• 한국양식학회지
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• 제13권4호
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• pp.359-362
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• 2000

Mitotic gynogenesis was induced in the far eastern catfish, Silurus asotus using UV-irradiated heterospecific sperm and cold shock treatment. Eggs were activated with the sperm of mud loach, Misgurnus mizolepis which has been irradiated with UV at dose of 9,000 ergs/$mm^2$. To determine the optimum duration required to prevent the first cleavage, a cold shock at 4$^{\circ}C$ with duration of 20, 30 or 40 min was applied to the eggs 50 min after activation. To induce diploidization of mitogenesis, the most effective protocol was to apply cold shock to 50-min old (after activation) eggs at 4$^{\Circ}C$ for 30min.

• 한국양식학회지
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• 제12권3호
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• pp.167-173
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• 1999

Blocking the 1st mitotic cleavage was performed in mud loach (Misgurmus mizolepis) using UV-irradiated cyprinid loach (M. anguillicaudatus) sperm and ternal shocks Optimum UV range for inactivation of cyprinid loach sperm and thermal shocks. Optimum UV range for inactivation of cyprinid loach sperm was between 3,150 to 4,050 ergs/m$m^2$. Heat shock treatment ($41^{\circ}C$ for 3mins) with various treatment initiation times ranged from 22 to 50 min post insemination resulted wide range of success for induced gynogenesis. Best result was obtained when haploid egges were shocked at 28 min after insemination (corresponding to metaphase division of the 1st cleavage); 26% of total eggs inseminated were viable diploid gynogens. The hatching success and early survival of the both meiotic and mitotic gynogenetic groups were significantly lower than those of control crosses (P<0.05). Maternal origin of induced gynogenetic mud loach was verified by multi-locus DNA fingerprinting.

• 한국양식학회:학술대회논문집
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• 한국양식학회 2003년도 추계학술발표대회 논문요약집
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• pp.38-38
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• 2003

Blocking the first mitotic cleavage of the zygote is a key tool for chromosome-set manipulations in fish. We developed an improved method for inducing tetraploidy by blocking the mitosis with a combination of heat shock at 40.5$^{\circ}C$ for 1, 2 or 3 min followed by cold shock at $1.5^{\circ}C$ for 30, 45 or 60 min. When applied during the first cleavage metaphase of mud loach (Misgurnus mizolepis) zygotes, the optimal combination was heat for 2 min followed by cold for 45 min. At 1 month, the frequency of 4N survivors and the yield from total eggs fertilized was 55.7% and 14.4%, respectively, compared to heat shock alone with 20.0% efficiency and 3.6% yield. The effectiveness of the procedure was confirmed by diploid mitotic gynogenesis using transgenic markers. The overall yield of homozygous diploids, 34.0%, was better than that for single heat shock, 17.3%. The tetraploids and homozygous diploids had higher early mortality than normal diploid controls. However at 1 month, the viability of the tetraploids was the same as normal diploids. For gynogenetic diploids, the survival was similar to normal diploids after 3 months. The high efficiency of this new protocol extends the opportunity to study polyploidy in basic and applied research.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제4권1호
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• pp.79-85
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• 2000

은어의 자성발생 2배체를 유도하기 위해 자외선에 의한 정자의 유전적 불활성화 및 수정 난의 제 2감수분열과 제 1난할을 저지하기 위한 조건을 검토했다. 정자에 3,000~14,000 erg의 자외선을 조사하였는데 그 결과 3,000 erg를 조사한 시험구에서 89.3%의 높은 생존율을 보였으나 선량이 증가될수록 생존율이 저하했으며 7,000 erg의 자외선을 조사했을 때 생존율이 다시 회복되었다. 따라서 은어의 자성발생 2배체 유도시 정자를 유전적으로 불활성화시키기 위해서는 7,000 erg가 최적 선량인 것으로 나타났다. 제 2극체 방출 저지형 자성발생 2배체를 유도하기 위해서는 자외선을 조사한 정자와 정상 난을 수정 시켜 수정 5~8분 후에 15~30분간 1~2$^{\circ}C$의 저수온 처리를 한 결과 수정 5~5.5분 후에 15~17.5분간 처리한 실험구의 생존율이 비교적 높고 안정적이어서 제 2감수분열 저지를 위한 유효 조건으로 판명되었다. 제 1난할 저지형 자성발생 2배체의 유도를 위해서는 수정 70~95분 후에 수정 난을 30분간 저수온에 처리한 결과 모든 실험구의 생존율이 현저하게 낮아 생존율의 개선을 위해서는 처리방법과 강도에 대한 재검토가 필요하며 또 난 질을 유지시킬 수 있는 방안도 강구되어야 할 것이다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제4권2호
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• pp.153-160
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• 2000

생리적 형질인 수온과 염분에 대한 내성을 양적 형질로 개발하기 위하여 은어의 정상 발생 2배체 (2N-cont),극체형 2배체 (meiotic-G2N), 난할형 2배체 (mitotic-G2N) 및 2종류의 clone (clone-11, clone-15)의 부화 자어를 대상으로 유전적 변이성을 조사했다. 수온은 19.$0^{\circ}C$ 22.5$^{\circ}C$, 25.$0^{\circ}C$ 그리고 30.$0^{\circ}C$로 설정하였고 각 수온구에 0$\textperthousand$, 15$\textperthousand$ 및 30$\textperthousand$의 염분구를 조합하여 12개의 실험구를 만들어 조사했다. 평균 생존시간 (MST)에서는 모든 수온 실험구에서 15$\textperthousand$실험구의 생존시간이 가장 길었다. 2N-cont가 126.16시간으로 가장 길었고, 다음이 clone으로 각각 113.22시간 (clone-11)과 91.05시간 (clone-15)이었다. 자성발생 2배체는 가장 낮은 87.32시간과 36.56시간이었다. 22,5$^{\circ}C$와 25.$0^{\circ}C$에서 각 계통의 MST는 현저하게 짧아졌지만 19.$0^{\circ}C$의 실험구와 유사한 결과가 나타나, 2N-cont의 MST가 가장 길었으며, clone의 MST는 자성발생 2배체보다 길었다. 이것은 자성발생으로 인해 악성의 유해 유전자가 동형접합화되면서 집단에 현재화하여 그 유전자를 갖는 개체가 조기에 폐사했기 때문이라 생각된다. 또 clone의 MST가 자성발생보다 길게 나타난 것은 어미 집단인 자성발생 1대에서 유해 유전자가 제거되었기 때문에 2대인 clone에서는 우량 유전자의 고정과 함께 내성과 생존성이 개선되었다고 생각된다 그리고 실험온도를 22.5$^{\circ}C$와 25.$0^{\circ}C$로 상승시켰을 경우 15$\textperthousand$에서 자성발생 2배체의 변이 확대와 clone의 변이 축소가 관찰되었다. 이것은 이 형질도 어느 정도의 유전성이 있는 형질이라는 것을 시사하고 있다. 따라서 이 형질을 양적형질로 개발하여 선발육종에 적용하면 우량 계통이나 개체를 확립할 수 있는 유용형질이 될 것이며 또한 선발에 의해 집단의 유전적 개량이 가능하다고 생각된다.