• 한국어병학회지
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• 제27권1호
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• pp.17-24
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• 2014

질병 치료를 위하여 사용되는 항균제는 효과적이고 사용이 편리한 장점이 있지만, 내성균 발생이나 항균물질 잔류와 같은 문제점들을 안고 있다. 따라서 어류 질병 치료 및 예방을 위해 어류와 인체에 안전한 생약제 개발과 함께 어류 질병 원인균의 과다 발생을 억제하며 어체의 건강을 유지시키기 위하여 유용 균주를 이용하고자 하는 연구가 다양하게 진행되고 있다. 본 연구는 이전 연구에서 분리되어 Listonella anguillarum에 대하여 생장 억제효과가 있는 것으로 밝혀진 Pseudomonas aeruginosa MB I-3 (MB I-3)를 이용하여 넙치의 비브리오병에 대한 생물학적 방제효과를 검토하였다. Double layered plate assay와 co-culture을 통하여 MB I-3의 L. anguillarum에 대한 생장 억제능력을 조사하였고, MB I-3 균주 배양액을 ethyl acetate로 추출하여 disk 확산법으로 추출물의 항균 효과를 확인하였다. 액체 및 고체 배양에서 생장이 억제된 L. anguillarum을 전자현미경으로 관찰하였으며, 넙치 치어 사육 수조에 L. anguillarum과 MB I-3 균주를 동시에 첨가하여 폐사율을 비교하였다. MB I-3는 8종의 병원성 비브리오균에 대하여 항균력을 나타내었으며, 96시간 동안 실시한 co-culture에서 L. anguillarum은 배양 후 9시간까지 생장 증가를 보였으나, 그 후 감소하는 경향을 보였다. 한편 MB I-3 배양액 추출물 또한 L. anguillarum에 항균활성을 보여 항균 물질이 ethyl acetate로 추출됨을 알 수 있었다. 전자현미경 관찰에서 L. anguillarum은 세포질의 밀도 감소 및 세포막의 swelling에 의한 세포 용해 현상을 보였다. 한편 MB I-3를 L. anguillarum과 함께 투여한 넙치 치어는 대조군에 비해 누적 폐사율이 약 20% 감소되는 결과를 보였으므로, MB I-3를 이용한 수산용 probiotics 개발 가능성을 시사하였다.

• 한국어병학회지
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• 제21권1호
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• pp.29-34
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• 2008

손바닥선인장(Opuntia ficus-indica var. saboten Makino) 줄기 가수분해 분획물(MBT-01108)의 어병세균에 대한 in vitro 항균활성을 조사하였다. 실험에 사용한 어병세균은 Edwardsiella tarda, Listonella anguillarum, Vibrio sp., Lactococcus garvieae, L. raffinose, Streptococcus parauberis, S. iniae 등 총 18종이었다. 또한, oxytetracycline을 포함한 시판 항균제 disc를 MBT-01108의 항균활성에 대한 양성 대조군으로 하여 항균활성을 비교 조사하였다. 그 결과, MBT-01108은 실험에 사용한 어병세균들에 대하여 우수한 항균활성을 나타내었다.

• 한국어병학회지
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• 제14권1호
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• pp.3-10
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• 2001

식물성 생약재의 항균력과 활성산소(superoxide anion, $O_2^-$)의 생산에 미치는 in vitro 효과를 조사하여 금후 in vivo 실험에 적용할 때, 어류 체내 자연 저항성 증진을 꾀할 수 있는 식물성 생약재를 발굴하기 위한 기초자료를 얻고자 하였다. 식물성 생약재는 고삼, 귀전우, 구절초, 박하, 방풍, 연교, 약쑥, 지유, 삼백초, 삼지구엽초, 상백피, 소회향, 편축, 팔각 등 14종류로 이들을 열수추출하여 실험에 사용하였다. 항균력 시험에는 어병세균 Listonella anguillarum(Vibrio anguillarum), Vibrio sp., Vibrio alginolyticus, Edwardsiella tarda, Streptococcus sp., Lactcoccus garvieae를 대상으로 disk법을 사용하였으며, 활성산소의 생산능은 넙치 신장 대식세포를 이용한 nitroblue tetrazolium(NBT) 반응으로써 조사하였다. 그 결과,약쑥이 다른 생약재에 비하여 시험에 사용된 어병 세균에 대한 항균활성이 월등히 뛰어났으며, 또한 넙치 대식세포의 활성산소 생산능을 크게 자극하는 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제30권1호
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• pp.93-100
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• 2020

A bacterial strain inhibiting the growth of Vibrio anguillarum, the causative agent of vibriosis, was isolated from fish intestines. The isolated strain HS36 was identified as Aerococcus urinaeequi based on the characteristics of the genus according to Bergey's Manual of Systematic Bacteriology and by 16S rRNA sequencing. The growth rate and antibacterial activity of strain HS36 in shaking culture were higher than those in static culture, while the optimal pH and temperature for antibacterial activity were 7.0 and 30℃, respectively. The active antibacterial substance was purified from a culture broth of A. urinaeequi HS36 by Sephadex G-75 gel chromatography, Sephadex G-25 gel chromatography, and reverse-phase high-performance liquid chromatography. Its molecular weight, as estimated by Tricine SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, was approximately 1,000 Da. The antibacterial substance produced by strain HS36 was stable after incubation for 1 h at 100℃. Although its antibacterial activity was optimal at pH 6-8, activity was retained at a pH range from 2 to 11. The purified antibacterial substance was inactivated by proteinase K, papain, and β-amylase treatment. The newly purified antibacterial substance, classified as a class II bacteriocin, inhibited the growth of Klebsiella pneumoniae, Salmonella enterica, and Vibrio alginolyticus.

• 한국양식학회지
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• 제14권4호
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• pp.221-226
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• 2001

상백피로부터 항균성 물질을 추출하여 어규질병에 대한 천연 항균약제로서의 이용 가능성을 타진하기 위하여 어류질병세균에 대한 항균활성 및 상백피 추출물에 침지 시킨 사료의 항균작용 등을 검토하였다. 고체배지에서 상백피 에탄올 추출물은 Steptococcus sp., Lactococcus garvieae 및 Staphylococcus sp. 등의 그람양성 세균에 대하여는 강한 항균활성을 나타내었으나, 그람음 성세균인 Listonella anguillarum 및 Edwardsiella tarda에 대하여는 약한 항균활성을 보였다. 액체배지에서 상백피 에탄올 추출물의 그람양성세균에 대한 최소발육저지농도는 19.8 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$이었으며, 37.5~118.5 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$의 농도에서는 살균작용물 보여 그람양성세균에 대하여는 균 증식을 억제함은 물론 살균작용도 가지고 있음을 알 수 있었다 반면, 그람음성세균에 대한 최저발육저지농도는 790.0~1185.0$\mu\textrm{g}$/$m\ell$이었고, E. tarda에 대하여는 1185.0 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$이었고, E. tarda에 대하여는 1185.0 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$를 첨가하여도 균을 사멸시키지 못하였다. 사료를 상백피 에탄올 추출물에 침지시 적정 침지 시간은 3분이었고, 상백피 추출물에 침지시킨 사료는 그람양성세균의 증식을 억제하여 10.5~12.0 mm의 저해환을 나타내지 못하였다. 또한, 사료 중량에 따른 추출물 흡수량은 식 Y = 7.5757X + 4.6962 ($R^2$ = 0.9998)으로 아주 밀접한 상관관계를 나타내었다.

• 한국수산과학회지
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• 제34권5호
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• pp.545-549
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• 2001

어류질병에 대한 천연 항균제를 개발하기 위한 일환으로 계피로부터 항균성 물질을 추출하여 어류질병세균에 대한 항균효과, 최소발육저지농도, 최소살균농도 및 어류 사료에 적용 시험 등을 실시하였다. 계피 추출물의 그람양성세균에 대한 최소발육저지농도는 $75.8\sim189.6{\mu}g/mL$이었고, 그람음성세균에 대하여는 $75.8\sim113.8{\mu}g/mL$ 이었으며, 그람양성균보다 음성균에 대하여 보다 강한 살균작용을 나타내었다. 계피 추출물은 본 실험에 사용된 그람양성세균 및 그람음성세균 모두에 대하여 폭 넓은 항균스펙트럼을 나타내었으며, 특히 Streptococcus iniae, Edwardsiella tarda 및 Listonella anguillarum에 대하여 강한 증식 억제력을 보였다. 계피 추출물은 S. iniae에 대하여 $113.8{\mu}g/mL$ 첨가로 살균작용을 보여 12시간 배양 후 31og 정도의 균수를 감소시켰고, $189.6{\mu}g/mL$ 첨가구는 초기 균수 $10^6CFU/mL$인 것이 12시간 배양 후 세균이 검출되지 않았다. 또한 L. anguillarum에 대하여는 $75.8{\mu}g/mL$ 첨가시에는 배양 24시간 후 약 21og 정도의 균수가 감소하였고, $151.6{\mu}g/mL$첨가구에서는 24시간 후 세균이 검출되지 않았다 사료를 계피 추출액에 침지시 적정 침지 시간은 10분이었으며, 사료 중량에 따른 추출물 흡수량은 식 Y=7.2726X+4.5083 ($R^2=0.9998$)이었다 계피 추출액에 침지시킨 사료는 사용된 모든 어류질병세균의 증식을 억제하였으며, 그것의 항균활성은 저장온도 $10\sim35^{\circ}C$에서 28일까지 안정하였다. 또한 침지 사료를 액체배지에 넣어 배양했을 때, 사료에 존재하는 미생물의 증식을 억제시켰다.

• 한국동물위생학회지
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• 제40권4호
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• pp.265-275
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• 2017

The production of enzymes that help digestion, assimilation of essential nutrients, and prevent pathogenic bacteria are important for probiotics used in aquaculture. The objective of this study was to investigate enzyme activities for macromolecular organic matters and antimicrobial properties of the selected potential probiotics isolated from gut of surf clam (Tresus keenae) against well-known shellfish-pathogenic bacteria. Among 65 isolates from guts of 60 surf clams, seven Bacillus strains with outstanding degradation capability of macromolecule organic matter were selected as potential probiotics as follows: TKI01 (B. vietnamensis), TKI02, TKI26 (B. thuringiensis), TKI14, TKI32, TKI42 (B. amyloliquefaciens), and TKI18 (B. stratosphericus). After in vitro antimicrobial activity test was performed against five shellfish-pathogenic bacteria including Listonella anguillarum, Vibrio parahaemolyticus, V. splendidus, V. harveyi, V. tubiashii, PCR assay was performed to detect bacteriocin-producing strain. PCR results revealed that the five Bacillus strains possessed diverse bacteriocin genes including ericinA, coagulin, surfactin, iturin, bacyllomicin, fengycin, bacylisin, subtilin, and lantibiotics. In the present study, the selected seven Bacillus strains showed different enzyme activities according to types of macromolecule organic matters. And their antimicrobial activities varied based on the species of pathogenic bacteria. In addition, at least five Bacillus strains had genetic potential to produce several natural lipopeptide antibiotics that may help biological control of surf clam aquaculture. Therefore, mixed use of probiotics might show co-operative effect and increase the efficiency of probiotics rather than separate use. To the best of our knowledge, it is the first report on antimicrobial properties of Bacillus species isolated from surf clam.