한국산 초피나무의 물고기에 대한 독성력을 확인하기 위하여 물질을 용매추출, silica gel column chromatography와 재결정을 통하여 분리 정제하였다. 추출물의 물고기에 대한 독성실험 결과, methanol 추출물에서 가장 강한 독성이 나타났으며, 그 다음으로는 물추출물, 초피의 건조분말 그리고 chloroform추출물 순서로 독성을 보였다. 이 추출물의 구조를 기기분석을 통해 해석한 결과 L-asarinin 임을 확인하였다.
암컷의 성장이 수컷에 비해 빠흔 미꾸라지의 유전육종을 위한 연구의 일환으로 성전환을 시켜기 위하여 우선 본 종의 성장에 다른 생식소 형성 빛 그의 분화과정을 조사하였다. 그 결과, 부화후 2일이 경과 하여 전장이 3.5mm 정도에 이르면 원생식세포가 중신관과 창자 사이에서 관찰되었다. Genital ridgeS니 형성은 4 및 5 일자 자어에서 이루어졌으며, 전장이 15.0mm 되는 8 일자 자어에서는 정소와 난소가 뚜렷이 구별되었다. 숫컷의 경우 20 일자 치어에서 최초로 정세포가 정소조직내에 존재하였고, 암수 모두 100 일자에 이르면 생식소내에 완전 성숙된 정 난자가 관찰되었다. 이상의 결과로 미루어 본종의 성분화는 differentiated형의 gonochorism인 것으로 확인되었다.
Transcriptional response patterns of mud loach (Misgurnus mizolepis; Cypriniformes) hepcidin, a potential ortholog to human hamp1, in response to experimental challenges with non-pathogenic and pathogenic bacterial species were analyzed based on the semi-quantitative reverse transcription-PCR assay. Mud loach hepcidin transcripts were much more preferentially induced by pathogenic bacterial species (Edwardsiella tarda and Vibrio anguillarum) causing apparent pathological symptoms than by non-pathogenic species (Escherichia coli and Bacillus thuringiensis) displaying neither clinical signs nor mortality. However in overall, the induced amounts of hepcidin transcripts were positively related with the number of bacterial cells delivered in both pathogenic and non-pathogenic bacterial species. Inducibility of hepcidin transcripts were variable among three tissues examined (liver, kidney and spleen) in which kidney and spleen were more responsive to the bacterial challenge than liver. Time course expression patterns of hepcidin mRNAs after challenge were different between groups challenged with pathogenic and non-pathogenic species, although the overall pattern of hepcidin expression was in accordance with that generally observed in battery genes appeared during early phase of inflammation. Fish challenged with E. coli (non-pathogenic) showed the significant induction of hepcidin transcripts within 24 hr post injection (hpi) but the level was rapidly declined to the basal level either at 48 or 96 hpi. On the other hand, hepcidin transcript levels in E. tarda (pathogenic)-challenged fish were continuously elevated until 48 hpi, then downregulated at 96 hpi, although the level at 96 hpi was still significantly higher than control level observed in non-challenged fish. This expression pattern was consistent in all the three tissues examined. Taken together, our data indicate that hepcidin is tightly in relation with pathological and/or inflammation status during bacterial challenge, consequently providing useful basis to extend knowledge on the host defensive roles of hepcidin under infectious conditions in bony fish.
Kim, Yi Kyung;Cho, Young Sun;Lee, Sang Yoon;Nam, Yoon Kwon
Fisheries and Aquatic Sciences
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제17권4호
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pp.471-478
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2014
Genomic organization, including the structural characteristics of 5'-flanking regions of two 65-kDa protein (WAP65) isoform genes associated with warm temperature acclimation, were characterized and their transcriptional responses to immune challenges were examined in the intestine, kidney and spleen of the mud loach (Misgurnus mizolepis; Cypriniformes). Both mud loach Wap65 isoform genes displayed a 10-exon structure that is common to most teleostean Wap65 genes. The two mud loach Wap65 isoforms were predicted to possess various stress- and immune-related transcription factor binding sites in their regulatory regions; however, the predicted motif profiles differed between the two isoforms, and the inflammation-related transcription factor binding motifs, such as NF-${\kappa}B$ and CREBP sites, were more highlighted in the Wap65-2 isoform than the Wap65-1 isoform. The results of qRT-PCR indicated that experimental immune challenges using Edwardsiella tarda, lipopolysaccharide or polyI:C induced the Wap65-2 isoform more than Wap65-1 isoform, although modulation patterns in response to these challenges were tissue- and stimulant-dependent. This study confirms that functional diversification between the two mud loach Wap65 isoforms (i.e., closer involvement of Wap65-2 in the acute phase of inflammation and innate immunity) occurs at the mRNA level in multiple tissues, and suggests that such differential modulation patterns between the two isoforms are related to the different transcription factor binding profiles in their regulatory regions.
Due to the shortage of the fingerling/juvenile mud loach, Misgurnus mizolepis in Korea, these fish have been imported from China. However, the mortality rate during and after their transportation is very high. In this study, we examined various physiological and histological parameters to evaluate the effect of salt treatment on the survival and recovery of mud loaches in holding farms during the quarantine process. Glucose, osmolality, $Na^+$, $Cl^-$, and histological changes were assessed for three different salinities. Non-treated fish (control 0.0%) exhibited lower levels of osmolality, and $Na^+$ and $Cl^-$ concentrations compared with those kept in solar salt solution (0.5% and 1.0%). Glucose levels in control fish were higher than those in fish exposed to 0.5% and 1.0% solar salt solution. Histologically, control fish showed thinner epidermis of skin, branchial hyperplasia and lamellar fusion with an abundance of eosinophilic granule cell-like cells. After solar salt solution treatment, damaged gill structures in the fish almost recovered within 5 days. The present study demonstrates that mud loaches transported from China suffer from skin and gill damage and physiological dysfunction which may increase the mortality and morbidity. Moreover, saline treatment might alleviate the stress responses and ionic/osmotic imbalances, and help heal gill damage.
미꾸라지(Misgrunus mizolepis)의 DNA로부터 클론된 핵기질 부착부위(MAR)를 포함하는 발현벡터인 pUC19N6-luc 벡터를 구성하였다. 이를 물고기 CHSE-214 세포주에 electroporation으로 transfection 시킨 후 유전자의 발현율, 벡터의 copy 수 및 염색체내 삽입 양상을 luciferase 활성도 분석, PCR 및 Southern blotting를 통해 분석하였다. 대조군 발현벡터에 luciferase 유전자는 전형적인 transient 발현양상을 나타내는데 비해, 미꾸라지 MAR가 포함된 pUC19N6-luc 벡터의 luciferase 유전자의 발현은 transfection 후 5일째부터 급격히 증가하는 양상을 보였다. Transfection된 CHSE-214 세포내에서 pUC19N6-luc 벡터는 대조군 벡터에 비해 높은 copy 수를 유지하였으나, 염색체내 삽입은 거의 비슷한 시간에 일어났다. 결론적으로 transfection 후 시간경과에 따른 pUC19N6-luc 벡터내의 luciferase 유전자의 발현 증가에 미치는 MAR의 효과는 벡터 copy수 증가 때문이 아니라, 염색체내 삽입후 형성되는 전사활성구조의 형성에 기인하는 것으로 판단된다.
논에 서식하는 미꾸라지의 등, 체측, 후두부 피부조직에 대한 조직학적 연구를 통해 계절변화에 따른 점액세포의 변화여부를 조사하였다. 계절이 변화함에 따라 표피조직의 일반적인 형태에는 변화가 없었으나 상피조직에 존재하는 점액세포의 단위면적당 개수와 크기가 유동적으로 변화하였다. 비록 점액세포의 발달정도는 겨울철에 크게 증가하고 여름철에 감소하는 경향을 보였지만, 농지경작을 위해 관개를 실시한 봄(3~4월)과 추수를 위해 물을 배수시켜 미꾸라지의 피부가 공기에 노출되었던 가을(8~9월)에 점액세포의 월별 변화율이 가장 크게 조사되었다. 또한 농지 수온이 급격하게 높았던 6월에 점액세포가 일시적으로 발달하는 모습이 관찰되었다. 계절에 따른 점액세포의 변화는 유동적인 농지환경에 대한 능동적 행동이자 피부호흡을 하기 위함으로 여겨진다.
우리나라 주요 담수어종인 미꾸라지(Misgurnus mizolepis)를 어류 염색체 조작 모델로 개발하기 위한 연구의 일환으로 동일 종내 웅성발생성 이배체 유도 조건을 개발하고 유도된 웅성발생성 이배체의 생존능력을 평가하였다. 자외선(UV; $10,800\;ergs/mm^2$)을 이용하여 난자의 유전물질을 불활성화시키고 인공수정 28분 후(제1난할 중기)에 온도처리(고온 자극 $40.5\;^{\circ}C$ 120초 후 저온 자극 $1\;^{\circ}C$ 45분)를 통해 제1난할을 억제하였다. 본 온도처리를 통해 생존력 있는 웅성발생성 이배체들이 유도되었고(평균 부화율, 26.9%), 부화 후 1주일째를 기준으로 평균 웅성발생성 이배체 수율은 최초 처리난의 7%내외로 나타났다. 그러나 웅성발생성 이배체 유도 효율은 cytoplasmic donor의 질에 크게 영향을 받음이 관찰되어 사용한 암컷 친어별로 큰 편차가 관찰되었다. Flow cytometry 분석에 의해 생존력 있는 웅성발생성 개체들의 이배체 복원이 확인되었으며 아울러 형질전환 표지를 이용하여 동형접합성 개체 유도의 가능성이 확인되었다. 웅성발생성 이배체들은 일반대조군 이배체에 비해 낮은 생존능력을 보였으며 특히 부화 후 1개월까지 유의적으로 낮은 생존율을 나타내었다. 그러나 후기 생존능력은 일반 이배체군과 유사하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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