To make the genomic DNA probe of Theileria sergenti, the merozoites were purified from bovine erythrocytes. The infected erythrocytes were lysed by Aeromonas hydrophila(Ah-1) hemolysin, and the parasites were isolated by ultracentrifugation on a Percoll discontinuous density gradient. For construction of a T sergenti genomic DNA library, T sergenti DNA was digested with Pstl and the fragments were ligated into the PstI site of pUC19 before transformation of Escherichia coli JM83. Out of thousands of transformants obtained by transformation of E coli JM83 with the genomic library, three plasmids were chosen. The sizes of the inserted DNAs were 2.9kb(2.4kb and 0.5kb) in pKTS1, 4.3kb in pKTS2 and 1.5kb in pKTS3, respectively. The DNA fragments used as probe KTS1(2.4kb), KTS2(4.3kb) and KTS3(1.5kb) were labeled digoxigenin-11-dUTP for the Southern hybridization. In Southern hybridization, all of the probes(KTS1, KTS2 and KTS3) reacted specifically to T sergenti DNA, but not to bovine leucocyte DNA. In order to find out the sensitivities of the digoxigenin-11-dUTP-labeled KTS1 and KTS3 as the probes, purified merozoite DNA and bovine DNA (control) were checked by dot blot hybridization with the probes. Both of the probes, KTS1 and KTS3, detected as minimum amount of 975pg of the T sergenti DNA, but not bovine DNA even to 500ng.
Ji hoon KANG;Sang Min SHIN;Young Si PARK;Hea Ji KIM;Hwa Youn JANG
Korean Journal of Clinical Laboratory Science
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v.56
no.2
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pp.147-155
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2024
Gallium-68-prostate-specific membrane antigen-11 (68Ga-PSMA-11) is a positron emission tomography radiopharmaceutical that labels a Glu-urea-Lys-based ligand with 68Ga, binding specifically to the PSMA. It is used widely for imaging recurrent prostate cancer and metastases. On the other hand, the preparation and quality control testing of 68Ga-PSMA-11 in medical institutions takes over 60 minutes, limiting the daily capacity of 68Ge/68Ga generators. While the generator provides 1,110 MBq (30 mCi) nominally, its activity decreases over time, and the labeling yield declines irregularly. Consequently, additional preparations are needed, increasing radiation exposure for medical technicians, prolonging patient wait times, and necessitating production schedule adjustments. This study aimed to reduce the 68Ga-PSMA-11 preparation time and optimize the automated synthesis system. By shortening the reaction time between 68Ga and the PSMA-11 precursor and adjusting the number of purification steps, a faster and more cost-effective method was tested while maintaining quality. The final synthesis time was reduced from 30 to 20 minutes, meeting the standards for the HEPES content, residual solvent EtOH content, and radiochemical purity. This optimized procedure minimizes radiation exposure for medical technicians, reduces patient wait times, and maintains consistent production schedules, making it suitable for clinical application.
Galaxies are known to evolve passively in the cluster environment. Indeed, much evidence for HI stripping has been found in cluster galaxies to date, which is likely to be connected to their low star formation rate. What is still puzzling however, is that the molecular gas, which is believed to be more directly related to star formation, shows no significant difference in its fraction between the cluster population and the field galaxies. Therefore, HI stripping alone does not seem to be enough to fully understand how galaxies become passive in galaxy clusters. Intriguingly, our recent high resolution CO study of a subsample of Virgo spirals which are undergoing strong ICM pressure has revealed a highly disturbed molecular gas morphology and kinematics. The morphological and kinematical peculiarities in their CO data have many properties in common with those of HI gas in the sample, indicating that strong ICM pressure in fact can have impacts on dense gas deep inside of a galaxy. This implies that it is the molecular gas conditions rather than the molecular gas stripping which is more responsible for quenching of star formation in cluster galaxies. In this study, using multi transitions of 12CO and 13CO, we investigate the density and temperature distributions of CO gas of a Virgo spiral galaxy, NGC 4402 to probe the physical and chemical properties of molecular gas and their relations to star formation activities.
We present the results from our comparisons of HCN and HCO+ (J=4-3) with HI and $H_2$ gas in NGC 6946, a sample from a mapping study of the dense molecular gas in the strongest star-forming galaxies (MALATANG). The MALATANG is one of the JCMT legacy surveys on the nearest 23 IR-brightest galaxies beyond the Local Group, which aims to study the relations of dense molecular gas with more general cool gas such as atomic and molecular hydrogen gas, and star formation properties in active galaxies. In this work, we particularly focus on the comparisons between the JCMT HCN/HCO+ (J=4-3) data and the THINGS HI/the NRO CO (J=1-0) data. We probe the dense molecular gas mass as a function of HI and $H_2$ mass in different locations in the central ${\sim}1.5kpc^2$ region. We discuss how the excess/deficit of $HI/H_2$ or total cool gas ($HI+H_2$) mass controls the presence and/or the fraction of dense molecular gas.
All-optical switching has been demonstrated in bacteriorhodopsin (bR) based on nonlinear intensity induced excited state absorption. The transmission of a cw probe laser beam at 410 nm corresponding to the peak absorption of M state through a bR film is switched by a pulsed pump laser beam at 570 nm that corresponds to the maximum initial 8 state absorption. The switching characteristics have been analyzed using the rate equation approach considering all the six intermediate states (B, K, L, M, N and 0) in the bR photocycle. The switching characteristics are shown to be sensitive to life time of the M state, absorption cross-section of the 8 state at probe wavelength ($\sigma$$\_$Bp/) and peak pump intensity. It has been shown that the probe laser beam can be completely switched off (100 % modulation) by the pump laser beam at relatively low pump powers, for $\sigma$$\_$Bp/ = O. The switching characteristics have been used to design all-optical NOT, OR, AND and the universal NOR and NAND logic gates for optical computing with two pulsed pump laser beams.
A rapid method for the detection of Hepatitis E Virus (HEV) was developed by utilizing nano-gold labeled oligonucleotide probes, silver stain enhancement and the microarray technique. The 5'-end -$NH_2$ modified oligonucleotide probes were immobilized on the surface of the chip base as the capture probe. The detection probe was made of the 3'-end -SH modified oligonucleotide probe and nano-gold colloid. The optimal concentrations of these two probes were determined. To test the detection sensitivity and specificity of this technique, a conservative fragment of the virus RNA was amplified by the RT-PCR/PCR one step amplification. The cDNA was hybridized with the capture probes and the detection probes on microarray. The detection signal was amplified by silver stain enhancement and could be identified by naked eyes. 100 fM of amplicon could be detected out on the microarray. As the results, preparation of nano-gold was improved and faster. Development time also was shortened to 2 min. Thus, considering high efficiency, low cost, good specificity and high sensitivity, this technique is alternative for the detection of HEV.
The determination of DNA hybridization reaction can apply the molecular biology research, clinic diagnostics, bioengineering, environment monitoring, food science and other application area. So, the improvement of DNA detection system is very important for the determination of this hybridization reaction. In this study, we report the characterization of the probe and target oligonucleotide hybridization reaction using the evanescent field microscopy. First, we have fabricated DNA chip microarray. The particles which were immobilized oligonucleotides were arranged by the random fluidic self-assembly on the pattern chips, using hydrophobic interaction. Second, we have detected DNA hybridization reaction using evanescent field microscopy. The 5'-biotinylated probe oligonucleotides were immobilized on the surface of DNA chip microarray and the hybridization reaction with the Rhodamine conjugated target oligonucleotide was excited fluorescence generated on the evanescent field microscopy. In the foundation of this result, we could be employed as the basis of a probe olidonucleotide, capable of detecting the target oligonucleotide and monitoring it in a large analyte concentration range and various mismatching condition.
Park Jun-Hyung;Park Hee-Kyung;Kang Byeong-Chul;Song Eun-Sil;Jang Hyun-Jung;Kim Cheol-Min
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.16
no.5
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pp.740-747
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2006
Amplification by universal consensus sequences in pathogenic bacterial DNA would allow rapid identification of pathogenic bacteria, and amplification of genus-specific and species-specific sequences of pathogenic bacterial DNA might be used for genotyping at the genus and species levels. For design of probes for molecular diagnostics, several tools are available as stand-alone programs or as Web application. However, since most programs can design only a few probe sets at one time, they are not suitable for large-scale and automatic probes design. Therefore, for high-throughput design of specific probes in diagnostic array development, an automated design tool is necessary. Thus, we developed a Web-based automatic system for design of genus-specific and species-specific probes for pathogen detection. The system is available at http://www.miprobe.com.
The determination of DNA hybridization can apply the molecular biology research, clinic diagnostics, bioengineering, environment monitoring, food science and other application area. So, The determination of hybridization is very important for the improvement of DNA detection system. In this study, we report the characterization of the DNA hybridization by the electricalchemical methods. A new electrochemical biosensor is described for voltammetric detection of gene sequence related to probe oligonucleotide of bacterium Escherichia coli O157:H7. The biosensor involves the immobilization of a 18-mer probe oligonucleotide, which is complemetary to a specific gene sequence related to Escherichia coli O157:H7 on a gold electrode through specific adsorption. The probe oligonucleotide was used to determine the amount of target oligonucleotide in solution using mitoxantrone(MTX) as the electrochemical indicators. The cathodic peak currents $(I_{peak})$ of MTX were linearly related to the concentration of the target oligonucleotide sequence in the range $1[{\mu}M]{\sim}0.1[nM]$. The detection limit of this approach was 0.01[nM]. In addition, these indicators were capable of selectivity discriminating against various mismatching condition.
Park, Nam-Yong;Cho, Ho-Seong;Cho, Kyoung-Oh;Kim, Sang-Jip;Park, Hyung-Seon
Korean Journal of Veterinary Pathology
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v.5
no.2
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pp.57-62
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2001
Recently various molecular diagnostic techniques have been used to identify rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV), a causative agent responsible for acute hepatitis and disseminated intravascular coagulation in rabbit. But they were hard to perform and time consuming. To detect RHDV in a rapid and easy way, we developed biotinylated oligonucleotide probe within ORF 1 region encoding the polyprotein of RHDV in formalin-fixed and paraffin-embedded tissues from various tissues of 20 rabbits naturally infected with RHDV, Our in situ hybridization (ISH) was quickly carried out within two hours by MicroProbe capillary action system. The ISH produced a positive reaction in liver, kidney and lung. In conclusion, ISH with a biotintlated oligonucleotide probe provided a useful diagnostic method for detecting RHDV.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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