuramide (AF-2), N-nitroso-N-methylurea (MNU), methylmethanesulfonate (MMS), 4-nitroquinoline-N-oxide (4-NQO) and 2-nitrofluorene (2NF) of the $IC_{20}$ concentration for 3 h. Fifty one up-regulated common genes and 45 down-regulated common genes above 1.5-fold by five direct-acting mutagens were identified by clustering analysis. Many of these changed genes have some association with apoptosis, control of cell cycle, regulation of transcription and signal transduction. Genes related to these functions, as TP73L, E2F5, MST016, SOX5, MAFB, LIF, SII3, TFIIS, EMR1, CYTL1, CX3CR1 and RHOH are up-regulated. Down-regulated genes are ALOX15B, xs155, IFITM1, BATF, VAV2, CD79A, DCDC2, TNFSF8 and KOX8. We suggest that gene expression profiling on mutagens by toxicogenomic analysis affords promising opportunities to reveal potential new mechanistic markers of genotoxicity.
Various lactic acid bacteria were isolated from Korean Kimchi in order to study their antimutagenic substances. Ames test using Salmonella typhimurium TA98 and TA100 showed the strain KLAB21 to have the highest antimutagenic activity among the 230 isolated strains against MNNG (N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine), NPD (4-nitro-O-phenylenediamine), NQO (4-nitrosoquinoline-1-oxide) and AFB1 (aflatoxin B1). The strain was identified as Lactobacillus plantarum based on its morphological, cultural and physiological characteristics. Antimutagenic activity of L. plantarum KLAB21 was found in culture supernatant suggesting the bacterium secrete antimutagenic substance in the media. No mutagenic activity was found in the culture supernatant. The isolated strain L. plantarum KLAB21 showed much higher antimutagenic activity than L. plantarum IAM1261 which is being used industrially for fermented milk production. The antimutagenic activity of L.plantarum KLAB21 was reconfirmed by the spore-rec assay using spores of Bacillus subtilis H17($Rec^+$) and M45($Rec^-$).
목적: Cinnamic acid의 유도체들중에서 항돌연변이 효과가 보고된 바 있어, 본 연구에서는 E. coil PQ37균주를 사용한 SOS chromotest를 이용하여 약 170개 cinnamic acid의 유도체들의 항돌연변이 효과를 확인하고자 하였고, 1차로 확인된 수종의 유도체들에 대한 결과를 보고하고자 한다. 방법: SOS chromotest는 sul A:: lacz fusion strain 인 E. coli PQ37 에서의 chemical로 인한 DNA damage에 대한 SOS response를 $\beta$-galactosidase enzyme activity level로서 측정하는 실험이며, m-RNA 또는 protein synthesis에 대한 test chemicals의 cytotoxic저해효과를 알아보기 위하여 alkaline phosphatase를 병행측정하여 보완하였다. 결과 및 고찰: (-)S-9 경우는 4-nitroquinoline 1-oxide(4-NQO)를 유도물질로 하였으며 대략 Induction factor가 9.7 정도였고, (+)S-9의 경우는 aflatoxinB$_1$을 유도물질로 하였고 이때의 Induction factor는 13.8 정도였다. 이결과 1차로 test된 cinnamic acid유도체 6개중에서 RK001, RK002, RK003, RK004, RK005는 거의 항돌연변이 효과를 나타내지 않았으나, RK006은 항돌연변이 효과를 보여주어 이들의 Structure-Activity Relationship (SAR) 및 Dose-response와 RK006의 항돌연변이 효과의 mechanism에 관해 M13 mp2 viral DNA의 유전자 염기서열을 이용하여 항돌연변이 기전연구를 수행중이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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