• Molecules and Cells
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• 제37권3호
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• pp.248-256
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• 2014

N-acetylglucosamine kinase (GlcNAc kinase or NAGK; EC 2.7.1.59) is a N-acetylhexosamine kinase that belong to the sugar kinase/heat shock protein 70/actin superfamily. In this study, we investigated both the expression and function of NAGK in neurons. Immunohistochemistry of rat brain sections showed that NAGK was expressed at high levels in neurons but at low levels in astrocytes. Immunocytochemistry of rat hippocampal dissociate cultures confirmed these findings and showed that NAGK was also expressed at low levels in oligodendrocytes. Furthermore, several NAGK clusters were observed in the nucleoplasm of both neuron and glia. The overexpression of EGFP- or RFP (DsRed2)-tagged NAGK in rat hippocampal neurons (DIV 5-9) increased the complexity of dendritic architecture by increasing the numbers of primary dendrites and dendritic branches. In contrast, knockdown of NAGK by shRNA resulted in dendrite degeneration, and this was prevented by the co-expression of RFP-tagged NAGK. These results suggest that the upregulation of dendritic complexity is a non-canonical function of NAGK.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제21권8호
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• pp.1127-1133
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• 2008

This study was designed to develop a method of liquid storage of boar sperm at $4^{\circ}C$ by using the modified Beltsville F5 (BF5) diluent with bovine serum albumin (BSA) and N-acetyl-D-glucosamine. Boar sperm were stored in lactose-egg yolk and N-acetyl-D-glucosamine (LEN), BF5 and Golden-Pig liquid 4 (GPL4) diluents at $4^{\circ}C$ for 5 days and were examined for sperm viability, adenosine triphosphate (ATP) and in vitro fertilization (IVF). The percentage of sperm viability in GPL4 diluent was higher than in LEN and BF5 diluent from 1 to 5 days of storage at $4^{\circ}C$. The percentage of sperm viability steadily declined from 1 to 5 days of storage in the three different diluents. Sperm ATP in GPL4 diluent was higher than in LEN and BF5 diluents from 1 to 5 days of storage. Sperm ATP rapidly declined after 5 days of storage in the three different diluents. Porcine oocytes matured in vitro were inseminated with different sperm concentrations of liquid semen stored for 3 days in GPL4 diluent. The percentage of monospermic oocytes did not show any differences from 2.5 to $20{\times}10^5$ sperm/ml. However, the percentage of polyspermic oocytes in the sperm concentration of $2.5{\times}10^5$ sperm/ml was lower than in concentrations of 5, 10 and $20{\times}10^5$5 sperm/ml. The percentage of blastocysts from the cleaved oocytes at $2.5{\times}10^5/ml$ sperm concentration was significantly lower than at 5, 10 and $20{\times}10^5sperm/ml$ concentrations. In conclusion, GPL4 diluent can be stored at $4^{\circ}C$ for 5 days and showed higher sperm viability and sperm ATP concentration compared with LEN and BF5 diluents. Also, we found that GPL4 diluent can be used for IVF of porcine oocytes.

• 한국환경농학회지
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• 제14권3호
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• pp.319-328
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• 1995

잿빛곰팡이병균(Botrytis cinerea)의 procymidone약제 저항성 발현 요인을 구명하기 위하여 procymidone 약제 저항성과 감수성 균주를 각각 세균주씩 선발하여 약제 저항성 검정과 아울러 세포구성물질의 함량 및 조성을 조사한 결과를 요약하면 아래와 같다. 1. 공시균주의 약제 저항성 검정 결과 저항성이 감수성균주에 비하여 1,000배 이상의 저항성이 발현된 것으로 확인되었다. 2. Monooxygenase저해제인 piperonyl butoxide와 esterase 저해제인 triphenyl phosphate를 PDA 배지에 처리한 후 균사생육을 조사한 결과 저항성과 감수성균주간에 차이가 없어 저항성은 균체의 내적요인에서 기인된 것으로 판단되었으며, 아울러 procymidone과 혼합 처리시 약효 상승 효과는 확인되지 않았다. 3. 스테롤 조성은 저항성과 감수성 균주 모두 유사하였으며, GC/MS 분석결과 분자량 428의 스테로이드계 화합물이 비슷한 함량으로 존재하였다. 4. 지질함량은 저항성이 감수성균주에 비하여 30% 정도 많았고, 지방산 함량은 저항성균주의 경우 palmitic acid와 stearic acid가 약 2.5배, oleic acid 2.9배, 그리고 linoleic acid가 공시균주의 주된 지방산으로 나타났으며, 2배 정도 많은 함량을 보였다. 5. 조키틴 함량은 감수성균주가 저항성에 비하여 0.11% 많았으나, 이의 가수분해산물인 N-acetyl glucosamine함량은 저항성균주가 감수성에 비하여 반응 24시간에 3배 그리고 48시간에서 2배 많았다. 따라서 잿빛곰팡이병균(Botrytis cinerea)의 procymidone 약제 저항성은 lipid 함량의 증가, fatty acid 함량의 증가 및 조성의 변화 그리고 키틴 전구물질인 GlcNAc 함량과의 복합적인 요인에 의하여 발현되었을 것으로 판단되었다.

• 생명과학회지
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• 제12권1호
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• pp.77-86
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• 2002

토양으로부터 chitinase를 생성하는 균주를 분리하여 동정한 결과 Bacillus subtilis로 판명되었으며, 분리한 균주를 Bacillus subtilis JK-56이라 명명하였다. B. subtilis JK-56의 chitinase 생산 최적 조건을 검토한 결과 1% chitin, 0.5% polypeptone, 0.1% KCI, 0.05% MnS $O_4$.4$H_2O$이며 초발 pH 7.0, 배양온도 37$^{\circ}C$에서 가장 많은 효소를 생산하였다. 본 균주가 생산하는 chitinase를 정제하기 위해서 native-PAGE를 이용해 효소활성 band를 확인한 결과, 1개의 강한 활성 band와 2개의 약한 활성 band를 가지는 isozyme으로 확인되었다. 확인된 isozyme을 정제한 결과, isozyme 중 1개의 강한 활성 band를 정제하였고 정제된 효소를 Chi-56A라고 명명하였다 Chi-56A의 효소 특성에 관해서 실험한 결과 분자량은 약 53kDa, pI는 4.3으로 확인되었다. 본 효소는 $65^{\circ}C$까지 상당히 안정하였으며 효소의 최대활성 온도도 $65^{\circ}C$로 확인되는 등 열에 대해 상당히 안정한 효소로 확인되었다. Collidal chitin에 대한 정제효소 Chi-56A의 $K_{m}$ 값은 17.33g/L였다. 그리고 pH 6.0에서 최대의 활성을 나타내었고, 산성범위보다 알칼리범위에서 안정한 것으로 나타났다. 또한 $Mn^{2+}$ 존재 하에서 높은 활성을 나타내었고 C $O^{2+}$와 $Mg^{2+}$ 존재 하에서도 활성이 약간 증가한 반면에 H $g^{2+}$ 존재 하에서는 상당한 저해를 받았다. Chito 올리고당에 대한 분해 산물을 HPLC로 확인해 본 결과 짝수개의 올리고당의 분해산물은 (GlcNAc)$_2$만을 생산하였고 홀수개의 올리고당에 대해서는 GlcNAc와 (GlcNAc)$_2$를 생산하는 것으로 비환원성 말단으로부터 이당체인 diacetyl chitobiose ((GlcNAc)$_2$)를 생산하는 exo형 chitinase로 추정 된다.

• 한국토양비료학회지
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• 제40권6호
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• pp.442-446
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• 2007

토양에 고정되어 축적된 난용성 인산염을 가용화하는 유용세균을 선발하여 생물비료로 이용하고자 고추, 토마토, 상추, 오이, 목초, 잔디의 근권토양 및 뿌리표면에서 인산가용화능이 있는 세균을 분리하였다. 선발된 인산가용화균은 16S rRNA 염기서열과 생화학적특성 등에 의해 동정되었으며, 난용성인산 가용화기능이 우수한 세균 Pseudomonas sp. CL-1 및 Kluyvera sp. CL-2균주를 선발하였다. Pseudomonas sp. CL-1균주는 esculin과 gelatin, casein을 가수분해하였고, 그리고 glucose, arabinose, mannose, mannitol, N-acetyl-glucosamine, gluconate, caprate, adipate, malate, citrate 등을 이용하였다. Kluyvera sp. CL-2 균주는 esculin과 CM-cellulose를 가수분해 하였고 acetoin을 생성하였다. 그리고 glucose, arabinose, mannose, mannitol, N-acetyl-glucosamine, maltose, gluconate, malate, citrate 등을 이용하였다. Pikovskaya's medium에서 선발균주의 난용성인산 $Ca_3(PO_4)_2$의 인 가용화량을 정량한 결과 Pseudomonas sp. CL-1과 Kluyvera sp. CL-2 균주는 접종후 1일, 3일에 각각 148.0, $193.4(P\;mg\;L^{-1})$와 482.8 mg, 493.6 mg의 인 가용화량을 나타내었다

• 식물병연구
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• 제17권2호
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• pp.129-135
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• 2011

키토산은 D-glucosamine과 N-acetyl-D-glucosamine이 ${\beta}$-(1-4)로 연결된 직선상의 다당류이다. 분자량이 3,000 amu 이상인 키토산에 대한 in vivo 항균활성 및 저항성 유도 활성에 대한 보고는 많지만, 분자량이 3,000 이하인 올리고키토산에 대한 in vivo 항균활성에 대한 논문은 거의 전무한 상태이다. 본 연구에서 올리고키토산은 P. infestans에 의해 발생하는 토마토 역병에 대하여 500 ${\mu}g$/ml과 1,000 ${\mu}g$/ml 수준에서 94% 이상의 매우 높은 접종 1일전 예방효과를 보였으며, 고추 탄저병과 밀 붉은녹병에 대해서는 500 ${\mu}g$/ml과 1,000 ${\mu}g$/ml 수준에서 67% 내지 89%의 중간 정도의 에방효과를 항온항습실 조건에서 보였다. 다른 한편으로 올리고키토산은 고추 탄저병에 대하여 접종 16시간 후 치료효과를 보였지만, 토마토 역병에 대해서는 치료효과를 전혀 보이지 않았다. 포장에서 올리고키토산 액제는 감자 역병과 토마토 역병에 대하여 각각 72%와 48%의 방제효과를 보였다. 이상의 결과는 올리고키토산이 감자 및 토마토 역병 방제를 위한 친환경 유기농자재로서 사용이 가능하다는 것을 강력하게 나타낸다.

• 농약과학회지
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• 제4권2호
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• pp.63-68
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• 2000

담배거세미나방(Spodoptera litura)에서 [$^{14}C$] 표지된 N-acetyl glucosamine, UDP-N-acetylglucosamine을 이용하여 신규살충제 DBI-1015와 DBI-3204의 살충 mechanism을 조사하였다. 담배거세미나방의 표피에 incorporation 되어진 방사논의 양은 신규살충제의 농도에 따라 함수관계를 나타내었다 In vivo실험에서 [$^{14}C$] N-ncetylslucosamine에 대한 DBI-1015, DBI-3204와 diflubenzuron의 $I_{50}$ (ppm)값은 각각 0.57, 0.89, 0.26 ppm을 나타내었으며, [$^{14}C$] UDP-N-acetylglucosamine의 $I_{50}$ (ppm)값은 각각 0.99, 0.53, 0.45 ppm을 나타내었다. 표피절편을 이용한 in vitro 실험에서 표피에 incorporation된 [$^{14}C$] N-acetylglucosamine과 [$^{14}C$] UDP-N-acetylglucosamine의 양은 적었지만, $2{\mu}M$ 농도에서 무처리구에 비해 $40{\sim}60%$ 억제되었다.

• 대한화장품학회지
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• 제44권4호
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• pp.447-453
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• 2018

아세틸 헥사펩타이드 8 (AH8)은 보톡스 메커니즘을 응용한 주름 개선 펩타이드 소재로, 보톡스의 타겟인 synatosomal-associated protein 25 (SNAP25) N말단 서열을 모방하여 개발되었다. 주름 개선 효과가 보고되고 있지만 큰 분자량과 친수성 성질에 의하여 피부 흡수는 잘 되지 않는다는 문제가 있다. 따라서 피부보습 성분 중에서 AH8의 피부 흡수를 증가시켜 줄 수 있는 물질을 탐색하였는데, 히알루론산(HA)이 AH8의 피부 흡수를 증가시켰다. 형광물질로 표지한 AH8만 $Micropig^{(R)}$ skin 에 발라주면 대부분 각질을 투과하지 못하고 각질층에 존재하였다. 반면, HA를 함께 도포한 경우에는 각질층을 투과하여 표피, 진피로 흡수된 AH8가 증가하는 것을 형광 이미지 분석을 통해 확인했다. 특히 5 kDa 저분자량 HA가 500 kDa, 2000 kDa HA보다 피부 흡수를 더 많이 증가시켰다. HA가 피부 각질층에 미치는 영향을 푸리에변환 적외 분광법(Fourier-transform infrared spectroscopy, FTIR)으로 분석해보니, 고분자량 HA는 각질 수분 함량을 증가시키고, 저분자량 HA는 지질층의 유동성을 증가시키는 경향성이 있었다. 따라서 HA는 AH8의 피부 흡수를 증가시켜 주름 개선 효과를 향상시켜 줄 수 있을 것으로 기대된다.

• Molecules and Cells
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• 제19권3호
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• pp.398-401
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• 2005

The bacterial enzyme UDP-N-acetylglucosamine enolpyruvyl transferase catalyzes the first committed step of peptidoglycan biosynthesis, i.e., transfer of enolpyruvate from phosphoenolpyruvate to UDP-N-acetyl-glucosamine. We have overexpressed the enzyme from Haemophilus influenzae in Escherichia coli and crystallized it in the apo-form, as well as in a complex with UDP-N-acetylglucosamine and fosfomycin using ammonium sulfate as the precipitant. X-ray diffraction data from a crystal of the apo-form were collected to $2.8{\AA}$ resolution at 293 K. The crystal quality was improved by co-crystallization with UDP-N-acetylglucosamine and fosfomycin. X-ray data to $2.2{\AA}$ have been collected at 100 K from a flash-frozen crystal of the complex. The complex crystals belong to the orthorhombic space group I222 (or $I2_12_12_1$) with unit-cell parameters of a = 63.7, b = 124.5, and $c=126.3{\AA}$. Assuming a monomer of the recombinant enzyme in the crystallographic asymmetric unit, the calculated Matthews parameter ($V_M$) is $2.71{\AA}^3Da^{-1}$ and solvent content is 54.6%.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제21권5호
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• pp.521-526
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• 1998

The physicochmical properties of recombinant hepatitis B surface antigen (r-HBsAg), which was expressed in C127 mammalian cell were studied. Using roller bottle culture in DMEM supplemented with fetal bovine serum, 10-15 mg/L of r-HBsAg was produced with about 31% of purification yield. The purity of r-HBsAg by HPLC was 99.8% and electron microscopic examination showed homogeneous spherical particle with 22 nm in diameter, a morphological characteristic of HBsAg. The density of r-HBsAg by CsCI density gradient method was 1.19g/ml and the isoelectric point by Mono $P^{TM}$ HR 5/20 column was 4.6. The analysis of subunit protein pattern using SDS-PAGE followed by scanning densitometry gave 81.3% of S protein and 18.7% of pre-S protein. fluorophore-assisted-carbohydrate-electrophoresis analysis showed the relative amount of carbohydrate to protein was 1.7% and it smajr component was N-acetyl glucosamine, which was about 39% of total carbohydrate. The relative amount of lipid to protein determined by vanillin phosphoric acid method was 32.5% and its major component was phospholipid, which was about 70% of total lipid. The physicochemical properties of C127 mammalian cell-derved r-HBsAg are similar to those of p-HBsAg, suggesting that the r-HBsAg can be used in developing a new preventive vaccine against hepatitis B.