A study was conducted to improve breeding efficiency of dairy and beef cows on Cheju Island. Milk progesterone and plasma progesterone profiles were determined by using radioimmunoassay techniques during the oestrus cycle, onset on oestrus and during the gestation period. Progesterone connections in milk were very low during the oestrus with a means value of 2.4ng/ml and 4.6ng/ml at the onset of oestrus but gradually declined at 4 to 9 hr after oestrus. In the cyclic cow, milk progesterone concentraitons in the early part of the cycle, ranged from 3 to 5ng/ml and increased from 6.0 to 11.6ng/ml on day 13 to 21 of cycle. Milk progesterone concentrations of pregnancy cows ranged from 5.0 to 40ng/ml during the gestation and grom basal line to 3.5ng/ml for nonpregnant cows. Plasma progesterone concentrations of beef during pregnancy period ranged form 3.0 to 33ng/ml and basal levels ranged from 0 to less than 2.5ng/ml for non-pregnant beef cows.
This study was carried out to evaluate khe accuracy of the early diagnosis of pregnancy in dairy cows using EIK-kit of progesterone in milk and to compare the progesterone concentrations in milk with those assayed by radioimmunoassay. 1. The progesterone concentrations of the pregnant cows($2.07{\pm}0.54ng/ml$) were significantly higher than those of non-pregnant cows($1.04{\pm}0.19ng/ml$), and thereafter began to inerease and maintained high levels. 2. During 20 to 22 days after artificial insemination, the accuracy of pregnancy diagnosis from EIA-kit of progesterone were 93.7% for non-pregnant cows, and 91.6% for pregnant cows. 3. During 20 to 22 days after artificial insemination, the accuracy of pregnancy diagnosis from milk progesterone concentrations were 100% for non-pregnant cows (<2.7ng/ml), and 92.9% for pregnant cows($${\geq_-}3.2ng/ml$$). The average overall accuracy of prediction for pregnant and non-pregnant cows were 96.5%. 4. Accordingly, the pregnancy diagnosis from EIA-kit of progesterone is thought to be recommendable because this early diagnostic means are simple with accurate result.
Skim milk progesterone($P_4$) profiles in 74 dairy cows were determind to monitor postpartum ovarian activity by radioimmunoassay. Milk samples were collected from each cow every 5 days from 10 to 90 days postpartum. Signs of estrus were observed twice daily, and status of the ovaries and uterus were examined every 10 days by rectal palpation. Results are summarized as follows: 1. Cows were categorized into five types by the change of skim milk $P_4$ profiles; Type I(normal) : Cyclic changes of skim milk $P_4$ profiles appeared within 20 days postpartum(12 cows, 16.2%), Type II(cycle delayed) : Cyclic changes of skim milk $P_4$ profiles appeared from 21 to 60 days postpartum(39 cows, 52.7%), Type III(cycle ceased with low $P_4$) : Onset of the estrous cycle within 20 days postpartum but ceased later with low levels of $P_4$ (7cows, 9.5%), Type IV(cycle ceased with high $P_4$) : Onset of the estrous cycle within 20 days postpartum but ceased later with high levels(>3.0 ng/ml) of skim milk $P_4$ (4 cows, 5.4%), Type V(acyclicity) : Skim milk $P_4$ concentration remained low(<1.0 ng/ml) until 80 days postpartum(12 cows, 16.2%). 2. Out of the 17 cows classified as the Type III and Type V by skim milk $P_4$ profiles, 13 cows had inactive ovaries and remaining 6 cows had single or multiple follicular cysts in their ovaries by rectal palpation. All 4 cows of Type IV had a persistent corpus luteum in their ovaries. 3. Approximately eighty percent of the cows had begun ovarian activity by 60 days postpartum and 90.6% by 90 days by skim milk $P_4$ profiles, but only 39.2% by 60 days and 71.7% by 90 days had shown visible estrus signs. The mean days from parturition to the first, second and third ovulations determined by skim milk $P_4$ profiles was $28.0{\pm}11.0$, $46.4{\pm}13.3$ and $66.4{\pm}11.5$ days and the visible estrus signs were 9.3%, 38.1%, and 48.6%, respectively. The mean days from parturition to the first visible estrus was $57.2{\pm}15.9$ days. These results indicated that milk $P_4$ profile of each Types by radioimmunoassay can be utilized for monitoring postpartum ovarian and would be useful for the early detection of ovarian dysfunction in dairy cow.
Milk samples(n = 78) were taken 19d, 20d, 21d, 22d after artificial insemination(AI) for early pregnancy diagnosis by using the Enzyme immunoassay(EIA) kit. The progesterone ($P_4$) concentration in the whole milk was measured on the same day of pregnancy diagnosis. Rectal palpation(RP) was accomplished between 60d and 70d after AI to estimate the ovary condition and pregnancy status. Milk progesterone concentrations measured by Radio-immunoassay(RIA) method, in the pregnant cows at 17d, 19d, 21d after insemination were $17.10{\pm}0.91$, $17.60{\pm}0.46$, and $18.43{\pm}0.79nmol/l$, whereas those in the not-pregnant cows were $6.57{\pm}1.03$, $2.63{\pm}0.29$, and $0.67{\pm}0.08nmol/l$, respectively. When the progesterone concentration was less than 7 nmol/l, the color of the EIA kit was lighter and when the progesterone concentration was ${\geq}16nmol/l$, the color of the EIA kit was darker compared to the standard color. The detection rates of error by judging the color differences were 5.1% and 20.7%, respectively. In the early pregnancy diagnosis by the EIA kit and RIA method, the accuracy rates in the pregnancy of cows were 82% and 87%, and those in not-pregnant cows were 86% and 91%, respectively. For ovarian status estimated by the RIA method and certified by RP, the accuracy rates of the ovarian atrophy, follicular cyst and luteal cyst were 80, 91 and 83% and the progesterone concentrations were 2.51, 2.03, and 26.7 nmol/l, respectively.
A simple and sensitive microplate enzyme immunoassay(ELISA) was developed for progesterone, based on progesterone monoclonal antibody as anti-progesterone, horseradish peroxise(HRP) as enzyme-label and tetramethylbenzidine(TMB) as substrate. The assay has a sensitivity of 5pg-120pg/well and intra- and inter assay coefficients of variation for progesterone standard curve(0.1ng-3.2ng/ml) were ranged 4.4-10.6% and 5.-12.6%, respectively. They assay is performed in less than two hours and provide reliable values to differentiate among samples from day 0(A.I.), day 14 and day 19. The discriminatory levels for early pregnancy diagnosis are [>10ng(day 19) & decreasing rate <1.5 : pregnancy] and [ 7ng & decreasing rate 1.5 : non-pregnancy]. The accuracy of the pregnancy diagnosis for cows classified as positive(pregnancy) and negative(non-pregnancy) were 96% and 100%, respectively.
This study was carried out to determine the blood and milk progesterone by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and milk urea nitrogen (MUN) in cows. MUN and protein concentration were determined using automated infared procedures. The optimum conditions of ELISA system was investigated including the first and second antibody titres, bound percent, and enzyme conjugate and also the factors on MUN and protein concentration by sampling procedures and addition of preservatives. Progesterone antibodies did not react to pregnenlone, testosterone, estrone, estradiol-l7$\beta$, aldosterone, cortisol, corticosterone and 11$\alpha$-dehydroxycortisone (DOC), but reacted with only progesterone. The intra and inter-assay coefficient of variation 4.5%, 6.1~9.4% when used of bovine serum. The morning, MUN concentration (17.6$\pm$2.8 mg/100 ml) in the 13 herds was similar to that of evening MUN concentration of the lactating cows from the same herd. A significant relationship between morning and evening milk samples of upper parameters was found r=0.93. Difference in MUN concentration with sampling procedures and using of preservatives were investigated.
Progesterone levels in the blood plasma or skim milk of cows are considered to be very useful indicator fur the detection of estrus cycle and early pregnancy diagnosis. During 13 to 14 days after estrus the level of progesterone in plasma or skim milk were not different between the inseminated arid non-inseminated cows. In the pregnant cows the peak level of progesterone reached on 14th day after artificial insemination (AI), but in the absence of conceptus the level declines after the 14th day slowly, and then very rapidly towards the basal level after the 17th day. This low level persists about 4 days, including those of estrus and ovulation a highly characteristic pattern which differs so markedly from that in the pregnant cows. Progesterone levels in blood plasma or skim milk can provided a reliable diagnosis of early pregnancy and monitoring ovarian activity in cows. The mean $\pm$ standard deviation of milk urea nitrogen(MUN) and protein concentration in the cows at 9 herds were 17.7$\pm$2.35 mg/dL and 3.2$\pm$0.17%, respectively. The days of nonpregnant after parturition was shorter in the cows in which the lower level of MUN than higher level of MUN concentration.
The study was carried out to find out the changes of hormone levels in blood serum and milk of Holstein cows during the estrous cycle. The progesterone, estradiol-$17{\beta}$ from the blood serum and milk samples were assayed by radioimmunoassay methods. The results of this study were summarized as follows; 1. The progesterone levels in blood serum during the estrous cycles began to decline rapidly at 2 days before estrus, decreased to $0.27{\pm}0.18ng/ml$ at on the day of estrus, and reached a peak mean level of $3.33{\pm}0.47ng/ml$ at 15 days after estrus. 2. The progesterone levels in milk during the estrous cycles began to decline rapidly at 2 days before estrus, decreased to $0.80{\pm}0.18ng/ml$ on the day of estrus, and increased a peak mean level of $3.80{\pm}0.36ng/ml$ at 15 days after estrus. 3. The estradiol-$17{\beta}$ levels in blood serum during the estrous cycles showed a peak mean level of $9.79{\pm}1.72pg/ml$ on the day of estrus, and decreased from $4.79{\pm}1.82pg/ml$ to $5.73{\pm}0.96pg/ml$ at luteal phase. 4. The estradiol-$17{\beta}$ levels in milk during the estrous cycles showed a peak mean level of $36.80{\pm}2.04pg/ml$ on the day of estrus, and decreased from $18.93{\pm}0.84pg/ml$ to $19.50{\pm}1.12pg/ml$ at luteal phase. 5. During 20 to 25 days after artificial insemination, the accuracy of pregnancy diagnosis from the blood serum progesterone levels were 87.5% for non pregnant cows (<2.0ng/ml), and 83.3% for pregnant cows ($${\geq_-}$$3.0 ng/ml). The accuracy of pregnancy diagnosis from the milk progesterone levels were 75.0% for non-pregnant cows (<2.4 ng/ml), and 94.4% for pregnant cows ($${\geq_-}$$3.2 ng/ml).
Ovulation synchronization (ovsynch) has proved to increase the number of insemination in cattle by overcoming the problems of heat detection. The aim of this study was to do ovsynch in water buffaloes where heat detection is a major reproductive problem and to determine the conception rates after timed artificial insemination (TAI). Twenty cyclic buffaloes at ${\geq}$ 60 days postpartum were selected by examining 24 unobserved estrus buffaloes based on milk progesterone assay (progesterone concentration ${\geq}$ 1.0 ng/ml) from the Mymensingh district of Bangladesh. Ovsynch treatment regimen was started irrespective of the stage of estrous cycle. Gonadorelin (500 ${\mu}g$) was injected intramuscularly at Day 0 followed by Alfaprostol (8 mg) at Day 7. A second injection of Gonadorelin was given at Day 9 and TAI was done with frozen semen from Mediterranean buffalo bulls at 16~20 hours of the second Gonadorelin injection. Milk progesterone ELISA at Day 10~12 post AI confirmed ovulation in 16 out of 20 (80%) buffaloes (progesterone concentration ${\geq}$ 1.0 ng/ml). High progesterone concentration (${\geq}$ 1.0 ng/ml) at Day 10~12 and Day 22~24 of AI showed pregnancy in six out of 20 (30%) buffaloes. Pregnancy was further confirmed by ultrasonography at Day 40 in these six buffaloes. In conclusion, ovsynch followed by TAI could be applied in cyclic buffaloes for overcoming the estrus detection problems; however, more studies are needed to increase the conception rate.
Early pregnancy diagnosis of bovine is an essential component for efficient reproductive plan in farms because long term of non-pregnancy results in economic losses by failure of offspring production and low milk yield in dairy cattle. The major steroid hormones related with reproduction are known to be progesterone and estrogen in bovine pregnancy. To evaluate detection level of hormones in milk, plasma and milk progestrone and estrogen of Holstein cows was analyzed during artificial insemination (AI) and embryo transfer (ET). Progesterone concentration at 21 days postestrus was significantly different in plasma and milk between pregnant and non-pregnant cows. Estrogen concentration at estrus was higher in pregnant recipients than that in non-pregnant recipients. To analyze correlation between hormone levels and conception rates in Holstein, the conception and return rates were checked following AI, and the returned cows were on the track of pregnancy after consecutive AI. Pregnant cows following first AI were considered as high conception group while pregnant cows following third AI were rated as low conception group. Proportion of high and low conception groups in this study was 78.2% and 9.1%, respectively. Hormone analysis indicated that high conception group had higher estrogen level during estrus than low conception group ($26.45{\pm}3.32$ vs $19.017{\pm}2.97$). Progesterone level was not different between high and low conception groups during estrus but increased significantly after 21 days postestrus (21 day: $4.95{\pm}1.12$ vs $0.95{\pm}0.23$, 35 day: $12.47{\pm}3.82$ vs $2.41{\pm}1.21$). In conclusion, the pattern of progesterone and estrogen secretion in Holstein milk samples could be a good candidate for early pregnancy detection and selection of recipients during ET.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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