• 한국가축번식학회지
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• 제20권4호
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• pp.395-412
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• 1997

포유동물의 난자는 제 2 감수분열 중기에서 배란되어 수정된다. 일반적으로 포유동물에서의 수정은 inositol triphosphate (IP3) 또는 cyclic adenosine diphosphoribose (cADPr)에 의해 조절되어지는 세포질내 칼슘변화에 의해 일어난다. 난활성이 일어나면 세포질내 고농도의 MPF (maturation promotion factor)는 감소하고, 전핵이 형성되고, cytoskeleton이 재구성되고, 단백질합성이 조절되어진다. 이러한 모든 과정이 정상적으로 일어난 후 수정란은 종특이한 발달경로로 배발달을 시작한다. 본 논문에서는 돼지난자의 인위적인 난활성 유도방법에 대해서 설명하고자 한다. 신호전달(signal transduction) 경로에 의한 하나의 기전이 돼지난자에서 확인되었는데, 이 경로의 자극은 난활성으로 이루어진다. 또한 전기자극에 의한 난활성방법에 의해 12일까지 정상배 발달이 이루어진다고 보고되고 있다. 향후 연구에서는 정자가 어떠한 기전에 의해서 배발달을 시작하게 하는지를 밝혀내야 한다고 본다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제32권2호
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• pp.111-115
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• 2008

The aim of this study was to examine more effective cryoprotectant for the cryopreservation of mouse preantral follicles. Enzymetically isolated preantral follicles from 12-day-old mice were cryopreserved by a slow freezing protocol with 1.5 M propanediol (PROH), dimethyl sulphoxide (DMSO) or glycerol (GLY) and then grown and matured in vitro for 11 days after thawing. The survival of preantral follicles immediately after freezing and thawing was not different among the PROH (68.2%), DMSO (72.4%) and GLY (72.1%). After grown and matured in vitro, the rates of survival and metaphase II oocytes were 54.9% and 36.6% for PROH which was significantly higher rates (p<0.05) compared with the rates obtained from DMSO (16.9% and 9.0%) and GLY (16.3% and 7.5%). The diameter of metaphase II oocytes from pre antral follicles frozen in PROH ($67.4{\pm}1.8\;{\mu}m$) was significantly (p<0.05) smaller than that of the fresh preantral follicles ($69.1{\pm}2.3\;{\mu}m$). The results from the present study revealed that PROH is more suitable cryoprotectant for the cryopreservation of mouse preantral follicles.

• 한국임상수의학회지
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• 제7권2호
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• pp.517-519
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• 1990

소 난소로부터 난자를 채취하여 체외성숙과 체외수정을 실시하였다. 난의 성숙배양을 위한 배양액은 소 태아혈청을 첨가한 TCM 199으로 $CO_2$배양기에서 24시간 배양하였다. 체외수정에는 동결융해정액을 사용하였으며 Caffeine과 Ca Ionophore 처리후 매정에 공하였다. 배양난자중 40%가 Metaphase II까지 성숙하였다. 성숙율에 대한 소 태아혈청의 농도변화와 HEPES 첨가여부의 효과는 없었다. 체외수정율과 분할율의 성적은 각각 23.1%와 14.4%였다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제44권1호
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• pp.15-21
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• 2017

Objective: The aims of this study were to investigate whether fertilization could induce the resumption of meiosis in mouse oocytes arrested at metaphase I (MI) after in vitro maturation (IVM), and to investigate the effect of $Ca^{2+}$ chelator treatment at the time of fertilization on the transition from MI to metaphase II (MII). Methods: MII-stage and arrested MI-stage mouse oocytes after IVM were fertilized, and then embryonic development was monitored. Blastocysts from each group were transferred into 2.5 days post-coitum pseudo-pregnant ICR mice. MI oocytes after IVM were treated with a $Ca^{2+}$ chelator to investigate the effect of $Ca^{2+}$ oscillations on their maturation. Results: As insemination time increased, the number of oocytes in the MI group that reached the MII stage also increased. The blastocyst rates and total cell numbers in the MII group were significantly higher than in the MI group. No pregnancy occurred in the MI group, but 10 pregnancies were achieved (10 of 12) in the MII group. The proportion of MI oocytes that matured to MII oocytes after fertilization was significantly higher in the non-treated group than in the $Ca^{2+}$ chelator-treated group. Conclusion: The findings that a higher proportion of MI-arrested oocytes progressed to MII after fertilization and that the MI-to-MII transition was blocked by $Ca^{2+}$ chelator treatments before fertilization indicate that the maturation of MI oocytes to MII oocytes is associated with intracellular $Ca^{2+}$ oscillations driven by fertilization.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제23권3호
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• pp.357-366
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• 1996

The present experiments aimed to investigate the metabolism of calcium during oocyte maturation in rat. The concentration of free calcium and calmodulin in oocytes was measured respectively by using of fluo-3/AM and FITC with microscope fluorescence spectrometer. The ultrastructural localization of calcium precipitates in oocytes was observed with the transmission electron microscope. Cumulus-free immature oocytes(GV-oocyte) were cultured in vitro through 15 hours. The free calcium concentration in GV oocyte was $55.9{\pm}3.5nM$. In calcium-containing medium, the free calcium concentration was increased in germinal vesicle breakdown(GVBD) oocyte($64.2{\pm}7.3nM$). In normal medium after calcium chelator treatment ($10{\mu}M$ BAPTA/AM), the free calcium contents were slightly lower than those in control group. In calcium-free medium, the free calcium content was drastically increased in GVBD($72.7{\pm}3.4nM$) and metaphase I - anaphase I ($88.0{\pm}3.4nM$) oocyte. In maturation rate of oocytes, GVBD rate was high in control group($82.9{\pm}6.55%$) and calcium chelator treatment group($91.2{\pm}4.4%$), but in calcium-free medium group, it was low and then the oocyte was degenerated without polar body formation. Relative content of calmodulin in oocyte was significantly(P<0.001) increased in metaphase I - anaphase I than in GV and GVBD oocyte. The calcium precipitates were observed in mitochondria and cytoplasm of GV oocyte but that were not observed in mitochondria of GVBD and metaphase I - anaphase I oocyte. And then the calcium precipitates reappeared in mitochondria of metaphase II oocyte. The above results indicate that changes in free calcium and calmodulin concentration of oocyte occur according to the maturational stages and the extracellular calcium is required during oocyte maturation. Also change of calcium localization in oocyte occurs according to the maturational stages.

• 한국산림과학회지
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• 제45권1호
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• pp.51-61
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• 1979

교배(交配) 모수(母樹)인 P. alba화분(花粉) 모수(母樹)인 P. glandulosa 및 그의 잡종(雜種)인 ${\times}$P. albaglandulosa에 관(關)한 화분모세포(花粉母細胞)의 감수분열(減數分裂)에 있어 염색체행동(染色体行動)과 대합(對合) 현상(現象)에 관(關)해 조사(調査)하였다. 1. Metaphase II에서 Earyl separation chromosome을 갖는 핵판(核板)이 가장 적은 개체(個体)는 P. glandulosa로 11.0%며 ${\times}$P. albaglandulosa는 13.0%로 가장 높았다. 2. Metaph se II에서 ${\times}$P. albaglandulosa는 11.0%의 Early separation chromosome이 출현(出現)했으나 양친양친수(兩親兩親樹)와 차이(差異)는 없었다. 3. Anahase I에서 Lagging chromosome의 출현율(出現律)은 ${\times}$P. albaglandulosa가 다소(多少) 높아 11.6%로 나타났으며 chromosome bridge에서는 양친수(兩親樹)와 거의 차(差)가 없었다. 4. Anaphase II때 Lagging chromososome은 ${\times}$P. albaglandulosa에서 다소(多少) 높은 빈도(頻度)로 10.2%였으며 chromosome bridge P. glandulosa에서 가장 높은 빈도(頻度)로 출현(出現)하였다. 5. Abnormal pollen sporad는 ${\times}$P. albaglandulosa에서 가장 많이 출현(出現)하여 8.2%를 나타냈다. 이상(以上)의 결과(結果) P. alba, P. glandulosa 및 ${\times}$P. albaglandulosa는 화분모세포분열(花粉母細胞分裂)에 있어서 염색체분열접합(染色体分裂接合)이 정상적(正常的) 행동(行動)을 하고 있어 결국(結局) 정상(正常) 화분형식(花粉形式)을 행(行)하는 수종(樹種)이라 결론(結論)할 수 있다.

• 한국산림과학회지
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• 제51권1호
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• pp.1-21
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• 1981

자연잡종(自然雑種)으로 알려진 Populus glandulosa와, P. tomentiglandulosa에 대(対)하여 그의 잡종성(雑種性)과 분류학적(分類學的) 위치(位置)를 구명(究明)하기 위(為)하여, 형태(形態), 생리(生理), 및 핵학적(核學的)인 조사(調査)를 하여 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1. 접(接), 삽목(揷木)의 활착력(活着力)은 잡종간(雑種間)에 차이(差異)있고, 삽목발근력(揷木発根力)은 불완전(不完全) 우성(優性)이다. 2. 개엽성(開葉性)은 부완전(不完全) 우성(優性)이고 착엽성(着葉性)은 P. alba ${\times}$ glandulosa와 P. tomentiglandulosa가 강(強)하다. 3. $KClO_3$에 대(対)한 항독성(抗毒性)은 잡종간(雑種間)에 차(差)가 있다. 4. 엽(葉)의 많은 외부(外部) 형질(形質)들은 불완전(不完全) 우성(優性)이고, P. tomentiglanaulosa는 P. alba ${\times}$ glanaulosa와, 그리고, P. glandulosa는 P. davidiana와 P. alba와의 정(正), 역(逆) 또는 back cross hybrid와 유사(類似)하다. 5. 웅화수(雄花数)는 불완전(不完全) 우성(優性) 또는 잡종강세(雑種強勢) 현상(現象)을 하고, P. tomentiglandulosa는 P. alba ${\times}$ glandulosa와 그리고, P. glandulosa는 P. alba ${\times}$ davidiana 또는 P. davidiana ${\times}$ alba와 수(数)가 근사(近似)하다. 6. male catkin의 포(苞)의 형태(形態)와 대색(帶色)은 불완전(不完全) 우성(優性)이고, P. glandulosa는 P. alba ${\times}$ davidiana에, 그리고 P. tomentiglandulosa는 P. alba ${\times}$ glandulosa와 유사(類似)하다. 7. 엽병(葉炳)의 유관속(維管束)의 수(数)와 배열형(配列型)은 잡종간(雑種間)에 차이(差異)가 있고 잡종(雑種)들은 복잡(複雜)한 형(型)을 하고 있다. 8. 유경(幼莖)의 해부학적(解剖學的) 성질(性質)은 잡종간(雑種間)에 차(差)가 없으나, 목섬유(木纖維)의 크기는 차(差)가 있다. 9. metaphase I과 II에 있어, 인공(人工) 잡종(雑種)과 P. glandulosa 또는 P. tomentiglandulosa는 염색체(染色體) 행동(行動)이 불규칙(不規則)하였다. 10. metaphase I에서 잡종(雑種)과 P. glandulosa 그리고 P. tomentiglandulosa는 19II의 핵판(核板)이 적고, 일가(一価) 염색체(染色体)가 다수(多数) 출현(出現)한다. 11. anaphase I과 II에 있어, laggard chromosome과 chromosome bridge가 있는 이상핵판(異常核板)이 잡종(雑種)과 P. glandulosa 그리고 P. tomentiglandulosa에서 다수(多数)히 출현(出現)하였다. 12. pollen tetrad와 임성화분(稔性花紛)의 출현율(出現率)이 잡종(雑種)과 P. glanaulosa, 그리고, P. tomentiglandulosa에서 낮았다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제8권1호
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• pp.35-42
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• 2004

미성숙의 Germinal Vesicle(GV 단계에서 성숙한 Metaphase II(MII) 단계가 되는 난자성숙 과정은 핵과 세포질의 성숙을 통해 이루어지며, 이를 통해 수정과 배 발달을 할 수 있는 능력을 갖게 된다. GV 난자는 prophase I 단계에 arrest 되어 있다가 meiosis 과정을 거쳐 성숙한 MII로 되는데 이를 조절하는 기작에 대해서는 거의 알려져 있지 않다. 따라서 본 연구는 미성숙 난자와 성숙 난자간의 유전자 발현의 차이를 동정함으로써 난자성숙에 관여하는 유전인자를 밝히고자 하였다. GV와 MII 난자에서 mRNA를 정제한 후 ACP System을 이용하여 두 그룹간의 유전자 발현 차이를 분석하여 양적으로 서로 다르게 발현하거나 한쪽에서만 특이적으로 발현하는 유전자를 cloning하여 Sequencing과 BLAST search를 통해 분석하였다. ACP 1번부터 20번까지를 사용하여 32개의 유전자를 찾았으며 이중 26개가 기능적으로 알려진 유전자였다. Pscd2를 포함한 4개의 유전자는 GV에 특이적으로 발현하였고, PKD2와 CSN3를 포함하는 10개의 유전자는 GV에서 더 높게 발현하였으며 Diva를 포함하는 12개의 유전자는 MII에서 더 높게 발현하였다. 본 연구를 통해 분석된 모든 유전자는 난자에서의 발현은 보고되지 않은 것으로 ACP System을 통해 최초로 동정되었으며 특히 PKD-CSN Signaling pathway가 난자에서 발현함을 알 수 있었다. 본 연구는 난자 성숙 과정에서 서로 다르게 발현하는 유전인자를 성공적으로 동정하였으며 향후 이들의 기능을 연구함으로써 난자성숙 조절기전을 연구하는데 기여할 것으로 사료된다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제17권3호
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• pp.317-324
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• 2004

The present study was conducted to investigate the involvement of nitric oxide (NO) in cumulus expansion, oocyte mortality and meiotic maturation of porcine cumulus enclosed oocytes (CEOs) cultured in two different models when gonadotropins, including follicle-stimulating hormone (FSH) and human chorionic gonadotropin (hCG) were presented or not. And the interaction between NO and $\beta$-mercaptoethanol ($\beta$-ME), a free radical scavenger was also investigated. Two models refer to spontaneous maturation model and hypoxanthine (HX) medium model. All the 3,433 eligible CEOs were incubated at $39^{\circ}C$ and the cumulus expansion, oocyte morphology and nuclear phase were evaluated 44 h after incubation. (1) In spontaneous maturation model, NO stimulates the cumulus expansion and $\beta$-ME delayed it. NO doesn't affect the oocyte meiotic resumption but inhibits the oocytes to develop to metaphase II. (2) In HX medium model, NO or $\beta$-ME doesn't affect the expansion in the absence of gonadotropins, but in the presence of gonadotropins, NO or $\beta$-ME inhibits the expansion. In the presence of gonadotropins, NO inhibits the oocyte meiotic resumption and it especially inhibits the oocyte to develop to metaphase II, and $\beta$-ME reverses such inhibitory effects. The cooperation of gonadotropins and $\beta$-ME stimulates the meiotic resumption and especially, promotes the CEOs to develop to metaphase II in both models. Moreover, HX might contribute to the fragility of oocyte zona pellucida and gonadotropins, nitric oxide and $\beta$-ME could alleviate it separately, and cooperatively. It is concluded that NO exerts different functions in two models and $\beta$-ME affected the functions of NO in different models.

• 한국가축번식학회지
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• 제23권1호
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• pp.53-61
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• 1999

본 연구는 생쥐 preantral follicle 의 체외성장 및 성숙에 있어서 gonadotrophins 인 FSH 와 LH 의 효과를 조사하기 위하여 실시하였으며, 그 결과는 다음과 같다. 1. FSH 첨가군들은 대조군에 비하여 유의하게 높은 생존율과 성숙율을 나타냈으며, 100$m\ell$D/$m\ell$ 의 FSH 농도가 preantral follicle 의 체외배양에 적정한 농도인 것으로 나타났다. 2. HMG 첨가군은 FSH 첨가군보다, 통계적 유의차는 인정되지 않았지만, 높은 생존율과 성숙율을 나타냈다. 3. FSH 와 LH 의 첨가비율이 100$m\ell$U/$m\ell$ 대 10$m\ell$D/$m\ell$(10:1) 에서 가장 높은 생존율과 성숙율을 나타냈다. 4. FSH 혹은 HMG 첨가시, 정상적인 oestradiol 과 progesterone 분비양상을 나타냈으며, HMG 첨가군에서 유의하게 높은 농도의 oestradiol 과 progesterone 을 분비하였다. 이상의 결과를 종합해 볼 때, gonadotrophins 은 preantral follicle 의 체외성장 및 성숙뿐만 아니라 steroidogenesis 에서 중요한 역할을 수행한다는 것을 확인할 수 있었다.