The optimal conditions for protoplast fusion between the cells of kanamycin resistant Lactobacillus bulgaricus IFO 13593 and those of lincomycin resistant Lactobacillus helveticus IAM 12090 were investigated in this study. The highest fusion frequency of 9.1*10-4 was obtained when protoplast fusion was carried out for 0.5 min using 40% PEG 4000 solution as a cell fusion stimulant and subsequent post-PEG-incubation was undergone at 30 for 30 min in the PPI medium.
This study was conducted to evaluate the influence of Lactobacillus bulgaricus and/or Sterptococcus thermophilus on the fermentation of yoghurt containing 5% (w/v) buckwheat sprouts. The results revealed that after 12 hours of fermentation the appropriate pH, titratable acidity and number of viable cells were attained. At that time, the rutin content of the buckwheat sprout-added yoghurt prepared by the mixed culture method was not changed, but the quercetin content increased greatly. Conversely, the rutin content of yoghurt that only contained Streptococcus thermophilus was decreased while the quercetin content was increased. The total phenol contents as well as the DPPH radical scavenging activities of both the mixed culture and Streptococcus thermophilus yoghurt did not differ significantly. Taken together, the results revealed that the use of a mixed culture of Lactobacillus bulgaricus and Streptococcus thermophilus during the preparation of buchwheat sprout-added yoghurt was desirable due to the decrease in pH and increase in titratable acidity and viable cells that occurred after 12 hr of fermentation. Moreover, phytochemicals in buckwheat sprouts such as rutin, quercetin and phenol compounds were comparatively increased during fermentation and influenced the antioxidant activity in buckwheat sprout-added yoghurt.
인산 염(monosodium phosphate, disodium phosphate, trisodium phosphate, ${\alpha}-polygel$ 및 sodium tripolyphosphate)이 Lactobacillus bulgaricus 단독 배양 및 Lactobacillus bulgari쳐s와 Streptococcus thermophilus의 혼합 배양(혼합비 1:1)에 미치는 영향을 검토하였다. 인산 염은 유산균의 생장을 촉진하였으며 특히 단독 배양의 경우 MSP와 STPP가, 혼합 배양의 경우 MSP와 DSP가 가장 효과적이었다. 산도도 유산균의 증식과 동일한 결과를 보였다. 배양액을 실온에서 저장하는 동안 생균 수의 감소는 인산 염 처리구가 대조구에 비하여 완만하였으며 단독 배양시 특히 DSP와 TSP가 효과적이었고 혼합 배양의 경우 TSP와 ${\alpha}-PG$가 가장 효과적이었다. 혼합 균주를 사용하여 제조된 발효유의 저장 중 안정성은 인산염 처리구가 대조구보다 좋았으며 특히 MSP가 가장 효과적이었다.
Soybean seeds were fermented by Bacillus subtilis and/or Lactobacillus bulgaricus to improve solubility, viscosity, water holding capacity and oil holding capacity of soybean proteins in Chongkukjang. The maximum colony forming unit and protease activity of B. subtilis or L bulgaricus were observed after 60 hours of fermentation, and those of the mixed fermentation by two microorganisms were steadily increased during the fermentation periods. Solubilities of soybean proteins by B. subtilis or L bulgaricus were steadily increased before the values were considerably increased to 60 hours of fermentation, whereas water holding capacities of the proteins were decreased by B. subtilis or L. bulgaricus and those of the mixed fermentation were decreased progressively. Viscosities of soybean proteins by B. subtilis and/or L. bulgaricus were decreased progressively during the fermentation. Viscosities of soybean proteins by B. subtilis and/or L. bulgaricus were decreased progressively during the fermentation. Oil holding capacities of soybeans by B. subtilis or L. bulgaricus were maximum at 20 or 80 hours of fermentation and those of the mixed fermentation were decreased after 10 hours of the fermentation.
Present study was investigate to evaluate the aluminum absorption effect on lactic acid bacteria(Lactobacillus acidophilus ATTC 4356, Lactogacillus bulgaricus ATTC 11842, Lactobacillus casei IFO 3533, and Streptococcus thermophilus KCTC 2185 ; LAB) and Clostridium perfringens ATCC 3627 (CP) in artificial intestinal tract. Their growth rate, aluminum accumulation and cellular distribution was studied under anaerobic broth system. All of above microbes were inhibited by adding 10 to 100ppm of aluminum. The degree of aluminum in LAB (Lactobacillus acidophilus ATCC 4356, Lactobacillus bulgaricus ATCC 11842, Lactobacillus casei IFO 3533, and Streptococcus thermophilus KCTC 2185) was higher than of CP. The largest amount of aluminum was accumulated in Lactobacillus bulgaricus ATCC 11842. Aluminum accumulation in LAB was distributed in 49.1% at cell wall, 27.3% at plasma membrane, and 23.6% at cytoplasm, respectively. This study suggests that LAB might help to eliminate the ingested aluminum in intestinal tract.
Behavior of Listeria monocytogenes in Skim milk during fermentation by Lactobacillus bulgaricus YI-2 and Streptococcus lactis FYI-1 were determined. Autoclaved skim milk was inoculated with ca. 10$^{3}$ L. monocytogenes (Strain LM91-1 or LM 96-2) cells/ml, and with 5.0, 1.0, 0.5 or 0.1% of a milk culture of either L. bulgaricus TI-2 or S. lactis FYI-1. Skim milk containing ca. 10$^{3}$ L. monocytogenes was incubated at 37 or 42$\circ $C for 15 h with L. bulgaricus YI-2, and at 21 or 30$\circ $C for 15 h with S. lactis FYI-1. Cultured skim milks were stored at 4$\circ $C in the refrigerater. Samples were plated on Oxford Agar with oxford antimicrobic supplement to enumerate L. monocytogenes and on either modified MRS agar to enumerate lactic acid bacteria. L. monocytogenes survived the 15-h fermentation with S. lactis FYI-1 in all combinations of level of inoculum and temperature of incubation, but inhibition of growth ranged from 94 to 100%. When incubated with over the 1.0% of L. bulgaricus, L. monocytogenes inhibited or disappeared in fermented skim milk from 9 h after incubation. Especially, incubation at 42$\circ $C with 5.0% L. bulgaricus YI-2 as inoculum appeared to be the most effective inhibitory combination for strain LM 91-1, causing 100% inhibition in growth based on maximum papulation attained. In most instances of incubated with L. bulgaricus YI-2, growth of the pathogene appeared to be completely inhibited when the pH dropped below 4.38.
균주개량 방법의 일환으로 electrofusion 법을 이용하여 protease 화성, lipase 활성, 내열성, 내산성 등이 우수한 L. bulgaricus와 bacteriocin을 생산하는 L. acidophilus 간의 융합조건을 검토하였다. Electrofusion에 의해 생성된 융합주는 식별하기 위해 streptomycin(2mg/ml)과 lincomycin(5$\mu\textrm{g}$/ml)에 내성을 나타내는 L. bulgaricus 변이주이와 kanamucin (600$\mu\textrm{g}$/ml)에 내성을 나타내는 L. acidophilus 88 변이주를 분리하였다. Electrofusion을 500V/cm, 100mses(49phms, 2300 capacotance)에서 수행했을 때 가장 융합이 잘 일어났으며 전기장의 세시와 시간이 증가할수록 융합요율이 현저히 감소하였다. 2가 양이온은 대체적으로 융합효율을 감속시키는 경향을 나타내었으나 1mM MgCl$_2$에서 융합 효율이 약간 증가하였다. PEG 400을 elec-trogusion buffer에 30%되도록 첨가했을 때, 가장 양호한 융합효율을 나타내었으며 그 이상에서는 오히려 융합 효율이 감소하였다. Electrofusion법과 PEG 매개에 의한 융합법의 융합 효율을 비교한 결과, 거의 비슷한 융합 효율을 나타내었으나 electrofusion 법과 PEG매개에 의한 융합법을 혼합하였을 때 가장 양호한 융합 효율을 나타내었다.
본 연구는 Lactobacillus bulgaricus SP5 분비물의 항균물질 탐색과 특성을 조사하고 병원성 미생물에 대한 억제효과를 얻고자 실시하였다. L. bulgaricus로부터 얻어진 상징액에 대한 항균활성은 시험에 이용된 모든 병원성 미생물인 E. coli 11234, Salmonella. enteritidis 3313, S. enteritidis 12021, 그리고 S. typhimurium 40253에 대해서 항균활성을 가지는 것으로 나타났다. 상징액 중의 황균활성 성분을 확인하기 위하여 다양한 pH 조정과 열처리 후, 병원성 미생물에 대한 항균활성을 측정하였다. 상징액의 열처리 후, 병원성미생물에 대한 항균활성은 비열처리와 같은 항균활성을 나타내었으나, 상징액의 pH를 4.6에서 중성이상으로의 변화는 항균활성이 현저히 감소하였다. 따라서 상징액의 항균활성은 pH 변화에 대해서 불안정하였으나, 열에 대해서는 매우 안정한 것으로 밝혀졌다. 이상의 결과를 통해 상징액의 병원성균에 대한 항균작용은 박테리오신 같은 peptide 보다는 lactic, acetic, phosphoric, succinic, pyroglutamic, citric, malic, 그리고 formic acid 등 다양한 유기산의 작용에 의한 것으로 확인되었다.
Conditions for the production and regeneration in Lactobacillus bulgaricus protoplasts were investigated. Protoplasts of L bulgaricus strains were obtained by treatment with mutanolysin and lysozyme together in a protoplast forming buffer containing 0.02 M N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulfonic acid (HEPES) (pH 7.0) and 0.5 M sucrose. High protoplast yield was obtained from cells cultured in the de Man, Rogosa and Sharpe(MRS) medium at the middle to late logarithmic growth phase. Regeneration was efficiently accomplished with a complex medium containing 1% sucrose, 20 mM $MgCl_2$, 5% gelatin, and 0.5% bovine serum albumin. The frequency of regeneration of protoplasts was 10~20% after 5 days of incubation at $30^{\circ}C$.
본 연구는 home-made 요구르트에서 분리한 Lactobacillus casei SK-7과 시중에서 판매되고 있는 요구르트에서 분리한 Lactobacillus bulgaricus YK-11의 기능성을 비교 분석하기 위해 실시하였다. 먼저 분리세균인 SK-7과 YK-11의 생리화학적 특성조사를 진행하였다. 이들 균주는 16S rRNA 염기서열을 이용한 계통유전학적 분석방법으로 동정하여, 각각 L. casei SK-7와 L. bulgaricus YK-11로 명명하였다. 16S rRNA 염기서열을 바탕으로 SK-7과 YK-11의 유전적 계통수를 작성하였다. 72시간 동안 SK-7과 YK-11 배양에서 lactic acid와 acetic acid의 생산, 그리고 pH 변화를 조사하였다. 배양기간 동안 L. casei SK-7과 L. bulgaricus YK-11의 몇가지 기능성을 조사하였다. L. casei SK-7과 L. bulgaricus YK-11 배양상등액은 주어진 nitrite를 각각 93.9%와 88.2% 소거하였다. SK-7 and YK-11 배양상등액의 항산화능은 각각 62.6%와 54.9%였으며, ${\beta}$-galactosidase 활성은 14.9 units/mg과 13.1 units/mg로 측정되었다. 항미생물능력은 SK-7과 YK-11 배양의 20배 배양농축액으로 조사되었으며, SK-7은 이 조사에 사용된 모든 미생물에서 명백한 것으로 관찰되었으나, YK-11에서는 관찰되지 않았다. 부가적인 기능성 연구가 이루어져야 되겠지만, 본 연구에서는 home-made 요구르트에서 분리된 젖산균의 기능성은 시판요구르트에서의 기능성과 비교하여 우수한 것으로 조사되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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