We identified a microsatellite marker, Poli121TUF, which appears to be significantly linked (P<0.001) with a lymphocystis disease virus (LCDV)-resistance gene in the olive flounder, Paralichthys olivaceus. The olive flounder is an economically important food fish, that is widely cultured in Korea, Japan, and China. Lymphocystis disease has spread in these countries and has seriously reduced the economic value of the fish. LCDV causes lymphocystis cells (LC) to form on the body surface, fins, gills, mouth, and intestine. Fish with LC lose commercial value due to their deformed appearance. The identified micro satellite marker can be used as a candidate locus for marker-assisted selection (MAS) in order to enhance the efficiency of selection for LCDV resistance in the olive flounder.
Lymphocystis disease virus (LCDV) is the causative agent of lymphocystis disease. The viruses have been divided into three genotypes (genotype I for LCDV-1, II for Japanese flounder isolates, and III for rockfish isolates) on the basis of major capsid protein (MCP) gene sequences. In this study, we developed a multiplex PCR primer set in order to distinguish these genotypes. We also analyzed the MCP gene of a new LCDV isolate from the sea bass (SB98Yosu). Comparison of sequence identities between SB98Yosu and eight Japanese flounder isolates, revealed identity of more than 90.1 % at nucleotide level and 96.5% at deduced amino acid level, respectively. Phylogenetic analyses based on the MCP gene showed that SB98Yosu belongs to genotype II, along with Japanese flounder isolates. Multiplex PCR based on the MCP gene allowed us to identify these genotypes in a simple and rapid manner, even in a sample that contained two genotypes, in this case genotypes II and III.
참돔 이리도바이러스 질병(red seabream iridovirus disease ; RSIVD)은 1990년 일본 시코쿠지역의 참돔 양식장에서 처음 발병된 후, 매년 발병지역이 확산되고 발병 어종이 다양해지고 있다. 참돔에서 분리된 RSIV는 icosahedral cytoplasmic deoxyribovirus로서 크기가 200∼240nm이며 형태학적 특징에 의해 iridoviridae로. 분류하고 있지만, 어류를 숙주로 하는 iridovirus과 중에서 lymphocystis virus속인 flounder virus(LCDV-1) 및 lymphocystis disease virus(LCDV-2)와 goldfish virus 1-lke virus속인 goldfish virus 1(GFV-1) 및 goldfish virus 2(GFV-2)와는 전혀 다른 바이러스로 알려져 있다. (중략)
The antigenic proteins of Lymphocystis disease virus (LCDV) from tumors of olive flounder, Paralichthys olivaceus, are described following characterization by mass spectrometry. In SDS-PAGE, predominant protein bands were observed at 114, 88, 70, 54, 52, 47, 42 and 24 kDa. Western blot analysis showed that antisera reacted strongly at molecular weights of 114, 67 and 54 kDa, and reacted weakly at molecular weights of 74, 70, 36, 24 and 22 kDa. In the identification of LCDV antigenic proteins by matrix-assisted laser desorption ionization (MALDI) TOF mass spectrometry, 10 of 14 excised bands consisted mostly of proteins with amino acid sequences that matched LCDV-C (lymphocystis disease virus isolate China) ORFs. Strong antigens with molecular weights of 114, 67 and 54 kDa were identified as LDVICp236 (chromosome segregation ATPase), LDVICp033 (membrane bound metallopeptidase) and LDVICp157 (hypothetical protein), respectively. Minor antigens with molecular weights of 70, 36, 24 and 22 kDa proteins were identified as LDVICp160 (acetyl-coA hydrolase), LDVICp213 (hypothetical protein), LDVICp039 (hypothetical protein) and LDVICp213 (hypothetical protein). However, the major capsid protein (LDVICp043) did not react with the polyclonal antibody.
Seo, Ja-Young;Kang, Bong-Jo;Oh, Hyoung-Jong;Lee, Jae-Il;Kim, Tae-Jung
한국어병학회지
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제21권3호
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pp.175-180
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2008
Lymphocystis is a viral disease of fish primarily in marine and brackishwaters. Here we report the cloning, expression, and the serological applications of the lymphocystis disease virus (LCDV) major capsid protein (MCP). The MCP gene was amplified by PCR from the genomic DNA of LCDV isolated from Schlegel's black rockfish, Sebastes schlegeli, and expressed in E. coli. Mouse antisera raised against the purified recombinant MCP (rMCP) reacted with the viral MCP in an immunofluorescence assay, indicating that this rMCP would be useful for serological studies of field samples.
The present study demonstrated lymphocystis disease virus (LCDV) propagation through cytopathic effects (CPE) formation and LCDV detection in olive flounder fin (FFN) cells by polymerase chain reaction (PCR) and fluorescent antibody technique (FAT) methods. Tissue filtrates from the cluster cells produced CPE in FFN cells, which initially cells became enlarged and gradually underwent fusion en masse. Infectivity of culture grown LCDV using the FFN cells reached $10^{2.3}$$TCID_{50}$/ml at 4 days post infection and the highest titer was measured $10^{6.5}$$TCID_{50}$/ml at 12 days. The viral DNA was detected in the cell culture supernatants showing CPE and the CPE cells by PCR. Antigen specific strong fluorescence reacting with monoclonal antibody against the virus revealed the presence of viral antigen in the cytoplasm of infected FFN cells. These results suggest that the FFN cell line originated from the olive flounder has a susceptibility of the LCDV.
Lymphocystis disease virus (LCDV) was detected from olive flounder Paralichthys olivaceus, painted glass fish Chanda baculis, gourami Trichogaster leeri and rockfish Sebastes schlegeli, and proteins of the viruses were compared. The major capsid protein (MCP) gene-specific primer sets successfully amplified approximately 1300 bp nucleotides from the olive flounder and 600 bp nucleotides from painted glass fish, gourami and rockfish isolates, respectively. In western blotting analysis using anti-LCDV mouse polyclonal serum, major antigenic proteins had 21, 26, 45, 50, 80, 110 and 120 kDa in olive flounder, 26, 47 and 80 kDa in painted glass fish, 26, 46, 80 and 92 kDa in gourami, 26, 44, 49, 80 and 105 in rockfish, respectively. All the marine and freshwater isolates showed only common antigens of approximately 26 kDa and 80 kDa. These results suggest that antigenic protein profiles of LCDVs may vary depending upon fish species.
Iridoviridae과에 속하는 lymphocystis disease virus(LDV)는 비교적 큰 20면체 DNA 바이러스이며(Murphy et al., 1995), 림포시스티스병(lymphocystis disease, LD)을 유발하는 원인체로서 140여종 이상의 해수 및 담수 어종에서 보고된 바 있다(Wolf et al., 1966). 우리 나라의 경우, 주요 양식 어종인 넙치에 주로 감염되어 2차 감염과 빈혈 및 합병증 등에 의해 폐사를 유발할 뿐만 아니라 상품성을 저하시킴으로서 경제적 손실을 야기한다. (중략)
본 연구에서는 어류병원바이러스 (infectious pancreatic necrosis virus (IPNV), viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV), hirame rhabdovirus (HIRRV), infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV), lymphocystis disease virus (LCDV))를 대상으로 바다 송사리 Oryzias dancena의 감수성을 조사하였다. 감염실험 결과, IPNV (실험조건: $15^{\circ}C$ 해수), VHSV ($15^{\circ}C$ 해수) 및 HIRRV ($15^{\circ}C$ 담수)에 침지된 송사리는 각각 30%, 40%, 60%의 누적폐사율이 관찰되었다. 이에 반해 IPNV ($15^{\circ}C$ 담수, $18^{\circ}C$ 해수 및 담수), VHSV ($15^{\circ}C$ 담수, $18^{\circ}C$ 해수 및 담수), HIRRV ($15^{\circ}C$ 해수), IHNV ($15^{\circ}C$ 해수 및 담수), LCDV ($15^{\circ}C$와 $18^{\circ}C$ 해수 및 담수) 침지 실험구 및 대조구에서는 10% 이하의 누적 폐사율이 확인되었다. 생존어와 폐사어를 대상으로 한 바이러스 분리 결과에서는 IPNV, VHSV 및 HIRRV에서 폐사된 개체로부터 바이러스가 분리되었으며, 또한 IPNV와 HIRRV에서 생존한 개체로부터도 바이러스가 분리되었다. 이상의 결과로 바다 송사리는 IPNV, VHSV 및 HIRRV에 감수성이 있음이 확인되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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