• 한국생명과학회:학술대회논문집
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• 한국생명과학회 2008년도 제49회 학술심포지움 및 국제학술대회
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• pp.79.1-79.1
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• 2008

• 생명과학회지
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• 제18권8호
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• pp.1036-1041
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• 2008

$30{\sim}70%$ 황산암모늄 분획, Fast Q 음이온 교환수지 및 Phenyl Agarose 수지를 통해 돼지간유래의 methenyltetrahydrofolate synthetase를 정제하였으며 정제도는 119이었다. SDS-PAGE 및 HPLC를 이용한 gel permeation column chromatography에 의해 이 효소는 분자량이 23 kDa인 단량체로 확인되었다. 최적 온도와 최적 pH는 각각 $35^{\circ}C$ 와 6.5이었다. 이 효소는 tetranitromethane 및 1-ethyl-3-(3-dimethyl aminopropyl)-carbodiimide (EDC)에 의해서만 활성이 감소되었는데, 이는 티로신과 카르복실산이 효소의 활성부위에 존재한다는 것을 나타낸다. 활성부위의 pH 실험으로부터 2개의 티로신이 기질의 결합에 관여하며 하나의 카르복실기가 촉매반응에 관여한다는 사실이 관찰되었다. 따라서 이 효소는 2개의 티로신이 ATP와 5-formylTHF과 결합하며 하나의 카르복실기가 일반염기로서 촉매한다는 것을 알 수 있다.

• 대한화학회지
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• 제54권5호
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• pp.567-572
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• 2010

닭의 간으로부터 5,10-methenyltetrahydrofolate synthetase를 30-70% 황산암모늄 분획, Q Sepharose Fast Flow anion exchange and Source 15Phe hydrophobic interaction chromatography을 이용하여 정제하였다. 세포 추출물, 황산암모늄 분획, Q Sepharose Fast Flow와 Source 15Phe 단계에서의 비활성은 각각0.0085, 0.031, 0.80 및 1.27 U/mg 이었다. 세포 추출물, 황산암모늄 분획, Q Sepharose Fast Flow와 Source 15Phe 단계에서의 정제도는 각각 1, 3.7, 94.1 및 149.4 이었다. HPLC gel permeation chromatography와 SDS-polyacrylamide electrophoresis 실험으로부터 5,10-methenyltetrahydrofolate synthetase는 분자량이 22.8 kDa인 단량체임을 알 수 있었다. 5-methyl THF과 Mg-ATP의 Km은 각각 $7.1\;{\mu}M$ 및 $63\;{\mu}M$ 이었다. 최적온도와 최적pH는 각각 $30^{\circ}C$ 및 6.0 이었다. 금속이온에 대한 특이성과 스토키오메트리 실험으로부터 최고속도가 $Mg^{2+}$과 1:1일 때 얻어진다는 것을 알 수 있었다. ATP와 Km은 MgATP, MgCTP, MgUTP 및 MgGTP의 순서로 증가하였으며 최고 역가는 같은 순으로 감소하였는데, 이는 MgATP 가 가장 효과적인 기질임을 증명한다. 이 효소는 tetranitrometane 및 1-ethyl-3-(3-dimethyl aminopropyl)-carbodiimide에 의해서만 수식되었는데, 이는 tyrosine and carboxylate 잔기가 효소의 활성부위에 존재함을 나타낸다.