Monitoring for megalocytivirus infection was conducted for ten months from March to December in 2013 in 15 aquatic farms culturing, red sea bream, rock bream, rock fish and black sea bream around Tongyoung coastal area in Korea, to assess spatial and temporal variability of detection prevalence, and to explore possible links with seawater temperature. In nested-PCR targeted major capsid protein (MCP) gene, asymptomatic megalocytivirus infection was detected in the externally healthy farmed fish with a significant prevalence in range from 0 to 58.3% for ten months. Higher prevalence of megalocytivirus (46.7% - 57.1%) was observed in high water temperature season from September to November than that in other months with lower prevalence of 0.0% to 20.0%. Even though an acute infection of megalocytivirus was occurred in rock bream (positive in the first PCR) with high mortality in one of fifteen farms, there was no expansion or transmission of the disease to the rock fish and red sea bream culturing in net cage just proximal to the rock bream cage in which disease outbreaked. Nucleotide sequence analysis of the cloned MCP gene isolated asymptomatically infected rock fish revealed that the megalocytivirus in this study was clustered together with the rock bream iridovirus (RBIV) under the subgroup II of the genus megalocytivirus (Iridoviridae), which is known to be the major megalocytivirus strain in Korea. The typical histopathological signs were not found in the spleen of rock fish asymptomatically infected by megalocytivirus. Experimental infection of rock bream with the spleen homogenate of the rock fish infected asymptomatically did not induce any mortality unlike the homogenate of infected rock bream with hih mortlity. However, these results may suggest that the asymptomatic infection of megalocytivirus in other fish species can be a potential risk threatening aquaculture industries as a transmission factor of megalocytivirus to susceptible fish species, especially rock bream.
Viruses in the genus Megalocytivirus have been subdivided into four subgroups. Among these subgroups 2 and 4, represented by the red sea bream iridovirus (RBIV) and the olive flounder iridovirus (FLIV), respectively, are non-exotic. subgroups 1 and 3, represented by the red sea bream iridovirus (RSIV) and the infectious spleen and kidney necrosis virus (ISKNV), respectively, have not been detected in Korea and are known as exotic. Shellfish are filter-feeders, and can thus filter and accumulate Megalocytivirus in their digestive glands, allowing us to track viral contamination in surrounding aquatic environment. In this study, we developed a high-resolution melting (HRM) analysis to differentiate among subgroups of Megalocytivirus accumulated in shellfish, and confirmed the convenience and efficiency of this method. More than two subgroups of Megalocytivirus were found in the digestive gland of a single shellfish. We classified all Megalocytivirus viruses from shellfish in Korea into subgroups 2 and 4, although proportions of subgroups were different among regions. Compared to nucleotide sequencing analysis, HRM analysis is a simple and rapid method for differentiating of Megalocytivirus subgroups.
Megalocytivirus 감염 시 나타나는 임상적 증상의 정량적인 분석을 위하여, 돌돔에서 분리된 megalocytivirus IVS-1을 돌돔성어와 치어에 인위 감염시켰다. 그 결과 spleen index가 각각 $4.49{\pm}1.13$와 $4.85{\pm}1.06$로 나타 났으며, 이것은 정상배에 비해 3배 이상 증가한 값이었다. 폐사율은 돌돔성어와 치어에서 모두 100% 폐사한 반면 참돔치어는 30일이 지나도 60%의 폐사만 나타나 돌돔폐사율에 비해 낮은 폐사율을 나타냈다. 또한 IVS-1을 감염시킨 빈사상태의 참돔치어는 spleen index가 동일 크기의 돌돔치어 보다 낮은 $1.47{\pm}0.87$을 보였다. Real-time PCR을 이용하여 감염의 진행에 따른 바이러스 농도를 측정한 결과, 돌돔 치어와 성어의 감염 조직 내 바이러스 최고 농도는 각각 $2.03{\times}10^7$ copies/mg과 $2.40{\times}10^7$ copies/mg으로 비슷하였으나 돌돔성어에서 먼저 최고치에 도달하였다. 더구나 비장의 비정형비대세포의 수 역시 돌돔치어의 경우 지속적으로 증가한 반면 돌돔성어의 경우 최고치에 도달 후 오히려 감소히는 경향을 보였다. 본 연구에서는 megalocytivirus 감염 시 조직의 형태적 변화와 조직 내의 바이러스 농도와 같은 임상적인 증상을 정량적인 분석을 통해 나타내었고 이러한 정량적인 수치와 megalocytivirus 감염의 진행 정도와의 상관관계에 대해 조사하였다.
Systemic infections of maricultured fishes by Megalocytivirus species have occurred over a broad area in South Korea, causing extensive economic loss. We developed digoxigenin-labeled nucleic acid probes against the 230-bp ATPase and 311-bp major capsid protein (MCP) of rock bream Oplegnathus fasciatus iridovirus (RBIV) using polymerase chain reaction, and an in situ hybridization (ISH) method to detect Megalocytivirus in formalin-fixed tissues of mariculture species (rock bream, sea bass, and olive flounder). ISH-positive cells were abundant in the hematopoietic and connective tissues of various organs, while brain tissue showed little or no signal. The ISH procedure can become an important diagnostic tool in complement with histopathological methods, and advances epidemiological studies on the origin and distribution of Megalocytivirus in mariculture.
Megalocytivirus는 우리나라를 포함한 아시아 각국의 양식현장에서 고위험성 병원체이다. 그럼에도 불구하고 어류의 면역체계와 megalocytivirus의 상호관계에 관한 연구는 아직 부족한 실정이다. 다양한 연구에서 cyclooxygenase isoform중 COX-1 유전자는 constitutive 하게 발현되며, COX-2 enzyme은 면역반응에 중요한 역할을 한다고 알려져 있다. 또한 COX-2 유전자는 LPS (lipopolysaccharide) 또는 병원체의 감염과 같은 염증반응 시 그 발현이 증가한다고 알려져있다. 본 연구는 다른 어종의 COX-2 유전자를 바탕으로 제작된 degenerated primer와 5'- 그리고 3'-end RACE-PCR을 이용하여 돌돔에서 COX-2 유전자의 전체 염기서열을 밝혔으며, 그 결과 rbCOX-2 (rock bream COX-2)유전자 cDNA의 전체 길이는 2655 bp 였으며, 609개의 아미노산으로 구성되어있었다. rbCOX-2 유전자의 genomic organization은 9개의 intron과 10개의 exon으로 구성되어 있었다. 또한 본 연구에서는 돌돔에 megalocytivirus의 인위감염 시 COX-2 유전자의 발현을 조사하였다. LPS 접종 시 rbCOX-2 유전자는 접종 1일 후 대조구와 비교하여 13.10배 증가하여 최고 발현을 보였으나, megalocytivirus 접종 시 대조구와의 비교에서 유의적인 발현을 확인할 수 없었다. 돌돔에서 COX-2 유전자의 염기서열의 분석과 발현 분석은 바이러스 감염 시 어류의 방어기작을 이해하는데 도움이 될 것이며, 바이러스 백신개발 및 치료제 개발의 기초자료로 활용될 것이다.
본 연구에서는 2012년부터 2018년 1월까지 국내 어류에서 참돔이리도바이러스병 (red sea bream iridoviral disease; RSIVD) 으로 확정 진단된 주요 분리주에 대하여 major capsid protein (MCP) 유전자의 염기서열을 바탕으로 Megalocytivirus의 유전적 관계를 명확히 했다. 또한, Megalocytivirus와 숙주 세포간 상호작용에 영향을 줄 수 있는 특이 유전자 2종, Vascular endothelial growth factor (VEGF) 및 Histidine triad motif인 HIT-like 단백질 (HIT)에 대한 염기서열 분석을 통해 유전적 상관관계를 고찰하였다. 국내 어류에서 분리된 39개의 megalocytiviruses는 2가지 유전형인 red sea bream iridovirus (RSIV)형과 turbot reddish body iridovirus (TRBIV)형으로 분류되었으며, RSIV형의 megalocytiviruses는 다시 유전아형인 RSIV-subgroup 1형과 2형으로 분류되었다. 그리고 VEGF 유전자 염기서열 분석 결과에서는 RSIV형의 바이러스에서 변이가 발생되었음을 확인할 수 있었으며, HIT-like 단백질 유전자는 RSIV형의 Megalocytivi rus에서만 발견되는 것을 알 수 있었다.
After an outbreak of viral disease in an aquafarm, release of virus (es) from infected fish into environmental seawater has been suspected. In the present study, we utilized a negatively charged membrane (HA type) as an efficient method for concentration and detection of fish pathogenic viruses, specifically, megalocytivirus and viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) present in field-collected seawater samples or inoculated into seawater artificially. Positively charged viruses adsorbed onto the negatively charged membrane and were eluted with 1 mM NaOH (pH 10.5) following rinsing with 0.5 mM $H_2SO_4$ (pH 3.0). Megalocytivirus and VHSV particles isolated using anegatively charged HA membrane from seawater inoculated with each virus at a concentration of 10 viral particles/mL were of sufficient quantity to show positive results in atwo-step PCR (or RT two-step PCR); however, despite it being negatively charged, a cellulose acetate (CA) membraneshowed negative results. In quantitative PCR, the detection limits of the HA membrane for megalocytivirus and VHSV in seawater were 1.20E+00 viral particles/mL and 1.22E+01 viralparticles/mL, respectively. The calculated mean recovery yields from 1 L seawater spiked with known concentrations of megalocytivirus and VHSV particles were 28.11% and 23.00%, respectively. The concentrate of a 1-L sample of culturing seawater from the aquatank of flounder suffering from VHSV showed clear positive results in PCR when isolated with an HA, but not a CA, membrane. Thus, viral isolation using an HA membrane is a practical and reliable method for detection of fish pathogenic viruses in seawater.
패류 내에 오염되어 있는 바이러스의 검출에 있어서 정성 정량적 분석이 기능하며 신속하고 간편한 방법의 개발을 이루고자 하였다. 5g의 굴 중장선 조직을 Glycine buffer 및 PEG 8000 용액을 사용하여 제조한 농축 시료 (T5g-D)와 50mg의 굴 중장선 조직으로부터 직접적으로 제조한 시료(sT5Omg-D)를 대상으로 2-step PCR을 실시하여 검출감도를 비교하였다. 동일한 1 ${\mu}l$의 DNA template T5g-D와 sT50mg-D를 사용하였을 때, 35cycles의 1-step PCR에서 양성의 결과를 얻을 수 있었다. 인위적으로 sT50mg-D 혼합 시료를 사용하여 2-step PCR (35cycles)을 실시하였을 때 T5g-D를 사용한 것과 비교하여 뚜렷한 차이를 나타내지 않았다. 또한 megalocytivirus에 오염된 양성시료 0.5~50mg을 사용하여 조제한 각각 $50{\mu}l$의 template DNA 1 ${\mu}l$를 사용하여 qPCR을 하였을 때 6.14E+00~1.2E+02/${\mu}l$의 농도를 함유하고 있는 것으로 나타났다. 조제한 template DNA에 6.14E+00 copies/${\mu}l$ 이하의 농도가 있을 때는 qPCR에서 positive의 결과를 얻을 수 없었다. 결론적으로 패류 내 mega1ocytivirus의 오염 유무 판단을 위한 2-step PCR 및 qPCR에서 50mg의 중장선을 사용하는 것은 i) 굴의 조직으로부터 오염된 megalocytivirus의 정성 및 정량을 위한 최소 검출 한계에 벼하여 충분한 양이었으며 ii) 개체별 분석이 가능하다는 장점이 있었으며 iii) 이를 토대로 국내에서 서식하고 있는 굴에서 megalocytivirus의 오염을 확인할 수 있었다.
Won, Kyoung-Mi;Cho, Mi Young;Park, Myoung Ae;Jee, Bo Young;Myeong, Jeong-In;Kim, Jin Woo
Fisheries and Aquatic Sciences
/
제16권2호
/
pp.93-99
/
2013
In 2009, a systemic megalocytivirus infection associated with high mortality was detected for the first time in cultured starry flounder Platichthys stellatus in Korea. Diseased starry flounder had pale bodies and gill coloring and enlarged spleens. Histopathological examinations revealed basophilic enlarged cells in various organs of diseased starry flounder. Polymerase chain reaction (PCR) was performed on tissue samples using three published primer sets developed for the red sea bream iridovirus. PCR products were detected for all primer sets, except 1-F/1-R, which are registered by the World Organization for Animal Health (OIE). The part of the gene corresponding to the full open reading frame encoding the viral major capsid protein (MCP) was amplified by PCR. PCR products of approximately 1,581 bp were cloned, and the nucleotide sequences were analyzed phylogenetically. The MCP gene of the starry flounder iridovirus, designated SFIV0909, was identical to that of the turbot reddish body iridovirus (AB166788).
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.