키토산 분해물을 시금치와 상추에 살포하였을 때, nitrate 함량이 감소되었으며, 이러한 감소는 nitrate reductase 활성의 증가에 기인한 것으로 나타났다. 이에 따라 채소 중 질산염을 가장 많이 축적하는 채소 중 하나인 시금치의 nitrate reductase를 식물체내에 과량 발현시켜 질산염 축적을 줄이기 위한 연구를 수행하였다. 첫 단계로 시금치 mRNA로부터 RT-PCR을 이용하여 cDNA를 분리, 증폭하고 벡터에 클로닝하여 염기서열을 결정하였다. 시금치 nitrate reductase cDNA의 염기서열은 다른 식물체에서 분리된 nitrate reductase 유전자들과 상당히 높은 상동성($71{\sim}82%$)을 보였고, 이미 발표된 시금치 nitrate reductase cDNA의 염기서열과 비교하였을 때 단지 두 염기만이 달랐다.
This work was carried out to determined the effect of 2,4-dinitrophenol(DNP) on in vivo nitrate reductase activity in the root of 6 day old rye (Secale cereale L.) seedlings. The nitrate reductase activity in the roots of 6 day old rye seedlings pretreated with 0.5 mM DNP was higher than that of the control group in all the experimental conditions. The optimal concentration of KNO3 for maximum nitrate reductase activity was 10 mM in both control and treated group. The nitrate reductase activity in the treatment of 10 mM KNO3 gradually increased for 4 h in both groups, and then maintained constantly. The nitrate reductase activity occurred per hour was highest at 1 h in both groups, while it was declined by large degrees as time goes on. The daily pattern of nitrate reductase activity was gradually decreased in both groups with the passage of day. The optimal pH for this experiment and a previous paper (Kwon et al., 1991), it was determined that the nitrate reductase activity in both roots and shoots of rye seedlings was increased by the treatment of 0.5 mM DNP, and particulary in both groups, the nitrate reductase activity in the roots of rye seedlings was higher than that in shoots of them.
Effects of artificial electron donors to deliver reducing power on enzymic denitrification were investigated using nitrate reductase and nitrite reductase obtained from Ochrobactrum antroyi. The activity of nitrite reductase in the soluble portion was almost the same as that in the precipitated portion of the cell extract. Nitrate removal efficiency was higher with benzyl viologen than with methyl viologen or NADH as an artificial electron donor. The turn-over numbers of nitrate and nitrite reductase were 14.1 and 1.9 umol of nitrogen reduced/min$.$mg cell extracts, respectively when benzyl viologen was used as an electron donor.
알팔파 방목형 품종 Victoria와 건초형 품종 Vernal을 공시하여 실산태 새소 농도 0,2,4,8, 12mM의 다섯 수준으로 급여하여 파종 6주후 초기 생육시기에 지상부 부위별과 뿌리혹 건물증, 엽중 질산태 질소 환원 능력 및 축적 정도를 조사하였으며, 그 결과는 다음과 같이 요약된다. 1. $NO_3$ ̄ 수준이 높아짐에 따라 지상부 건물중이 증가하였으나 NO($NO_3$)  ̄ 의 8mM과 12mM간의 차이는 없었다. 2. 두 품종 모두 8mM 이상의 NO$_3$ ̄ 수준에서 뿌리혹 착생이 현저히 억제되었다. 3. 엽 생체중당 nitrate reductase 활성은 $NO_3$ ̄ 수준이 증가함에 따라 높아졌으나 4mM이상에서는 차이가 크지 않았다. 4. 엽중 질산태 질소축적은$NO_3$ ̄ 의 12mM 처리시 크게 증가하였다.
Zoysia japonica를 부위별로 나누어서 그들간의 amylase와 nitrate reductase의 활성을 조사한 결과는 다음과 같다. 1. Amylase의 활성은 관부에서 8.36~9.46 unit/mg.rotein/hr.로 가장 높았고 이삭에서 2.04 unit/mg.rotein/hr.로 가장 낮았다. 포복경, 뿌리, 잎에서의 amylase의 활성을 각각 5.42~5.82, 3.76, 2.32~3.16 unit/mg.rotein/hr.나타내었다. 2. Nirate reductase의 활성은 빛을 많이 받는 잎에서 0.35~0.66 n mole/mg.rotein/hr.로 가장 높았고 관부에서 0.06~0.10 n mole/mg.rotein/hr.로 가장 낮았다. 이삭과 포복경에서는 각각 0.31,0.27~0.63 n mole/mg.rotein/hr.를 나타내었다. 이러한 결과로부터 저장기관인 관부나 관부 절간에서 높은 amylase의 활성을 이용하여, 양분을 이삭으로 이동시키고 있음을 알 수 있었다. nitrate reductase의 활성은 chloroplast를 갖지 않는 기관보다 광합성기관에서 더 높았다. 잔디밭에서 같이 사는 크로버와 비교해 보면 amylase의 활성이 Zoysia japonica보다 2배가량 더 높았다. 이러한 결과로부터 잔디밭에서 크로버가 더 생장력이 큼을 알 수 있었다.
질산염은 많은 유전자의 발현을 조절하고 생장과 발육과정에서 매우 중요한 영양소이자 시그널 분자이다. 본 연구는 고등식물에서 질산 신호에 의한 유전자발현제어 관련 전사인자의 연구현황을 소개하고자 한다. 질산 환원 효소는 질소 동화 경로상의 효소이며, 질산이온을 아질산이온으로 환원하는 과정을 촉매한다. 질산이온, 빛, 대사산물, 식물호르몬, 저온, 가뭄 등의 여러 요인이 질산환원효소 유전자의 발현 수준과 생리적 역할과 같은 질산환원효소 활성을 조절한다. 최근 질산 환원 효소 유전자의 발현제어에 관여하고 있는 몇몇 전사인자들이 식물에서 분리되었다. NODULE-INCEPTION-like proteins (NLPs)는 질산 환원 효소 유전자의 질산 유도성 발현에 관여하는 전사인자이다. NLPs는 질산 수송체, 아질산 수송체, 아질산 환원 효소에 관련된 유전자의 질산 유도성 발현을 제어한다. 질산 환원 경로와 관련된 유전자의 발현 수준은 질산에 반응하여 NLPs에 의해 협조적으로 조절된다. 따라서 식물에서 질산염의 기능을 이해하면 질소 사용량이 적은 작물을 육성할 수 있다.
High rates of nitrogen fertilization dangerously increase the nitrate content of vegetable crops, and the accumulation of nitrate in edible crops is undesirable because of potential risks to human health. Micronutrient solution containing Cu, Mn, Mo, Zn was tested for the suppression of nitrate accumulation in lettuce grown in pots treated with Mg fertilizer under a greenhouse condition. The micronutrient solution was sprayed on leaves at 3 and 4 weeks after transplanting of 20-day old seedlings. Plants were harvested after 5-week growth, and yield, contents of chlorophyll, sugar, micronutrient and nitrate, and also nitrate reductase activity were measured. Fresh weight of lettuce was significantly increased by the application of Mg and micronutrients, and the effect was the most significant in the Mg+micronutrient treatment. Also contents of chlorophyll and micronutrients were higher in the plants of micronutrient treatments. Contents of nitrate were reduced by about 14-18% in lettuce with Mg and/or micronutrient applications. Compared to the plants of control treatment, nitrate reductase activity was also higher in those plants treated with micronutrients, and in the treatment of Mg+micronutrients the enzyme activity was six times as high as that of control treatment. Although the effect of mineral nutrients on the suppression of nitrate accumulation in lettuce was relatively small in this study, an appropriate supply of mineral nutrients could be one of the solutions for the nitrate accumulation in vegetables.
In this study, we have purified and characterized the membrane bound nitrate reductase obtained from the denitrifying bacteria, Ochrobactrum anthropi SY509, which was isolated from soil samples. O. anthropi SY509 can grow in minimal medium using nitrate as a nitrogen source. We achieved an overall purification rate of 15-fold from the protein extracted from the membrane fraction, with a recovery of approximately 12% of activity. The enzyme exhibited its highest level of activity at pH 5.5, and the activity was increased up to $70^{\circ}C$. Periplasmic and cytochromic proteins, including nitrite and nitrous oxide reductase, were excluded during centrifugation and were verified using enzyme essay. Reduced methyl viologen was determined to be the most efficient electron donor among a variety of anionic and cationic dyestuffs, which could be also used as an electron donor with dimethyl dithionite. The effects of purification and storage conditions on the stability of enzyme were also investigated. The activity of the membranebound nitrate reductase was stably maintained for over 2 weeks in solution. To maintain the stability of enzyme, the cell was disrupted using sonication at low temperatures, and enzyme was extracted by hot water without any surfactant. The purified enzyme was stored in solution with no salt to prevent any significant losses in activity levels.
Nitrate reductase activity(nra) were analysed in roots, stems and leaves plants in relation to different nitrogen sources and plastochron ages. Nra in roors and stems of soybean observed no differences in influence the nitrogen sources and plastochron ages, and the values showed to be only 5% of NRA in leaves. On the other hand,NRA in the leaves showed different result to nitrgen sources and plastochron ages. When the plants were less than PI6.0, NRA in leaves had being proportional to the concentration of nitrate and distingush decreased with an increasing plastochron age. At the later stage, upper than PI 8.0, the actvity had not effect to nitrate and plastochron ages. These results indicated that nitrate reduction in soybean was in early leaves.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제7권1호
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pp.45-49
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2003
Foliar treatment with different concentrations of potassium chloride (KCl) to mulberry plants resulted in higher level of total chlorophyll, total sugars, soluble protein, in vivo nitrate reductase activity (NRA), net photosynthetic rate (NPR), pWUE and leaf yield. Optimal concentration was found to be 10.0 mM KCl with limited irrigation provided in the mulberry plantation planted in 90 ${times}$ 90 cm spacing. The deleterious effect of soil moisture stress condition has been found to be overcome by KCl foliar spray twice at 15 days interval. Regression and correlation coefficients were analyzed, and a strong positive correlation was found between chlorophyll and total sugars, soluble protein and in vivo nitrate reductase activity, leaf dry weight and net photosynthetic rate and pWUE and net photosynthetic rate.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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