• 생명과학회지
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• 제14권2호
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• pp.309-314
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• 2004

cAMP수용성 단백질(CRP)은 E. coli의 100가지 이상의 유전자 전자조절에 관계된다. CRP는 dimer로 존재하며 cAMP의 결합으로 활성인 형태로 전환된다. 이중체인 CRP 단백질의 열 안정성과 구조 전이의 연구에 효과적인 온도 기울기 전기영동장치를 이용하여 확인하였다. 본 연구에서 야생형과 S83C CRP 단백질의 melting temperature (Tm)는 산성인 완충용액[89.8 mM Glycine, 24mM Boric acid (pH 5.8)]에서 57$\pm$1(야생형 CRP)과 55$\pm$1$^{\circ}C$ (S83G CRP)였다. 그리고 온도에 따른 CRP 단백질의 구조변화도 protease digestion과 CD spectropolarimeter을 이용하여 확인하였다.

• 한국식물학회:학술대회논문집
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• 한국식물학회 1999년도 제13회 식물생명공학심포지움 New Approaches to Understand Gene Function in Plants and Application to Plant Biotechnology
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• pp.57-62
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• 1999

Light-regulated translation of chloroplast mRNAs requires nuclear-encoded trans-acting factors that interact with the 5' untranslated region (UTR) of these mRNAs. A set of four proteins (60, 55, 47, and 38 kDa) that bind to the 5'-UTR of the psbA mRNA had been identified in C. reinhardtii. 47 kDa protein (RB47) was found to encode a chloroplast poly (A)-binding protein (cPABP) that specifically binds to the 5'-UTR of the psbA mRNA, and essential for translation of this mRNA, cDNA encoding 60 kDa protein (RB60) was isolated, and the amino acid sequence of the encoded protein was highly homologous to plants and mammalian protein disulfide isomerases (PDI), normally found in the endoplasmic reticulum (ER). Immunoblot analysis of C. reinhardtii proteins showed that anti-PDI recognized a distinct protein of 56 kDa in whole cell extract, whereas anti-rRB60 detected a 60 kDa protein. The ER-PDI was not retained on heparin-agarose resin whereas RB60 was retained. In vitro translation products of the RB60 cDNA can be transported into C. reinhardtii chloroplast in vitro. Immunoblot analysis of isolated pea chloroplasts indicated that higher plant also possess a RB60 homolog. In vitro RNA-binding studies showed that RB60 modulates the binding of cPABP to the 5'-UTR of the psbA mRNA by reversibly changing the redox status of cPABP using redox potential or ADP-dependent phosphorylation. Site-directed mutagenesis of -CGHC- catalytic site in thioredoxin-like domain of RB60 is an unique PDI located in the chloroplast of C. reinhardtii, and suggest that the chloroplast PDI may have evolved to utilize the redox-regulated thioredoxin like domain as a mechanism for regulating the light-activated translation of the psbA mRNA.

• 한국임상약학회지
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• 제8권1호
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• pp.29-34
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• 1998

Murine CD38 is a 42 kDa type II glycoprotein expressed on cell surface of both B and T lymphocytes. CD38 is a multifunctional enzyme that catalyzes the formation and hydrolysis of cyclic adenosine diphosphoribose (cADPR): ADP-ribosyl cyclase activity of CD38 catalyzes the formation of cADPR from NAD and cADPR hydrolase activity of CD38 catalyzes the hydrolysis of cADPR to ADP-ribose (ADPR). And also, CD38 has the catalytic activity of NAD glycohydrolase (NADase) which catalyzes the hydrolysis of catalyzes the formation and hydrolysis of cyclic adenosine diphosphoribose (cADPR): ADP-ribosyl cyclase activity of CD38 catalyzes the formation of cADPR from NAD to ADPR. In this study, we attempted to purify CD38 from mouse lymphocytes by using the immobilized anti-CD38 monoclonal antibody. The single step immuno-affinity column chromatography resulted in homogeneous purification, showing a single protein of 42 kDa on a SDS polyacrylamide gel. We have investigated the effects of various inhibitors on the enzyme activities of the purified CD38. Cibacron blue (0.5 mM) inhibited all three enzyme activities of CD38, NADase, ADP-ribosyl cyclase and cADPR hydrolase activities. ADPR (2 mM) showed inhibitory effect on both cADPR hydrolase activity and NADase, but not on ADP-ribosyl cyclase activity. However, ATP (2 mM) inhibited only cADPR hydrolase activity. $Zn^{2+}$ (1 mM) showed similar inhibitory effect as that of ADPR, but activated cyclase activity These results suggest that CD38 has three different catalytic activity domains which might be differentially regulated by their specific inhibitors.

• 미생물학회지
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• 제32권2호
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• pp.155-162
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• 1994

포도당을 이용하여 성장하고 있는 호기성 일산화탄소 산화 세균인 Acinetobacter sp. Strain JC1 DSM 3808애 존재하는 catalase의 활성은 지수성장기 중반에서 높게 나타났으나, 지수성장기 후반 및 정체기 초기에서 낮아졌다가 정체기 중기에서 급격히 증가한 후 다시 감소하였다. 이 세균에는 세종류(Cat1, Cat2, Cat3)의 catalase가 존재하였는데, Cat1과 Cat3의 활성은 성장시기에 따라 큰 차이를 보이지 않았으나 Cat2의 활성은 성장시기에 따라 큰 변화를 나타내었다. Cat3는 이 세균이 포도당을 이용하여 성장할 때만 생성되었고, 일산화탄소나 메탄올을 이용하여 성장할 때는 생성되지 않았다. 세포추출액을 ethanol과 chloroform으로 처리한 후 활성염색을 하였을 때 Cat1과 Cat3의 활성은 안정하였으나 Cat2는 활성을 상실하였다. 세포추출액을 20mM $H_2O_2$와 3-amino-1,2,4-triazole(AT)을 처리하였을 때 Cat1과 Cat3의 활성이 반감되었고, Cat2는 $H_2O_2$에 의해서는 불활성되었으나 AT의 영향은 받지 않았다. Cat1은 80$^{\circ}C$ 1분간 열처리후에도 활성을 나타내었으나, Cat2와 Cat3는 60$^{\circ}C$와 70$^{\circ}C$에서 1분간의 열처리 후 각각 활성을 상실하였다. Cat2는 catalase 활성외에 peroxidase의 활성도 나타내었다. 일곱단계의 과정을 거쳐 포도당에서 성장시에만 생성되는 Cat3를 정제하였다. 정제된 Cat3의 크기는 150,000이었고, 63,000의 크기를 가진 두개의 동일한 소단위로 구성되어 있었으며, $H_2O_2$에 대한 K_m값은 39mM과 58mM로 나타났다. 정제된 효소의 활성을 위한 최적 pH는 7.0이었으나 전반적으로 pH 6~9에서 비슷하게 높은 활성을 나타내었다. 정제된 효소의 최적온도는 40$^{\circ}C$이었으며 20~50$^{\circ}C$에서 비슷한 활성을 나타내었고, 30$^{\circ}C$에서는 60분동안 효소활성이 거의 상실되지 않았다. 정제된 효소는 ethanol과 chloroform 처리에는 안정하였으나 12mM AT 와 0.1mM $NaN_3$ 및 1mM KCN에 의해 90% 이상의 활성이 억제되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제11권3호
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• pp.205-210
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• 1983

유포자 유산균인 Lactobacillus sporogenes에 의한 extracellular $\beta$-galactosidase의 생산에 관한 연구에 이어 본 효소의 효소학적 일반성질을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. L. sporosenes $\beta$-glactosidase는 o-nitrophenyl-$\beta$-d-glaactopyranoside(ONPG)를 가수분해 할때에 0.05M-sodium phosphate buffer를 사용하여 pH6.8과 반응온도 6$0^{\circ}C$에서 가장 높은 효소활성을 나타냈으며 또한 이 효소반응의 activation enery는 50~6$0^{\circ}C$에서는 11,300ca1/mo1e, $50^{\circ}C$이하에서는 16,000ca1/mo1이었다. 효소활성에 미치는 금속 이온의 효과는 거의 없었으나 L-cysteine 10mM 첨가로 뚜렷한 첨가 효과를 나타내므로서 sulfhydryl enzyme의 특징을 보였다. 한편 lactose와 ONPG에 대한 Michaelis constant가 각각 6.45$\times$$10^{-2}$M, 1.48$\times$$10^{-3}$M을 나타냄으로서 본 효소는 ONPG에 휠씬 큰 친화성을 나타냈다. 또 ONPG분해반응은 lactose, galactose, glucose등의 당류첨가에 의해 그 반응속도가 현저히 감소되며 lactose는 특이하게 noncompe titive저해 양식을 나타내었으며 Ki값은 17.8mM galactose는 Ki값이 13.3mM, competitive inhibition glucose는 11.4mM의 Ki값에 uncompetitive inhibition을 나타냈다. 특히 본 효소는 중성부의 pH와 6$0^{\circ}C$에서 180분간 가열후에도 70%이상의 효소활성을 나타냄으로서 상당히 높은 열안정을 나타냄과 동시에 균체외 효소라는 장점도 아울러 가지고 있어 식품공업에의 그 이용 가능성이 매우 높다고 하겠다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제34권1호
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• pp.49-53
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• 1991

참나물로부터 추출한 polyphenol oxidase의 부분정제를 $(NH_4)_2SO_4$, 처리 및 Sephadex G-150 column chromatography에 의해 분리하였다. Polyphenoloxidase의 최적 pH와 최적온도는 7.5와$30^{\circ}C$였으며, pH 6.5에서 $70^{\circ}C$에서 30분간 처리시와 $80^{\circ}C$에서 5분간 처리시 완전 실활하였다. Polyphenol oxidase는 ascorbic acid, glutathione, potassium cyanide(0.1mM)에 의해 불활성화되었으며 L-cysteine, potassium cyanide, ascorbic acid, glutathione(0.5, 1mM)에 의해서는 완전 실활되었다. Catechol과 3,4-dihydroxytoluene의 기질은 높은 특이성을 나타낸 반면 pyrogallol, dopamine, DL-dopa의 기질은 강하게 활성을 억제하였다. Polyphenol oxidase의 $K_m$ 값은 86.5mM이었다.

• 한국식품과학회지
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• 제26권1호
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• pp.1-5
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• 1994

쌀전분의 열전도도를 probe method로 측정하였다. 수분함량이 0에서 28.2%로 증가함에 따라 열전도는 약 $0.065{\sim}0.09W/mK$에서 $0.13{\sim}0.23W/mK$로 약 $2{\sim}2.5$배의 큰 증가를 보였다. 밀도가 일정할 때 온도가 $25^{\circ}C$에서 $70^{\circ}C$로 증가함에 따른 열전도는 수분함량이 증가할수록 뚜렷하게 증가하였다. DSC의 측정결과 수분함량 7.2% 이하인 경우는 endothermic peak가 전혀 보이지 않았으며, 그 이상의 수분함량$(7.2{\sim}33.6%)$에서도 매우 완만한 peak를 보여 주었다. 따라서 열전도도에 대한 수분함량-온도의 교호작용은 전분의 호화에 의한 간접적인 영향이라기 보다는 물의 열전도도의 온도의존성에 기인하는 것으로 추측된다. 쌀전분의 열전도도(Ke)는 수분함량 $(M.C.,\;0{\sim}28.2%)$, 충진밀도$(P_{b},\;650{\sim}800\;kg/m^{3})$ 및 온도$(T,\;25{\sim}70^{\circ}C)$와 Ke=-0.111+0.000203 T+0.00173 M.C.+0.000247 $P_{b}+0.000035$ M.C. T의 관계식을 얻어졌다.

• 한국결정학회지
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• 제7권1호
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• pp.44-56
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• 1996

CuInTe2 다결정은 수평전기로에서 합성하고, CuInTe2 단결정은 수직 Bridgman 방법으로 성장하여 결정구조를 조사하고, Hall 효과를 30K에서 293K의 온도영역에서 측정하였다. CuInTe2 다결정 및 단결정은 정방정계였다. 다결정의 격자상수는 a=6.168Å, c=12.499Å 그리고 c/a=2.026이었고, 단결정의 격자상수는 a=6.186Å, c=12.453Å, 그리고 c/a=2.013이었다. CuInTe2 단결정의 성장면은 Laue 배면반사 사진으로부터 구하였으며 (112)면이었다. CuInTe2 단결정의 Hall 효과는 van der Pauw 방법으로 측정하였다. 상온에서 측정된 c축에 수직한 시료의 운반자농도 p는 2.14×1023holes/m3, 전기전도도 δ는 739.58Ω-1m-1 그리고 이동도 μ는 2.16×10 m2/V·s 이었다. c축에 평행한 시료의 운반자농도 p는 1.51×1023holes/m3, 전기전도도 σ는 717.55Ω-1m-1 그리고 이동도 μ는 2.97×10-2 m2/V·s이었다. c축에 수직 및 평행한 시료의 Hall계수가 양의 값이어서 CuInTe2 단결정은 p형 반도체임을 알 수 있었다.

• Nutrition Research and Practice
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• 제5권5호
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• pp.396-403
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• 2011

Ceramides (Cer) comprise the major constituent of sphingolipids in the epidermis and are known to play diverse roles in the outermost layers of the skin including water retention and provision of a physical barrier. In addition, they can be hydrolyzed into free sphingoid bases such as $C_{18}$ sphingosine (SO) and $C_{18}$ sphinganine (SA) or can be further metabolized to $C_{18}$ So-1-phosphate (S1P) and $C_{18}$ Sa-1-phosphate (Sa1P) in keratinocytes. The significance of ceramide metabolites emerged from studies reporting altered levels of SO and SA in skin disorders and the role of S1P and Sa1P as signaling lipids. However, the overall metabolism of sphingoid bases and their phosphates during keratinocyte differentiation remains not fully understood. Therefore, in this study, we analyzed these Cer metabolites in the process of keratinocyte differentiation. Three distinct keratinocyte differentiation stages were prepared using 0.07 mM calcium (Ca$^{2+}$) (proliferation stage), 1.2 mM Ca$^{2+}$ (early differentiation stage) in serum-free medium, or serum-containing medium with vitamin C (50 ${\mu}L$/mL) (late differentiation stage). Serum-containing medium was also used to determine whether vitamin C increases the concentrations of sphingoid bases and their phosphates. The production of sphingoid bases and their phosphates after hydrolysis by alkaline phosphatase was determined using high-performance liquid chromatography. Compared to cells treated with 0.07 mM Ca$^{2+}$, levels of SO, SA, S1P, and SA1P were not altered after treatment with 1.2 mM Ca$^{2+}$. However, in keratinocytes cultured in serum-containing medium with vitamin C, levels of SO, SA, S1P, and SA1P were dramatically higher than those in 0.07- and l.2-mM Ca$^{2+}$-treated cells; however, compared to serum-containing medium alone, vitamin C did not significantly enhance their production. Taken together, we demonstrate that late differentiation induced by vitamin C and serum was accompanied by dramatic increases in the concentration of sphingoid bases and their phosphates, although vitamin C alone had no effect on their production.

• 미생물학회지
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• 제40권3호
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• pp.199-204
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• 2004

Pseudomonas rhodesiae H5가 생성하는 parathion hydrolase를 $(NH_{4})_{2}SO_{4}$침전, DEAE-Toyopearl 650M ion exchange chromatography, Sephadex gel filtration의 단계로 정제한 결과, 이 균주가 생성하는 parathion hydrolase는 두 종류의 효소였으며, 이를 각각 OPH $I_1$과 OPH $I_2$라 명명하였다. OPH $I_1$과 OPH $I_2$의 최적 pH와 온도는 각각 pH7.2, $30^{\circ}C$와 PH7.6, $37^{\circ}C$이었다. OPH $I_1$의 Parathion을 가수분해하는 활성화 에너지는 $4^{\circ}C$-$30^{\circ}C$에서 3.01㎉/㏖ 이었으며 Km값은 69.2${\mu}M$이었다. 반면, OPH $I_2$의 활성화에너지는 $4^{\circ}C$-$37^{\circ}C$에서 4.07kcal/㏖이었으며 Km값은 150.9${\mu}M$이었다. OPH $I_1$은 1 mM의 $Mg^2+$, $Cu^2+$, $Ca^2+$, $Ni^2+$에 의해서 효소활성이 완전 저해되었으나 OPH $I_2$는 저해를 덜 받는 것으로 확인되었다.