• 대한임상검사과학회지
• /
• 제48권3호
• /
• pp.217-224
• /
• 2016

Acinetobacter baumannii는 병원환경에 광범위하게 분포하고 있으며, 원내감염의 중요한 원인균으로 병원에서 집단감염 일으키고, 중증의 기저질환을 가진 환자에게 감염되면 감염환자의 사망률이 다른 환자에 비해 월등히 높은 것으로 알려져 있다. 본 연구는 충청남도 천안시에 소재한 대학병원 두 곳의 진단검사의학과에 의뢰된 가검물에서 분리한 다제 내성 A. baumannii 85주의 항생제 내성률과 내성유전자 양상에 대해 조사하였다. Carbapenemase와 Class B ${\beta}$-lactamase의 생성균주를 선별하기 위하여 modified Hodge test (MHT)와 IMP-EDTA double-disk synergy test를 실시하였다. 항생제 내성을 유발하는 carbapenemases, 16S rRNA methylases, aminoglycoside-modifying enzymes (AMEs)을 확인하기 위하여 PCR을 시행 하였으며, A. baumannii가 분리된 두 대학병원간 분리균주의 유전학적인 근연도를 확인하기 위해 REP-PCR을 시행하였다. 실험결과 3균주를 제외한 82균주(96.5%)에서 $bla_{OXA-23-like}$과 $bla_{OXA-51-like}$이 검출되었다. $bla_{OXA-23-like}$ 유전자가 검출된 균주에서는 $bla_{OXA-23-like}$ 유전자 상부에 ISAba1 유전자가 확인되어 carbapenemase에 대한 내성을 유도하는 것으로 확인 되었다. Aminoglycoside에 대한 내성을 유발하는 16S rRNA methylase 유전자인 armA는 A병원에서 분리한 38균주 중 34균주(89.5%)에서, B병원에서 분리한 47균주 중 40균주(85.1%)에서 확인되었고, aminoglycoside modifying emzyme 유전자는 A병원 유래 38 균주 중 33 균주(70.2%)에서, B병원 유래 47균주 중 44 균주(93.6%)에서 aac(3)-IIa/ant(2")-Ia/aac(6')-Ib가 확인됨에 따라 천안지역에서 분리되는 대부분의 다제 내성 A. baumannii 균주는 acethyltransferase와 adenyltransferase를 동시에 발현하는 것을 알 수 있었다. 본 실험 결과는 충청남도 천안시에서 분리된 MDR A. baumannii를 대상으로 한 보고서로서, 항생제 내성유형과 내성 유전자의 분포를 확인하여 MDR A. baumannii 균주에 의한 감염증의 치료 지침과 내성세균 확산 방지를 위해 필요한 기초 자료로 활용할 수 있을 것으로 생각된다.

• 원예과학기술지
• /
• 제33권2호
• /
• pp.242-250
• /
• 2015

기능 유전체 연구에서 이동유전자 또는 T-DNA 도입을 이용한 삽입돌연변이체 분석은 미지의 유전자 기능을 분석할 수 있게 한다. 이에 따라 본 연구에서는 배추(Brassica rapa ssp. pekinensis)와 같은 고등 식물에서 genomic DNA조각을 분리할 수 있는 효과적인 PCR 방법을 개발하였다. 본 연구에서 개발한 variable argument thermal asymmetric interlaced PCR(VA-TAIL PCR)은 single-step annealin-gextension PCR 방법과 길게 구성된 유전자 특이적 primer 및 touch-up PCR 방법이 적용되었으며, 증폭 효율을 증가시키기 위하여 autosegment extension 증폭 방법이 적용되었다. 또한 개발된 VA-TAIL PCR 방법은 배추에 특화된 변성 primer를 Integr8 단백질체 데이터베이스를 분석하여 작성하였으며 대량의 배추 T-DNA 삽입 돌연변이 집단에서 각각의 T-DNA 인접 염기 서열을 분석하는 데 매우 정확하고 효과적인 것으로 분석되었다. 따라서 본 연구에서 개발된 VA-TAIL PCR 방법은 기존에 확인된 염기 서열을 이용하여 양쪽 방향을 모두 분석할 수 있기 때문에, 유전체 연구에서 T-DNA 또는 기 밝혀진 염기 서열에 인접한 미지의 염기서열을 확인하는데 매우 효과적일 것으로 기대된다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
• /
• 제17권4호
• /
• pp.379-387
• /
• 2013

Embryonic stem (ES) cells can self-renew and differentiate to various cells depending on the culture condition. Although ES cells are a good model for cell type specification and can be useful for application in clinics in the future, studies on ES cells have many experimental restraints including low transfection efficiency and transgene expression. Here, we observed that transgene expression after transfection was enhanced by treatment with histone deacetylse (HDAC) inhibitors such as trichostatin A, sodium butyrate, and valproic acid. Transfection was performed using conventional transfection reagents with a retroviral vector encoding GFP under the control of CMV promoter as a reporter. Treatment of ES cells with HDAC inhibitors after transfection increased population of GFP positive cells up to 180% compared with untreated control. ES cells showed normal expression of stem cell markers after treatment with HDAC inhibitors. Transgene expression was further enhanced by modifying transfection procedure. GFP positive cells selected after transfection were proved to have the stem cell properties. Our improved protocol for enhanced gene delivery and expression in mouse ES cells without hampering ES cell properties will be useful for study and application of ES cells.

• 대한기계학회논문집A
• /
• 제24권1호
• /
• pp.126-133
• /
• 2000

Noise of automotive alternators can be classified into mechanical noise, aerodynamic noise and electro-magnetic noise. which is the same as for electric motors. Previous studies show that the elect ro-magnetic noise takes a maw peak at the rotating frequency multiplied by the number of stator slots. It has not been proved clearly so far, however, that the major peak is wholely due to the stator slots. On the contrary it is well known that noise of motors. which has a mechanism similar to the alternator except that the number of stator slots in automotive alternators is in gene\integer multiple of that of rotor segments, is closely related to the number of rotor slots. Therefore, the statement that only the stator slots is the source of the major peak in the noise spectrum of alternators is suspicious although not easy, to show theoretically, that the statement is incorrect. In this paper. effects of the stator slots on the noise in an automotive alternator are experimentally investigated by intentionally modifying the number of stator slots in such a way that the number of the states is not an integer multiples of the rotor slots. It is shown that both the stator slots are not so much influential as the rotor slots and claimed that the major peak in the noise spectrum of conventional alternators is due to superposition of a component caused by the stator and a higher harmonic component caused by the rotor

• Biomolecules & Therapeutics
• /
• 제26권6호
• /
• pp.591-598
• /
• 2018

Epigenetic silencing is considered to be a major mechanism for loss of activity in tumor suppressors. Reversal of epigenetic silencing by using inhibitors of DNA methyltransferase (DNMT) or histone deacetylases (HDACs) such as 5-Aza-CdR and FK228 has shown to enhance cytotoxic activities of several anticancer agents. This study aims to assess the combinatorial effects of genesilencing reversal agents (5-Aza-CdR and FK228) and oxaliplatin in gastric cancer cells, i.e., Epstein-Barr virus (EBV)-negative SNU-638 and EBV-positive SNU-719 cells. The doublet combinatorial treatment of 5-Aza-CdR and FK228 exhibited synergistic effects in both cell lines, and this was further corroborated by Zta expression induction in SNU-719 cells. Three drug combinations as 5-Aza-CdR/FK228 followed by oxaliplatin, however, resulted in antagonistic effects in both cell lines. Simultaneous treatment with FK228 and oxaliplatin induced synergistic and additive effects in SNU-638 and SNU-719 cells, respectively. Three drug combinations as 5-Aza-CdR prior to FK228/oxaliplatin, however, again resulted in antagonistic effects in both cell lines. This work demonstrated that efficacy of doublet synergistic combination using DNMT or HDACs inhibitors can be compromised by adding the third drug in pre- or post-treatment approach in gastric cancer cells. This implies that the development of clinical trial protocols for triplet combinations using gene-silencing reversal agents should be carefully evaluated in light of their potential antagonistic effects.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
• /
• 제17권1호
• /
• pp.131-135
• /
• 2008

A cDNA encoding a defensin-like peptide (Protaetiamycine) from the larvae of a beetle, Protaetia brevitarsis was cloned. The DNAs encoded the deduced propeptide of 79 amino acid residues with the predicted molecular weight of 8.4 kDa and PI of 8.24. Overall amino acid sequence of this protein has 39% similarity to that of Rhodnius prolixus defensin, 43% similarity to that of Acalolepta luxuriosa defensin, and 72% similarity to that of Oryctes rhinoceros defensin, suggesting that this gene is an insect defensin. In an attempt to apply the anti-bacterial peptide to the development of therapeutic agents, a 12-mer peptide amidated at its C-terminus, ACAAHCLAIGRG-$NH_2$ (Ala55-Lys66-$NH_2$, 12Pbn) was synthesized. This peptide showed some antifungal activity against Candida albicans. To increase antifungal activity, six 9-mer peptides were synthesized by modifying amino acid sequences of 12Pbn fragment. Among these peptides, 9Pbm3-9Pbm6 exhibited strong activity compared with Cecropin B and mellitin.

• 대한약리학회지
• /
• 제32권3호
• /
• pp.399-406
• /
• 1996

Thioacetamide는 non-genotoxic 발암제로서 세포단백의 변형을 초래하는 것으로 알려져 있으며 이것을 단기간 처리하면 핵소체의 비대를 초래하게 된다. 본 연구에서는 thioacetamide를 처리한 간세포를 in vivo와 in vitro 상태에서 관찰하였다. In vivo상태로서 thioacetamide를 쥐의 복강에 7일간 주사하면 (50mg/kg), 핵소체 비대와 B23 및 MAP kinase와 같은 신호전달분자들이 증가하는 것을 관찰할 수 있었다. In vitro 상태로서 쥐의 간장을 collagenase로 분리하여 유전자 치료에 사용될 수 있는 배양조건으로 간세포를 배양하여 핵소체를 관찰한 결과 핵소체 비대가 현저하였으며, B23의 양도 증가하였다. 본 실험의 결과로 미루어 볼 때, 간세포는 핵소체 비대 수용능력이 약 100배 이상이라고 할 수 있으며, thioacetamide 처리에 의하여 라이보좀 생성과 핵소체 증가 능력이 증폭되어 나타나는 것으로 사료된다.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제40권4호
• /
• pp.277-282
• /
• 1997

아라비돕시스 탈리아나의 아세토락테이트 합성 효소 (ALS)를 그 유전자를 포함하고 있는 대장균 MF 2000/pTATX로부터 부분 정제하였다. 부분 정제된 이 효소를 가지고 여러 가지 변형 화학물질들 즉, 요오드아세트산, 요오드아세타마이드, N-에틸말레이미드 (NEM), 5,5'-디티오비스(2-니트로벤조산) (DTNB), 파라염화수은벤조산 (PCMB), 그리고 페닐글리옥살 등에 대한 민감성을 조사하였다. PCMB가 가장 민감하게 저해를 했으며, DTNB와 NEM이 그 뒤를 따랐다. 이 효소의 기질인 피루브산이 요오드아세트산에 의한 활성 저해를 보호하지 못하였으므로 기질의 결합에 시스테인의 관련이 없는 것 같이 보인다. 한편, 기질이 페닐글리옥살에 의한 효소의 활성 저해를 부분적으로 보호하는 것으로 보아 기질이 아르기닌기와 상호 작용함을 암시하고 있다. 부분 정제된 효소는 발린과 이소루신에 민감하게 방해를 받았으나 루신은 그렇지 않았다. 그러나, PCMB로 변형시킨 효소는 되먹임 방해를 더 강하게 받았다. 그 외 ALS에 대한 새로운 제초제 후보인 피리미디설퍼 벤조산 유도체의 저해 효과를 검토하였다.

• Journal of Plant Biotechnology
• /
• 제45권3호
• /
• pp.257-265
• /
• 2018

감미료(sweetener)는 단맛을 느끼게 하는 첨가물 중 하나로 인공감미료와 설탕이 대표적이며, 단맛의 특성을 지닌 감미 단백질도 잘 알려져 있다. 본 연구는 천연 감미 단백질, brazzein, thaumatin 및 miraculin의 안정적인 생산을 위해 Agrobacterium방법으로 상추 세포를 형질 전환시켰다. 감미 단백질을 코딩하는 합성 유전자들은 상시적으로 발현하는 프로모터의 제어 하에 상추에 형질전환 하였다. 형질전환한 잎을 이용하여 RT-PCR 및 Western blot 분석을 실시한 결과 감미 단백질이 안정적으로 발현하는 것을 확인하였다. 형질전환 상추에서 발현한 단백질은 단맛을 유발하는 단백질 활성을 가지고 있었다. 이러한 결과는 유전자 재조합 감미 단백질들은 형질전환한 상추에 잘 발현된 것을 보여 주며, 이들 생산 시스템은 식물로부터 감미단백질 생산을 위한 좋은 대안이 될 수 있을 것으로 생각된다.

• 대한임상검사과학회지
• /
• 제44권3호
• /
• pp.155-165
• /
• 2012

The purpose of this study was to develop a multiplex PCR for the detection of aac(6')-Ib, aph(3')-Ia, and ant(2")-Ia; the genes that encode the most clinically relevant aminoglycoside modifying enzymes (AMEs) in Gram-negative bacteria. Clinical isolates of 80 E. coli and 23 K. pneumoniae from tertiary university hospital were tested by multiplex PCR. The most prevalent AME gene was aac(6')-Ib which was found in 22.3% of the isolates. Of the total 80 E. coli isolates, 1 isolate was found to contain both aph(3')-Ia and ant(2")-Ia simultaneouly. Of the total 23 K. pneumoniae isolates, 2 isolates were found to contain both aac(6')-Ib and aph(3')-Ia, and 1 isolate was found to contain both aac(6')-Ib and ant(2")-Ia simultaneously. Annual (2005~2009) analysis of isolates that contain the AME genes were of no correlation. The sensitivity and specificity of multiplex PCR in detecting AME genes was 94.4% (34 of 36 cases) and 100%, respectively. We suggest the multiplex PCR method we developed could be highly sensitive and specific in detecting the AME genes of E. coli and K. pneumoniae. This study could be the first published investigation in which the multiplex PCR method detects aac(6')-Ib, aph(3')-Ia, and ant(2")-Ia genes.