Several contaminated bacteria such as Lactobacillus brevis and Pediococcus damnosus in beer production cause beer spoilage by producing off flavours and turbidity. Detection of these organisms is complicated by the strict anaerobic conditions and lengthy incubation times required for their cultivation, consequently there is a need for more rapid detection methods. Recently, two contaminated strains were isolated from vessel of beer production and identified as Lactobacillus species by API kit identificaton as well as 16S-23S ITS sequencing analyses. Two isolated strains were named as Lactobacillus sp. HLA1 and Lactobacillus HLB2, respectively. A polymerase chain reaction (PCR) method was developed for the rapid and specific detection of Lactobacillus sp.. Two sets of primer pairs (HLA1-F/HLA1-R and HLB2-F/HLB2-R) were designed for the amplification of a 1576 base pair (bp) fragment of the HLA1 16S-23S rRNA gene and 1888 bp fragement of the HLB2 16S-23S rRNA. Amplified PCR products were highly specific to detect corresponding bacteria when other contaminated strains were used as PCR templates. However, detection of both strains were limited when $100{\mu}{\ell}$ of cultured samples were mixed with $100m{\ell}$ of beer sample in arbitrary manner. The sensitivity of the assay still needs to be improved for direct detection of the small amounts of bacteria present in beer.
Lactic acid bacteria (LAB) are beneficial for the gastrointestinal tract and reinforce immunity in human health. Recently, many functional products using the lactic acid bacteria have been developed. Among these LAB, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium longum, and Bifidobacterium bifidum are frequently used for probiotic products. In order to monitor these LAB in commercial probiotic products, a multiplex PCR method was developed. We designed four species-specific primer pairs for multiplex PCR from the 16S rRNA, 16S-23S rRNA intergenic spacer region, and 23S rRNA genes in Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium longum, and Bifidobacterium bifidum. Using these primer pairs, 4 different LAB were detected with high specificity in functional foods. We suggest that the multiplex PCR method developed in this study would be an efficient tool for simple, rapid, and reliable identification of LAB used as probiotic strains.
For the comparison of fermentation pattern of leek kimci with chinese cabbage kimchi, the changes of total viable cell number, Leuconostoc sp. bacteria, Lactobacillus sp. bacteria, pH and total sugar content of twotypes kimchies were investigated during fermentation at $20^{\circ}C$ and $10^{\circ}C$. In chinese cabbage kimchi at $20^{\circ}C$ fermentaion, the numbers of total viable cell, Leuconostoc sp. bacteria and Lactobacillus sp. bacteria reachedthe maximum level on 2nd day and reduced slowly. But in leek kimchi, the maximum numbers of total via-ble cells, Leuconostoc sp. bacteria and Lactobacillus sp. bacteria were obtained after 3 days fermentation,and the cell number of Lactobacillus sp. maintained at the maximum level oyer 15 days. At $10^{\circ}C$ fer-mentation, in both kimchies, the viable cell number of lactic acid bacteria more slowly increased anddecreased than at $20^{\circ}C$. The pH of chinese cabbage kimchi was 4.2 on 3rd day (optimal ripening phase) andmere decreased to 3.5 after 5 days, but in leek kimci the pH 4.2 could be reached after 10 days at $20^{\circ}C$. At $10^{\circ}C$, the optimal ripening pH 4.2 of chinese cabbage kimchi was reached after 6 days, but in leek kimchieven though after 24 days, the pH was maintained oyer 4.3. The total sugar contents of chinese cabbage him-chi and leek kimci were decreased continuously during fermentation. From these results, we know that thefermentation of leek kimchi proceed more slowly than chinese cabbage kimchi by the retardation of lacticacid bacteria growing in leek kimchi.
Lactobacillus is a commonly used probiotic, and many researchers have focused on its stress response to improve its functionality and survival. However, studies on persister cells, dormant cells that aid bacteria in surviving general stress, have focused on pathogenic bacteria that cause infection, not Lactobacillus. Thus, understanding Lactobacillus persister cells will provide essential clues for understanding how Lactobacillus survives and maintains its function under various environmental conditions. We treated Lactobacillus strains with various antibiotics to determine the conditions required for persister formation using kill curves and transmission electron microscopy. In addition, we observed the resuscitation patterns of persister cells using single-cell analysis. Our results show that Lactobacillus creates a small population of persister cells (0.0001-1% of the bacterial population) in response to beta-lactam antibiotics such as ampicillin and amoxicillin. Moreover, only around 0.5-1% of persister cells are heterogeneously resuscitated by adding fresh media; the characteristics are typical of persister cells. This study provides a method for forming and verifying the persistence of Lactobacillus and demonstrates that antibiotic-induced Lactobacillus persister cells show characteristics of dormancy, sensitivity of antibiotics, same as exponential cells, multi-drug tolerance, and resuscitation, which are characteristics of general persister cells. This study suggests that the mechanisms of formation and resuscitation may vary depending on the characteristics, such as the membrane structure of the bacterial species.
Lactic acid bacteria were isolated from pig feces for probiotics. The six isolated strains were identified as Lactobacillus paracasei (Lp), Lactobacillus fermentum (Lf), Lactobacillus brevis (Lb), Lactobacillus plantarum (P1 , P2), and Pediococcus pentosaceus (P3) by its sugar utilization, morphological and physiological characteristics. Pl was showed largest antibacterial inhibition zone among the isolated strains. It was against Salmonella gallinarum 25mm, E. coli 20.5mm, Staphylococcus aures 24mm, and Pseudomonas aeruginosa 28mm by inhibitory zone, respectively. Lf was showed hyper acid tolerance, $80\%$ survival rate for 40 minutes, and P1, Lb showed hyper bile tolerance, $408\%,\;283\%$ survival rate for 9 hrs, respectively. Therefore the Lf, P1, and P2 strains were expected to probiotics.
The aim of this study was to investigate the potential of lactic acid bacteria (LAB) strains as probiotics. Two strains were isolated from healthy chicken cecum and their acid and bile tolerance, residual organic acids, antibacterial activity against pathogenic bacteria, and immunomodulation activity were measured. Identification of the isolated strains was performed using the API 50CHL system and phylogenetic analysis using 16S rDNA sequencing. The isolates were determined to be Lactobacillus sakei strains. The acid tolerance of strains L2 and L8 was high enough that 75% of the inoculum survived in pH 2 for 2 h. The bile tolerance of both strains was observed at a 1% Oxgall concentration in MRS broth. The production of organic acids (lactic acid and acetic acid) and pH changes during growth were monitored and the maximum concentrations were obtained after 48 h of incubation. Culture supernatants of the two LAB strains showed strong antibacterial activity against pathogenic bacteria. The heat-killed LAB cells also induced high levels of immune cell proliferation compared with the control, and stimulated IL-6 and TNF-α production in mouse macrophages. Therefore, L. sakei strains L2 and L8 can be considered suitable probiotic bacteria.
Effects of monosodium phosphate, disodium phosphate, trisodium phosphate, ${\alpha}-polygel$, sodium ultrametaphosphate and sodium tripolyphosphate on the growth of bacteria, pH and acidity in single culture of Lactobacillus bulgaricus and mixed-culture of Lactobacillus bulgaricus and Streptococcus thermophilus were investigated. Phosphates exerted definite effect in enhancing the growth of the bacteria and acidity of the fermented milk. For the single-culture of Lactobacillus bulgaricus monosodium phosphate and sodium tripolyphosphate were most effective in terms of bacterial growth and acidity, whereas for the mixed-culture of Lactobacillus bulgaricus and Streptococcus thermophilus monosodium phosphate and disodium phosphate showed the best results. In the presence of the phosphates, particularly of trisodium phosphate, the decrease of viable count of bacteria in fermented milk during storage was reduced significantly. The stability of the fermented milk prepared with the mixed-culture of Lactobacillus bulgaricus and Streptococcus thermophilus was improved by the addition of phosphates, particularly of monosodium phosphate.
The various extracellular enzymes produced by lactic acid bacteria isolated from kimchi were assayed to improve the shelf-life of kimchi. Peroxidase was not detected in all tested lactic acid bacteria and small amount of ascorbic acid oxidase was detected in Pediococcus pentosaceus and Lactobacillus brevis. In case of $\alpha$-amylase, 27.8 and 20.9 unit/mg were shown in Pediococcus acidilactici and Pediococcus pentosaceus, respectively but $\beta$-amylase and protease activities were very low. The enzyme related to textural property of kimchi, pectinesterase showed low activity but polygalacturonase activity was 0.28 unit/mg in Lactobacillus homohiochii and 0.27 unit/mg in Lactobacillus plantarum.
To examine stability and a separate quantitative method of a mixed preparation of lactic acid bacteria, a capsule containing Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus and Streptococcus thermophilus was suspended and diluted in sterile water. After the diluted suspension was spread on three media of tryptone glucose extract agar, MRS agar and MRS-sucrose agar, their colonies appeared and were counted. The viable counts exceeded the minimum number of the three bacteria and showed that the mixed preparation was stable at least for 18 months. The results also showed that a separate quantitation of viable cells of the each strain was feasible.
To investigate the effect of lactic acid bacteria on the heavy metal adsorption from internal organs and blood, lactic acid bacteria were isolated from human feces. Some strains resistant to heavy metals were selected by incubation in agar media containing each of chrome and cadmium salts. Among them, a strain named KP-3 was ultimately chosen due to its higher growth rate in selective broth medium containing the heavy metals at the concentration of 0.01%. The strain was identified as Lactobacillus sp. based on its morphological, cultural and physiological characteristics. For evaluating the ability to prevent accumulation of heavy metals by selected Lactobacillus sp. strain in vivo, Sprague Dawley rats were fed with heavy metal salts (cadmium, chrome and lead) with or without cultured whole cells for 7 days. The amounts of heavy metals accumulated in liver, kidney and blood were analyzed. As a result, chrome was accumulated to kidney mostly, and lead was frequently found in liver and kidney. Experimental group (rats fed with lactic acid bacteria) showed less accumulation of heavy metal than control group (rats fed with saline solution). The inhibition rates of heavy metal accumulation were calculated to 41.8% (Cd), 33.4% (Cr) and 44.2% (Pb). Especially, feeding lactic acid bacteria strongly reduced accumulation of cadmium in blood. The results showed that feeding Lactobacillus sp. KP-3 could prevent the bioaccumulation of heavy metals in the living body.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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