This study aimed to develop a semi-nested polymerase chain reaction assay for the direct detection of Mycoplasma synoviae (M. synoviae) from clinical samples using three newly designed oligonucleotide primers specific to the variable lipoprotein haemagglutinin (vlhA) gene and differentiate M. synoviae field strains based on a nucleotide deletion or the insertion of the proline-rich repeat (PRR) region of the vlhA gene. The developed semi-nested polymerase chain reaction (PCR) assay revealed positive results in 12 out of 100 clinical samples collected from chickens showing lameness and joint swelling. Six positive samples were selected randomly for sequencing, and sequence analysis revealed 96.3-100% nucleotide identities compared to the reference sequences. Phylogenetic analysis showed that sequences of the strains in this study were closely related to WVU1853 (Spain), CK.MS.UDL.PK.2014.2 (Pakistan), and F10-2AS (USA) strains, but they were distinct from the M. synoviae-H vaccine strain sequence. M. synoviae obtained from these samples were identified as types A and C with a length of 38 and 32 amino acids, respectively. These results indicated that the specific and sensitive semi-nested PCR could be a useful diagnostic tool for the direct identification of clinical samples, and the sequence analysis of the partial vlhA gene can be useful for typing M. Synoviae.
Mycoplasma gallisepticum (MG) is major cause of chronic respiratory disease in chickens. M. synoviae (MS) most frequently occurs a subclinical upper respiratory infection but may result in airsacculitis and synovitis in chickens and turkeys. Both mycoplasmas induce economic losses by triggering chronic respiratory signs, airsacculitis and decreased egg production. For prevention of the infections, live attenuated andinactivated vaccines are commercially used for prevention of MG but not MS in Korea. Serum plate agglutination (SPA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) have been commonly used for serological diagnosis for MG and MS. Recently, it is believed that MS spread in chickens is very seriously in Korea and respiratory infection with MS causes substantial loss in poultry farms. In this study, we investigated the serological prevalence of MG and MS in unvaccinated chickens between 2008 and 2009. The overall seroprevalence of MG was 24% of 2,094 for individual chickens and 24% of 189 farms. The overall seroprevalence of MS was 36% in 2,095 chickens and 39% in 198 farms. The results show that seropositive ratio of MS is higher than MG. The geographical prevalence of MG has been estimated in following sequence; Gangwon, Jeolla, Gyeonggi, Gyeongsang, and Chungcheong. The geographical prevalence of MS has been estimated as follows; Gangwon, Gyeonggi, Gyeongsang, Chungcheong, and Jeolla. Seasonal seroprevalencewas also examined, and it found that seroprevalence in spring, fall and winter was higher than that in summer in MG, but not in MS. No significant difference was shown in seroprevalence according to breed. Future study about pathogenicity of MS isolates would be needed and economical losses by MS outbreaks should be analyzed. Moreover, we compared sero-positivity obtained with SPA and ELISA. The kappa value of MG between SPA and ELISA was 0.8061 and the kappa value of MS between SPA and ELISA was 0.7649.
The present study investigated serological and molecular prevalence of Mycoplasma gallisepticum (MG) and Mycoplasma synoviae (MS) infection in unvaccinated broiler breeder farms in Jeonbuk providence. An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and polymerase chain reaction (PCR) had been used to determine antibody titers against MG and MS, and genome of these pathogens, respectively. Seventy five percent of farms were seropositive for MG and 94% of farms were seropositive for MS. In addition, the rate of antibody positive flocks against MG were 65.3% (32/49), while the rate of positive flocks against MS were 84.2% (80/95). The geometric mean antibody titers were $802.2{\pm}626$ and $27,726.7{\pm}2426$ against MG and MS, respectively. Interestingly, none of samples was positive for MG genome by PCR, while 94% (farms), 82% (flocks) and 62.6% (broiler breeder) were positive for MS genome by PCR. These findings suggest that the prevalence of MG or MS infection could be higher than expected. Thus, strict prevention program including vaccination and environmental sanitation should be implemented to avoid disease transmission from breeder to broilers as well as transmission among broilers.
Nakai, Y.;Ogimoto, K.;Kuwano, A.;Nakamura, K.;Kato, M.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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v.4
no.1
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pp.21-24
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1991
A mixed infection of Haemophilus paragallinarum (Hpg), Mycoplasma gallisepticum (MG) and M. synoviae (Ms) was detected in layers of a poultry farm in Iwate prefecture in Japan by pathological, serological and bacteriological investigation. Hpg strains were isolated from three of five birds investigated and all strains were identified to be type C. The Hpg isolates were more susceptible in vitro to a combination of sulfamonomethoxine and ormetoprim (Ektecin) than each of sulfamethoxasol, sulfamonomethoxine, oxytetracycline, tetracycline, streptomycin, erythromycin and thianphinicol. After a total of six days' medication of 1% feed additive Ektecin, symptoms of infectious coryza of hens in the farm almost disappeared and no Hpg was detected even from birds showing nasal discharge.
A species-specific 760 base pair(bp) BamHI to EcoRI DNA fragment(fMG-2) of lipoprotein gene was isolated from a Mycoplasma gallisepticum(M gallisepticum) genomic library. Based on the DNA sequence data of fMG-2, a pair of 25bp primers was synthesized. When used in the polymerase chain reaction(PCR), 732bp DNA products were amplified from 6 standard strains and 10 field isolates of M gallisepticum, but not from 2 Mycoplasma synoviae and 7 other Mycoplasma species. The lower detection limit was 100fg of the genomic DNA. Identity of the PCR products was confirmed by comparison of patterns of restriction endonuclease analysis with AseI, DraI, EcoRV and SspI.
마이코플라즈마 갈리셉티쿰(Mycoplasma gallisepticum, MG)및 마이코플라즈마 시노비에(M. synoviae,MS)에 의한 감염증은 아시아지역 뿐만 아니라 전세계적으로 닭에서 흔히 발생하는 질병이다. MG 감염은 흔히 닭에서 기낭염을 수반하는 만성호흡기병(chronic respiratory disease, CRD)과 칠면조의 전염성부비동염(infectious sinusitis)을 일으킨다. MS는 처음에 육계에서 전염성활막염(infectious synovitis)을 유발하는 병원체로만 알려졌으나, MG에 감염되지 않은 육계의 기낭염 병변부에서 빈번히 분리됨으로 인해 최근에는 원래의 전염성활막염보다 기낭염과 관련하여 많은 관심이 고조되고 있다. 아시아지역의 마이코플라즈마 감염상황을 대변하는 많은 문헌자료가 있으나, 대부분이 자국의 언어로 출판되어 있는 관계로 자료분석에 많은 애로가 있어 주로 해독이 가능한 영문자료를 근거로 하여 각국의 닭에서의 MG 및 MS 감염증의 발생상황과 방제현황에 대하여 언급하고자 한다. 비록 개략적이 나마 이를 토대로 국내 마이코플라즈마 방역상황을 되돌아볼 수 있는 계기가 되었으면 한다.
Detection of Mycoplasma DNA from the 30 cases of cancer tissues and the normal tissues surrounding the cancer tissues obtained from the patients with gastric cancer and the other 30 cases of cancer tissues and the normal tissues surrounding the cancer tissues obtained from the patients with colon cancer were evaluated by polymerase chain reaction(PCR). The PCR products were sequenced using an ABI 377 automatic DNA sequencer, and these sequences were confirmed by comparing sequences with the database of the National Center for Biotechnology Information BLAST network server. Mycoplasmas DNA were defected in 18 (60%) cases of normal tissues which were around gastric cancer and were 13 (43.3%) cases of gastric cancer tissues. Mycoplasmas DNA were detected in 15(50%) cases of normal tissues which were around colon cancer and 12 (40%) cases of colon cancer tissues. The M. faucium, M. subdolum, M. salivarium, M. auris, M. hyosynoviae, and M. conjunctivae were detected from the gastric cancer tissues. The M. faucium, M. subdolum,, M. salivarium, M. auris, M. hyosynoviae, M. bovigenitalium and M. pulmonis were detected from the normal tissues around gastric cancer. The M. faucium, M. subdolum, M. salivarium, M. auris, M. hyosynoviae, M. synoviae M. bovigenitalium, M. gallinarum, and M. moatsii were detected from the colon cancer. The M. faucium, M. subdolum, M. salivarium, M. auris, M. hyosynoviae, M. bovis, M. opalescens, M. bovigenitalium, M. gallinarum, and M. moatsii were detected from the normal tissues around the colon cancer. These results suggest that Mycoplasmas infection may not correlate with gastric cancer and colon cancer, because of the detection rate of Mycoplasmas DNA were not significantly differences between normal and cancer tissues from the patients.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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