• KSBB Journal
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• 제32권2호
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• pp.90-95
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• 2017

Mammalian cell cultures have been used extensively to produce proteins for therapeutic agent because of their ability to perform post-translational modification including glycosylation. To produce recombinant protein, many factors and parameter are considered such as media composition, host cell type, and culture process. In this study, recombinant human erythropoietin (rhEPO) producing cell line was established by using glutamine synthetase system. To reduce serum concentration in media, we compared direct adaptation with step adaptation. Cell growth was faster in step adaptation. In low-level serum media, there were insufficient glucose for cell growth. Thus, we added glucose in low-level serum media from 2 g/L to 4.5 g/L. Titer of rhEPO was higher than other conditions at 4.5 g/L of glucose. Additionally, N-methyl-D-aspartate (NMDA), 13-cis-retinal, and pluronic F-68 (PF-68) were added to enhance productivity in CHO cell cultures. In conclusion, we applied CHO cell producing rhEPO to low-level of serum in media using step-adaptation. Also, we confirmed positive effect of NMDA, 13-cis-retinal, and PF-68.

• KSBB Journal
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• 제7권2호
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• pp.96-101
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• 1992

저혈청 배지의 개발을 위해 혈청 대체 가능성이 있는 물질을 선정하여 각각의 필요성을 검색하였다. 검색 결과 결정된 물질들로 저혈청 배지를 제조하였으며, 기저 배지의 종류와 혼합에 따른 영향을 고찰 하였다. 개발된 배지는 1% FBS 첨가만으로 6개월 이상의 계대배양에서 만족할만한 안정성을 보였으며, 부유배양에도 적합한 것으로 판단되었다. 개발된 배지에서 혈청은 필수적이었으나 균주의 장기적응후에 무혈청 배지의 개발이 보다 용이할 것으로 기대되었다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2005년도 생물공학의 동향(XVI)
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• pp.203-206
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• 2005

본 연구에서는 생물반응기에서 효율적으로 돼지 전염성 백신을 생산하기 위해 swine testicle cell을 host cell로 하는 백신 생산 시스템을 확립하였고, 이를 위한 최적 MOI, 최적 감염시기, 최적 수확시기 등 백신 생산 조건을 확립하였다. 또한 보다 안전한 백신 생산을 위해 통계적 방법에 의해 무 혈청 배지를 개발하였고 백신 생산 면에서의 가장 우수한 무 혈청 배지를 선정하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제2권2호
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• pp.141-151
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• 1992

Physiological changes of the murine hybridoma cell line $S3H5/\gamma{2bA2}$ during adaptation to RPMI 1640 medium with 1%(v/v) fetal bovine serum were characterized in terms of cell growth, antibody production, morphology, and metabolic quotients. Cells adapted to 1% serum medium in T-flasks became sensitive to shear induced by mechanical agitation and required at least 5% serum in the medium or spent medium for cell growth in spinner flasks, while cells adapted to 10% serum medium in T-flasks could grow in 1% serum medium in spinner flasks. Consequently, long-term adaptation to low serum media may not give the expected growth enhancement. After adaptation to 1% serum medium, changes in cell morphology were observed. The cells in 10% serum medium were uniform and circular, while cells in 1% medium were irregularly shaped. The DNA contents, which were measured by flow cytometry, were almost constant among the cells in the range of 1% to 10%. Further, no significant changes in energy metabolism and specific monoclonal antibody production rate were observed among these cells.

• 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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• 한국수정란이식학회 2002년도 국제심포지엄
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• pp.3-7
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• 2002

In vitro embryo culture techniques provide significant contributions not only for a basic research of fertilization and early embryogenesis, but also for a low cost mass production of bovine embryos for transfer, embryo diagnosis, nuclear cloning and the production of transgenic cows. This presentation introduces newly developed serum-free media (IVD101 and IVMD101) that are effective far high yields of transferable embryos of excellent quality from in vitro-matured and fertilized oocytes. Both serum-free media are superior to a conventional serum-containing medium on the increased rates of blastocyst formation, post-thaw embryo viability, and pregnancy after transfer. Furthermore, reduced risks of calf mortality and large calf syndrome are also observed for the serum-free-derived embryos. Serum-derived embryos contain a large number of lipid droplets and immature mitochondria in their cytoplasm that may account for the lower production of transferable embryos and poor embryo quality.

• KSBB Journal
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• 제5권4호
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• pp.365-371
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• 1990

To improve the growth of mouse hybridoma 2c3.1 secreting anti-Hepatitis B surface antigen monoclonal antibody (anti-HBsAg MAb), we had constructed an enriched medium and observed the effects of fetal bovine serum and serum-free supplements including human serum albumin, 'insulin and transferrin', and monoethanolamine. For further enhancement of growth, the concentrations of two major energy sources, glucose and glutamine, were strengthened with various ratios in the enriched medium. Maximum cell growth and monoclonal antibody production obtained in various ratios of glucose/glutamine with an inoculation concentration of 2$\times$105 cells/ml were 0.73$\times$106-4.62$\times$106 cells/ml and 65.1-422.6 $\mu\textrm{g}$/ml, respectively. Glutamine was round to be a major energy source and a limiting nutrient in comparison to glucose for 2c3.1 cell cultivation in enriched media with low serum.

• KSBB Journal
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• 제21권4호
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• pp.248-254
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• 2006

본 연구에서는 CHO 세포를 이용해 세포를 별도의 적응기간 없이 무혈청 배지에서 배양했을 때 세포의 증식이 중단되는 원인을 찾고 배지 첨가 성분을 통해 이를 개선하고자 했다. 현재 개발된 무혈청 배지는 아직까지 혈청을 대체할 만한 성분을 포함하고 있지 않다. 때문에 무혈청 배지에 적응되지 않은 비적응 세포의 경우 계대 배양에 한계가 있다. 이런 한계가 나타나는 원인은 다양할 것으로 생각이 되지만 혈청의 부재로 인해 세포가 받게 되는 스트레스와 그로 인한 세포주기의 정지가 가장 근본적인 원인으로 생각된다. 무혈청 배지에서 세포가 받는 스트레스의 정도를 알아보고 배양 환경과 첨가물에 따른 ROS 농도의 변화를 측정하기 위해 배지와 세포의 ROS 농도를 측정하였다. ROS 농도를 측정한 결과 무혈청 상태에서 세포내 ROS가 엄청난 양으로 증가하는 것을 알 수 있었다. 이것은 혈청이 항산화능력을 갖고 있어서가 아니라 세포가 무혈청 환경에서 극심한 스트레스상태에 놓이기 때문인 것으로 생각된다. 이렇듯 증가한 ROS가 세포의 증식이 멈추게 되는 원인 중 하나로 생각되고, 항산화제를 첨가한 경우에도 증식력이나 ROS의 농도에 큰 차이가 없었던 것으로 미루어 보아 근본적으로 혈청과 같은 강력하게 증식을 촉진하는 성분을 배지에 첨가해야 할 것으로 여겨진다. ROS 이외에 세포의 증식이 멈추는 또 다른 원인으로 세포사멸의 여부를 확인했다. 무혈청 배지에서 배양한 적응세포와 비적응 세포 모두 특별한 세포사멸의 징후가 나타나지 않았다. 또한 무혈청 배지에서 증식이 멈춘 세포를 회수해 다시 혈청배지에서 배양한 경우 곧바로 증식력이 회복되기 때문에 대규모의 세포사멸은 발생하지 않는 것으로 생각된다. 위와 같은 현상들은 모두 혈청이 없기 때문에 발생하는 것으로 혈청을 대체할 수 있는 첨가물을 배지에 더해주면 세포의 증식이 개선될 것이다. 그래서 몇 가지 첨가물을 이용해 세포의 증식력에 변화가 나타나는지 알아보았다. 첨가물을 이용한 실험에서 IGF-I의 경우 장기간 배양에서 세포의 수를 안정적으로 유지하고 계대 횟수를 증가시키는 효과를 보였다. 이는 IGF-I이 어느정도 세포의 증식을 유지시켜주는 역할을 하기 때문인 것으로 생각된다. 무혈청 배지에서 비적응 CHO 세포의 계대 배양에 한계가 있는 것은 세포주기가 멈추기 때문인 것으로 생각된다. 세포주기가 멈추는 growth factor와 같이 세포의 증식을 지속적으로 유도할 수 있는 물질이 무혈청 배지에서는 부족하기 때문인 것으로 생각되고, IGF-I과 같은 첨가물을 통해 극복할 수 있는 문제라고 여겨진다.

• KSBB Journal
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• 제5권1호
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• pp.87-94
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• 1990

본 논문에서는 10% fetal bovine serum(FBS)를 첨가한 RPMI 1640배지에 비하여 간염바이러스 표면항원에 대한 단일클론항체 생산에 있어서 효과적은 무혈청 배지에 낮은 온도의 혈청을 첨가하여 하이브리도마_2_c3.1 세포에서 그 효과를 조사하였다, 세포성장관 단일클론항체 생산을 증가시키기 위하여 기본 무혈청배지와 RPMI 1640 배지성분들의 농도를 균형있게 강화시킨 배지를 2:1(v / v)로 혼합하여 농축배지를 조성하고, 이 배지에 2mg / ml 인혈청 알부민 $5\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$ insulin, $5\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$ tran-sferrin, $10\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$ monoethanolmine 등의 몇가지 무혈청 첨가물들을 첨가하였다. 이 농축 배지에 fetal bovine serum(FBS)과 supplemented bovine calf serum(sBCS)을 첨가하였을때의 세포성장과 단일클론항체 생산을 비교하여 FBS농도를 변화하여 세포성장과 단일클론항체생산의 증가를 시도하였다. 0.5%를 농축배지에 첨가함으로써 세포성장과 단일클론항체생산의 증가를 보았다. 최대 세포농도는 $3.06{\times}10^6$ cells / ml이었으며, 이때 생산된 단일클론항체는 10% FBS배지의 $43.0\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$ 무혈청배지의 $50\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$보다 3배이상 높은 $159.7\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$이 생산되었다.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제28권8호
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• pp.948-955
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• 2005

Glomerular mesangial cells (GMCs) in diverse renal diseases undergo cell proliferation and/or hypertrophy, and gangliosides have been reported to play an important role in modulating cell structure and function. This study compared the effects of transforming growth $factor-\beta\; (TGF­\beta1)$ and the effects of the application of exogenous gangliosides on GMCs and investigated whether the application of exogenous gangliosides regulated cellular proliferation and hypertrophy. Human GMCs were cultured with exogenous gangliosides and $TGF-\beta1$ in a media containing $10\%$ fetal bovine serum and in a media without the fetal bovine serum. Exogenous gangliosides biphasically changed the proliferation of human GMCs (0.1-1.0 mg/mL). A low concentration (0.1 mg/mL) of gangliosides mainly increased the number of human GMCs, whereas cellular proliferation was significantly reduced by raising the concentration of exogenous gangliosides. $TGF-\beta1$ greatly reduced the number of human GMCs in a concentration­dependent manner (1-10 ng/mL). Serum deprivation accelerated the gangliosides- and $TGF­\beta1-induced$ inhibition of mesangial cell proliferation to a greater extent. Gangliosides (1.0 mg/ mL) and $TGF-\beta1$ (10 ng/mL) both caused a significant increase in the incorporation of $[^3H]leucine$ per cell in the serum-deprived condition, whereas it was completely reversed in serum­supplemented condition. Similar results to the $[^3H]leucine$ incorporation were also observed in the changes in cell size measured by flow cytometric analysis. These results show that exogenous gangliosides modulate cell proliferation and hypertrophy in cultured human GMCs, and these cellular responses were regulated differently based on whether the media contained serum or not. Results from the present study raise new possibilities about the potential involvement of gangliosides in the development of mesangial cell proliferation and hypertrophy.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• 제54권1호
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• pp.37-43
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• 2024

Purpose: The inflammatory response due to inflammatory cytokines, bacterial pathogens, and the altered lipoprotein metabolism in patients with periodontitis indicates that infection with periodontal anaerobic bacteria may influence atherogenesis in vitro and in vivo. We aimed to explore the effect of periodontitis concerning clinical and ultrasound markers of early atherosclerosis. Methods: In this case-control study, a total of 30 systemically healthy adults (15 with periodontitis and 15 without periodontitis) over 40 years of age were studied. Periodontitis was determined by measuring the clinical attachment level (CAL) and radiographic bone loss (RBL). Conventional cardiovascular risk factors, including body mass index, serum levels of total cholesterol (TCH), triglycerides (TG), and high-density and low-density lipoprotein (HDL and LDL, respectively) cholesterol were evaluated. Carotid artery intima-media thickness (IMT) was measured using ultrasonography. Results: The mean values of the CAL and carotid IMT were 5.02±0.9 mm and 0.084±0.01 cm vs. 1.6±0.61 mm and 0.072±0.02 cm in the periodontitis and healthy groups, respectively, reflecting statistically significant differences (P=0.001 and P=0.037, respectively). There were statistically significant differences in the serum levels of TCH, TG, and LDL between the 2 groups (P=0.017). The CAL and RBL were positively associated with carotid IMT and serum cholesterol levels, except for HDL, whereas tooth loss was not associated with any markers (P<0.05). Compared to the healthy group, participants with periodontitis exhibited 2.09 times higher odds (95% confidence interval, 1.22-3.59) of having subclinical atherosclerosis. Conclusions: The presence of periodontitis increased the risk of atherosclerosis.