The cytotoxic activities of the methanol extracts of 44 plant species in 31 families against five human solid A549 (lung), SK-OV-2 (ovarian), SK-MEL-2 (melanoma), XF-498 (central nervous system), and HCT-15 (colon) tumor cell lines were examined using the sulforhodamine B (SRB) assay. Responses varied with both cell line and plant species used. Potent cytotoxic activities ($ED_{50}$, <$40{\mu}g/ml$) against all model tumor cell lines were produced from the extracts of Rhus chinensis gall (Galla rhois), Betula platyphylla var. japonica bark, Inula helenium root, Cinnamomum cassia bark, Cinnamomum sieboldii root bark, Lysimachia davurica whole plant, and Evodia rutaecarpa fruit. These plants may be useful for developing new types of naturally occurring anti-tumor agents.
1. 연구배경 세계적으로 암환자의 증가는 물론이거니와 사망자수도 증가하고 있는 추세이다. 우리나라의 경우도 암이 주된 사망원인으로 보고되어 있다. 종양의 발생기전이나 생물학적인 성상은 매우 복잡하고, 암을 치료하는 기전도 매우 복잡하다. 최근의 한의학적인 접근이 시도되면서 많은 경우에서 그 효능이 실험적으로 연구되고 있다. 한의학에서의 종양(腫瘍)의 치료방법(治療方法)은 서간이기(舒肝理氣), 강역지구(降逆止嘔), 활혈화어(活血化瘀), 이기화결(理氣化結), 건비조습(健脾燥濕), 화울산결(化鬱散結), 양음청열(養陰淸熱), 생진화담(生津化痰)을 이용하는데, 식분탕(息賁湯)은 '치폐지적(治肺之積), 재우협하(在右脇下), 대여복배(大如覆杯), 구부유(久不愈), 세세한열, 기역천해(氣逆喘咳), 발위폐옹(發爲肺癰)'의 효과가 있고, 구성약재들도 한의학적인 치료법에 합당하여 암 치료에 응용할 수 있는 처방으로 생각된다. 따라서 식분탕(息賁湯)을 이용하여 항암력과 면역능의 증진 및 폐전이 흑색종의 증식억제에 대하여 연구하고자 하였다. 2. 실험방법 본 연구에서는 식분탕(息賁湯)의 폐암 및 복강암에 대한 효과를 알아보기 위하여 암을 유발시킨 웅성(雄性) 생쥐에 식분탕(息賁湯) 엑기스를 투여하여 항암효과 및 면역능을 측정하였다. 측정항목은 시험관내 세포독성능을 위하여 MTT 법을 실시하였으며, Sarcoma-180세포를 ICR생쥐에 이식한 후 복강암 생쥐의 생존기간 및 고형종양의 저지율, IL-2 (Interleukin-2)생산능, NK(Natural Killer cell)-Activity을 측정하였고, B16세포를 C57BL/6생쥐에 정맥주사한 후 폐에 전이된 악성 흑색종의 집락수를 측정하였다. 3. 실험결과 시험관내 세포독성을 MTT법에 의하여 측정하였던 바 식분탕(息賁湯)의 용량이 $10{\mu}g/ml$, $100{\mu}g/ml$의 경우에 대조군에 비하여 유의성있는 효과를 보였다(P<0.05). 발암 생쥐의 생존기간 연장효과에 있어서 식분탕(息賁湯)투여군에서 대조군에 비하여 증가하는 경향이 있었으나 유의성은 없었다. 종양의 중량을 측정하였던 바 식분탕(息賁湯)투여군에서 대조군에 비하여 감소하는 경향이 있었으나 유의성은 없었다. 폐전이 흑색종의 군집수 측정에서는 식분탕(息賁湯)투여군이 대조군에 비하여 유의성있는 감소를 보였다(P<0.05). IL-2의 생산능은 식분탕(息賁湯) 엑기스 투여군에서는 대조군에 비하여 7일과 14일째에 유의성있는 증가를 보였고(P<0.05), 21일째는 증가하는 경향만 보였다. NK-Activity에서는 작동세포와 표적세포의 비가 50:1 일 때 대조군에 비하여 유의성있게 증가하였고(P<0.05), 나머지의 경우는 증가하는 경향을 보였다.
한약재(韓藥材)의 암치료(癌治療)에 응용(應用) 가능성(可能性)을 연구(硏究)한 23종(種)의 논문(論文)을 대상(對象)으로 하여 문헌적(文獻的)으로 고찰(考察)한 바, 한의학(韓醫學)에서는 청열해독(淸熱解毒), 소종지혈(消腫止血), 활혈화어(活血化瘀), 이기보비양혈(理氣補脾養血), 화담연견(化痰軟堅), 건비화습(健脾化濕), 이기산결(理氣散結)하는 한약재(韓藥材)를 이용하여 부정법(扶正法), 거사법(祛邪法), 부정거사법(扶正祛邪法)으로써 암치료(癌治療)에 응용(應用)하고 있으며, 실험(實驗)에 사용(使用)된 약물(藥物)은 총(總) 103종(種)으로 이 중(中)에서 어성초(魚腥草), 저령, 천산갑(穿山甲), 오수유(吳茱萸), 목향(木香), 흑축(黑丑) 등의 항암효과(抗癌效果)가 우수(憂愁)한 것으로 나타났는데, 특히 어성초(魚腥草)는 암세포주(癌細胞柱)에 대한 감수성(感受性)도 높게 나타났지만 정상세포(正常細胞)에 대한 억제효과(抑制效果)는 낮게 나타났고, 오수유(吳茱萸), 목향(木香), 흑축(黑丑)은 20여종의 암세포주(癌細胞柱)에 모두 높은 세포독성(細胞毒性)이 나타났으며, 삼백초(三白草)는 HT-29, melanoma, SK-MEL-5에, 지모(知母)는 난소암(卵巢癌) 세포주(細胞柱)에, 형개(荊芥)는 HT-29 세포주(細胞柱)에 특히 높은 활성(活性)을 보였다. 또한 실험(實驗)에 사용된 암세포주(癌細胞柱) 중에서 생쥐 유래의 P815, Yac-1 세포주(細胞柱)와 사람의 Sarcoma 180, K562, SNU-1 세포주(細胞柱)가 가장 다용(多用)되었다.
Kim, Kyuri;Jeong, Hae-In;Yang, Inho;Nam, Sang-Jip;Lim, Kyung-Min
Journal of Ginseng Research
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제45권1호
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pp.98-107
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2021
Background: Ginseng extracts and ginseng-fermented products are widely used as functional cosmetic ingredients for their whitening and antiwrinkle effects. Recently, increasing attention has been given to bioactive metabolites isolated from endophytic fungi. However, little is known about the bioactive metabolites of the fungi associated with Panax ginseng Meyer. Methods: An endophytic fungus, Penicillium sp. SNF123 was isolated from the root of P. ginseng, from which acremonidin E was purified. Acremonidin E was tested on melanin synthesis in the murine melanoma cell line B16F10, in the human melanoma cell line MNT-1, and in a pigmented 3D-human skin model, Melanoderm. Results: Acremonidin E reduced melanogenesis in α-melanocyte-stimulating hormone (α-MSH)-stimulated B16F10 cells with minimal cytotoxicity. qRT-PCR analysis demonstrated that acremonidin E downregulated melanogenic genes, including tyrosinase and tyrosinase-related protein 1 (TRP-1), while their enzymatic activities were unaffected. The antimelanogenic effects of acremonidin E were further confirmed in MNT-1 and a pigmented 3D human epidermal skin model, Melanoderm. Immunohistological examination of the Melanoderm further confirmed the regression of both melanin synthesis and melanocyte activation in the treated tissue. Conclusion: This study demonstrates that acremonidin E, a bioactive metabolite derived from a fungal endophyte of P. ginseng, can inhibit melanin synthesis by downregulating tyrosinase, illuminating the potential utility of microorganisms associated with P. ginseng for cosmetic ingredients.
Park, Jun-Young;Jo, Jae-Beom;Kim, In-Ryoung;Kim, Gyoo-Cheon;Kwak, Hyun-Ho;Park, Bong-Soo
International Journal of Oral Biology
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제36권3호
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pp.155-162
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2011
Eugenol (4-allyl-2-methoxyphenol) is a naturally occurring phenolic compound that is widely used in dentistry as a component of zinc oxide eugenol cement that is commonly applied to the mouth environment. Cisplatin is one of the most potent known anticancer agents and shows significant clinical activity against a variety of solid tumors. This study was undertaken to investigate the synergistic apoptotic effects of co-treatments with eugenol and cisplatin on human melanoma (G361) cells. To investigate whether this co-treatment efficiently reduces the viability of G361 cells compared with each single treatment, an MTT assay was conducted. The induction and augmentation of apoptosis were confirmed by DNA electrophoresis, Hoechst staining and an analysis of DNA hypoploidy. Western blot analysis and immunofluorescent staining were also performed to evaluate the expression levels and the translocation of apoptosis-related proteins following this co-treatment. Furthermore, proteasome activity and mitochondrial membrane potential (MMP) changes were also assayed. The results indicated that a co-treatment with eugenol and cisplatin induced multiple pathways and processes associated with an apoptotic response in G361 cells including nuclear condensation, DNA fragmentation, a reduction in MMP and proteasome activity, the increase and decrease of Bax and Bcl-2, a decreased DNA content, the release of cytochrome c into the cytosol, the translocation of AIF and DFF40 (CAD) into the nucleus, and the activation of caspase-9, caspase-7, caspase-3, PARP and DFF45 (ICAD). In contrast, separate treatments of 300 ${\mu}M$ eugenol or 3 ${\mu}M$ cisplatin for 24 h did not induce apoptosis. Our present data thus suggest that a combination therapy of eugenol and cisplatin is a potential treatment strategy for human melanoma.
1. 연구배경 종양은 발생원인과 기전이 밝혀져 있지 않고, 그 생물학적인 성상이 복잡하다. 최근에는 암에 의한 사망이 증가하고 있으며, 종양치료에 대한 연구가 진행되고 있다. 한의학계에서도 이러한 경향으로 한의학적인 치료법을 이용한 종양치료를 시도하고 있다. 반하후박탕은 난질비장(蘭窒秘藏)에 복부의 적취에 사용된 처방으로, 실험적인 연구는 시도되지 않았다. 따라서 항암 및 면역조절에 관한 영향을 알아보고자 실험에 임하였다. 2. 연구방법 본 연구에서는 반하후박탕이 폐암 및 복강암에 대한 효과를 알아보기 위하여 암을 유발시킨 웅성(雄性) 생쥐에 반하후박탕 엑기스를 투여하여 항암효과 및 면역능을 측정하였다. 측정항목은 시험관내 세포독성을 위하여 MTT 법을 실시하였으며, Sarcoma-180세포를 ICR생쥐에 이식한 후 복강암생쥐의 생존기간 및 고형조양의 저지율, IL-2(Interleukin-2) 생산능, NK(Natural Killer cell)-Activity을 측정하였고, B16세포를 C57BL/6생쥐에 정맥주사한 후 폐에 전이된 악성 흑색종의 집락수를 측정하였다. 3. 연구결과 시험관내 세포독성을 MTT법에 의하여 측정하였던 바 반하후박탕의 용량이 $10{\mu}g/ml$, $100{\mu}g/ml$의 경우에 대조군에 비하여 유의성있는 효과를 보였다(P<0.05). 발암 생쥐의 생존기간 연장효과에 있어서 반하후박탕투여군에서 대조군에 비하여 6.67%의 증가하는 경향이 있었으나 유의성은 없었다. 종양의 중량을 측정하였던 바 반하후박탕투여군에서 대조군에 비하여 32.78%의 감소하는 경향이 있었으나 유의성은 없었다. 폐전이 흑색종의 집락수를 측정한 결과 반하후박탕투여군이 대조군에 비하여 유의성있는 감소를 보였다(P<0.05). IL-2의 생산능은 반하후박탕투여군에서는 대조군에 비하여 7일과 14일째에 유의성있는 증가를 보였고(P<0.05), 21일째는 증가하는 경향을 보였다. NK-Activity에서는 모든 경우에서 감소하는 경향을 보였다. 이상을 종합하면 반하후박탕이 Sarcoma-180세포에 대하여 직접적인 세포독성능을 나타내며, 복강 생쥐의 생존기간을 연장시키고, 고형종양의 성장은 억제하며, 보조 T세포를 자극하여 IL-2의 생산능을 증가시켜 종양의 성장을 억제하는 것으로 생각된다.
본 연구에서는 증폭시킨 홍삼으로부터 분리한 ginsenoside Rh2(Rh2)와 compound K(CK)의 융복합적 항염증 및 항암효과를 연구하여 홍삼 내 유용한 기능성분에 대한 기초 자료를 제공하고자 한다. 이에 Hep3B에서의 세포독성과 IL-6 유도 STAT3 루시퍼라아제 활성, B16F10과 Hacat 세포의 생존 농도를 측정하였고 Apoptosis와 관련된 분자의 발현양상을 확인하기 위해 FAC (fluorescence activated cell sorting) 분석을 수행하였다. 실험결과 Rh2, CK mixture가 10 ug/ml일 때 Hep3B 세포에서 세포독성이 없고 IL-6 감소율이 102%로 항염증 효과가 있는 것으로 나타났다. 또한 Rh2, CK mixture 50 uM에서 melanoma 세포인 B16F10과 human keratinocyte인 Hacat에서 독성을 보여 사멸하는 것을 관찰하였다. FACS 분석 결과 annexin V가 발현되지 않고 흑색종 세포와 keratinocyte가 탈착되면서 사멸되는 것을 확인하였다. 이러한 현상을 통하여 사멸되는 메카니즘이 anoikis 방식의 세포사멸로 인한 것으로 추정할 수 있으며 그것에 대한 명확한 세포사 신호 체계 규명을 위하여 향후 세포부착 단백질의 변화에 대한 연구가 필요할 것으로 판단된다.
Objectives : To characterize the antitumorigenic potential of three representative bee venom components, Melittin, Apamin, and Phospholipase A2, their effects on cell proliferation and apotosis of the human melanoma cell line SK-MEL-2 were analyzed using molecular biological approaches. Methodes & Results : To determine the doses of the drugs that do not induce cytotoxic damage to this cell line, cell viability was examined by MTT assay. While SK-MEL-2 cells treated with 0.5 - 2.0㎍/㎖ of each drug showed no recognizable cytotoxic effect, marked reductions of cell viability were detected at concentrations over 5.0㎍/㎖. [3H]thymidine incorporation assay for cell proliferation demonstrated that DNA replication of SK-MEL-2 cells is inhibited by Apamin and Phospholipase A2 in a dose-dependent manner. Consistent with this result, the cells were accumulated at the G1 phase of the cell cycle after treatment with Apamin and Phospholipase A2, whereas no detectable change in cell proliferation was identified by Melittin treatment. In addition, tryphan blue exclusion and flow cytometric analyses showed that all of these drugs can trigger apoptotic cell death of SK-MEL-2, suggesting that Melittin, Apamin, and Phospholipase A2 have antitumorigenic potential through the suppression of cell growth and/or induction of apoptosis. Qantitative RT-PCR analysis revealed that Apamin and Phospholipase A2 inhibit expression of growth-promoting genes such as c-Jun, c-Fos, and Cyciin D1. Furthermore, Phospholipase A2 induced tumor suppressors p53 and p21/Wafl. In addition, all three drugs were found to activate expression of a representative apoptosis-inducing gene Bax while expression of apoptosis-suppressing Bcl-2 and Bcl-XL genes was not changed. Taken together, this study strongly suggests that Metittin, Apamin, and Phosphalipase A2 may have antitumorigenic activities, which are associated with its growth-inhibiting and/or apoptosis-inducing potentials.
본 연구는 인삼 panaxynol이 인체 흑색종 세포주 SK-MEL-1 미치는 항증식효과의 분자적 기전을 알아보고자, 세포주기와 세포주기 조절인자들의 발현변화, 단백질 합성 억제제와 proteasome억제제가 panaxynol의 항암효과에 미치는 영향을 조사하였다. panaxynol은 세포주기의 G1 단계 진행을 억제시켰으며, 동시에 $p21^{WAF1}$ 발현 증가와 cdc2의 발현 감소를 유발하였다. 이에 비해 p16, p27, E2F-1, Rb, p53의 발현에는 변화가 없었다. 이 결과는 panaxynol의 SK-MEL-1 세포에서 $p21^{WAF1}$의 발현을 증가시키고 cdc2의 발현을 감소시켜, 세포주기의 G1-S 이행 단계를 억제한다는 것을 보여준다 또한 CHX는 panaxynol의 항암효과를 감소시키고, LLnL은 panaxynol의 항암 효과를 증가시켰는데, 이는 panaxynol에 의한 SK-MEL-1 세포의 증식억제에 새로운 단백질 합성이 필요하며, LLnL이 panaxyno떼 의한 세포증식억제를 매개하는 $p21^{WAF1}$등의 단백질 분해를 저해시키기 때문인 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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