본 논문은 합성형 성장호르몬으로 천연 프로게스테론에 비해 20~30배 강하게 작용하는 초산메드록시프로게스테론에 대한 정량한계, 표준물질의 직선성, 회수율 등의 유효성 평가 및 내부표준물질 선정을 통한 분석방법 최적화를 식품공전의 시험법을 기초로 수행하고, 이를 바탕으로 국내 유통식육 내 초산메드록시프로게스테론의 잔류량을 조사하였다. 그 결과 초산메드록시프로게스테론의 검출한계는 1.5 ug/kg, 정량한계는 5.0 ug/kg 으로 나타났으며 표준물질의 좋은 직선성 ($r^2$= 0.9968)을 확인 하였다. 내부표준물질의 비교결과 식품에 오염될 우려가 없는 progesterone-D9으로 선정하였다. 이를 시험한 결과 7.69분의 머무름 시간을 가지며, 정량이온은 m/z 324-100, 정성이온은 m/z 324-113으로 설정하였다. 내부표준물질에 대한 정량의 회수율 실험결과 67.5~109.5%로 높아진 회수율을 나타낸 것을 알 수 있었다. 이와 함께 전국의 서울특별시 및 6개 광역시에서 수거한 국내산 쇠고기 46건, 수입산 쇠고기 43건, 국내산 돼지고기 60건, 수입산 돼지고기 12건과 국내산 닭고기 35건의 초산메드록시프로게스테론의 잔류량을 실태 조사한 결과 검출된 경우는 한건도 없었다. 따라서, 초산메드록시프로게스테론에 대한 유통 식육은 안전한 것으로 조사되었다.
국내경주마에서 검출되는 금지약물의 종류와 빈도는 보고된 바 없다. 본 연구의 목적은 국내 경마장에서 검출되는 금지약물의 종류와 검출빈도를 알아 보고자 2002년부터 2013년까지 국내 3개의 경마장에서 29,543 마리의 경주 전 경주마에서 채혈하였고, 경주 후에 3위 이내의 경주마와 재결지정마 91,482 마리에서 채뇨하여 효소면역분석법, 가스 크로마토그래프 질량분석계 그리고 액체 크로마토그래프 질량분석계를 이용하여 한국마사회 도핑검사소에서 검사하였다. 기간 중 경주전후 도핑 양성률은 각각 0.0030%, 0.0186%였으며, 경주 전에는 caffeine 그리고 경주 후에는 ketoprofen이 가장 많이 검출되었다. 약물의 약물동력적 및 약력학적 특성 때문에 혈액과 뇨의 결과가 달랐다고 생각된다. 그리고 재결위원의 조사결과, 금지약물검출은 오염된 사료 또는 깔짚에서 말에게 옮겨졌거나 출주예정마에 대한 말관리사의 혼란에서 비롯되었다.
혈액 내 urea는 임상진단 시 신장 기능을 판단하는 중요한 표지물질로서 측정되고 있다. 단백질 등 질소화합물의 최종 대사물인 urea는 콩팥의 사구체에서 걸러져 소변으로 배출되는데, 사구체의 거르는 능력이 저하되면 결국 혈액 속의 urea 농도가 증가하게 되어 신장 기능의 정상여부를 판단할 수 있게 된다. 이러한 임상진단 결과의 신뢰성 향상을 위해서는 측정결과가 일차분석법으로 인증된 인증표준 물질과 소급성 고리를 유지해야 한다. 본 연구에서는 혈청 내 urea의 일차분석법으로서 $15^N_2$-urea를 내부 표준물질로 사용하는 동위원소희석 액체크로마토그라피-질량분석법 (ID-HPLC/MS)을 개발하였다. 이 방법은 측정원리상 고도의 정확성이 확보될 뿐 아니라 별도의 유도체화가 필요 없기 때문에 빠르고 편리하다. $C_{18}$-분리관에 0.1 mmol/L $NH_4Cl$ buffer를 이동상으로 사용하여 urea를 분리하였는데, 이 완충용액은 비교적 분자량이 작은 urea를 질량분석하는데 방해가 크지 않은 장점이 있다. HPLC와 질량분석기의 인터페이스로서 positive mode의 electrospray ionization (ESI)를 사용하여 높은 감도와 재현성을 성취하였다. 국제적으로 인정된 인증표준물질의 분석을 통해 최적화된 방법의 유효성을 확인하였으며, 국제비교시험에도 참여하여 좋은 결과를 얻었다. ISO guide에 따라 불확도를 계산하였으며, 확장 불확도는 95% 신뢰도에서 약 1.8%로 나타났다. 이 분석법은 표준연에서 개발 중인 혈청인증표준물질을 인증하는 일차기준측정절차로도 사용되고 있다.
원두커피의 PAHs 분석을 위한 시료 전처리는 Soxhlet 추출법과 액/액 추출법 두 가지로 하였다. 두 방법의 간단한 모식도는 Fig. 2을 통해 나타내었다. Soxhlet 추출법을 이용하여 추출한 후 비누화시켜 SPE cartridge로 silica cartridge를 사용하여 효과적으로 정제하였으며, 액/액 추출법은 먼저 비누화를 시킨 후 n-hexane을 이용하여 추출하고 florisil cartridge로 clean up 시킨 후 각각 HPLC-FLD를 사용하여 분석하였다. 이러한 두 가지 방법으로 진행된 실험의 결과 90% 이상의 회수율을 보인 것은 액/액 추출법의 B[a]A, Chrys이었고, 80% 이상의 회수율을 보인 것은 액/액 추출법의 B[b]F, B[k]F, B[a]P, DB[a,h]A과 Soxhlet 추출법의 B[a]A, Chrys으로 나타났으며, 그 외에는 약 70% 정도의 회수율을 나타내었다. 7종의 총 PAHs 회수율은 각각 Soxhlet 추출법은 74.25%이고 액/액 추출법 77.08%로 많은 차이를 보이진 않았지만 액/액 추출법이 더 높은 회수율을 나타내었다. 두 방법 모두에서 Chrys의 회수율이 가장 높았으며, 두 가지 방법을 비교하여 실험한 결과 많은 차이를 보이지는 않았지만 Soxhlet 추출법보다 액/액 추출법이 전처리에 소비되는 시간을 줄일 수 있었으며 또한 액/액 추출법에서 표준물질의 회수율도 높게 나타났다.
본 연구에서는 잔류성유기오염물질(POPs) 관련 스톡홀름협약에 효율적으로 대응하고 POPs 물질의 잠재적 위험으로부터 국민 건강과 생태계를 보존하기 위해, '09년 신규 POPs 물질로 협약에 등재된 9종의 물질 중 우선적으로 POPs 공정시험방법 마련이 필요한 chlordecone, endosulfan, hexachlorocyclohexane (${\alpha}$-HCH, ${\beta}$-HCH, ${\gamma}$-HCH) 5종의 분석방법 확립 및 환경시료의 적용성 평가를 통해 POPs 공정시험방법을 마련하였다. 신규 POPs 5종은 모두 유기염소계 농약류(OCPs)로 기존 유기염소계 농약류의 다성분 동시분석방법에 추가하여 시험방법을 검토한 결과, 전처리과정에서 플로리실컬럼 및 활성탄컬럼 정제를 통해 본 연구에서 검토한 신규 POPs 5종 중 ${\alpha}$-HCH, ${\beta}$-HCH, ${\gamma}$-HCH 및 endosulfan에 대해서 동시전처리를 실시하여 GC/MS 및 HRGC/HRMS로 분석할 수 있는 방법을 제안하였다. 또한 chlordecone 에 대해서는 현재 GC분석으로 높은 감도를 얻을 수 없는 문제점으로 인하여, 향후 LC/MS/MS 방법을 추가 검토한 후 최종 시험방법을 제시하되 이번 연구에서는 GC/MS 방법을 제시하였다.
Background: Although flowers of Panax ginseng Meyer (FPG), Panax quinquefolius L. (FPQ), and Panax notoginseng Burk. (FPN) have been historically used as both medicine and food, each is used differently in practice. Methods: To investigate the connection between components and enhancing immunity activity of FPG, FPQ, and FPN, a method based on a rapid LC coupled with quadrupole time-of-flight MS and immunomodulatory activity study evaluated by a carbon clearance test were combined. Results: According to quantitative results, the ratio of the total content of protopanaxatiol-type ginsenosides to protopanaxadiol-type ginsenosides in FPN was 0, but ranged from 1.10 to 1.32 and from 0.23 to 0.35 in FPG and FPQ, respectively. The ratio of the total content of neutral ginsenosides to the corresponding malonyl-ginsenosides in FPN ($5.52{\pm}1.33%$) was higher than FPG ($3.2{\pm}0.64%$) and FPQ ($2.39{\pm}0.57%$). The colorimetric analysis showed the content of total ginsenosides in FPQ, FPG, and FPN to be $13.75{\pm}0.60%$, $17.45{\pm}0.42%$, and $12.45{\pm}1.77%$, respectively. The carbon clearance assay indicated that the phagocytic activity of FPG and FPQ was higher than that of FPN. A clear discrimination among FPG, FPQ, and FPN was observed in the principal component analysis score plots. Seven compounds were confirmed to contribute strongly by loading plots, which may be the cause of differences in efficacy. Conclusion: This study provides basic information about the chemical and bioactive comparison of FPG, FPQ, and FPN, indicating that protopanaxtriol-type ginsenosides and malonyl-ginsenosides may play a key role in their enhancing immunity properties.
Yu, Jae Sik;Roh, Hyun-Soo;Baek, Kwan-Hyuck;Lee, Seul;Kim, Sil;So, Hae Min;Moon, Eunjung;Pang, Changhyun;Jang, Tae Su;Kim, Ki Hyun
Journal of Ginseng Research
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제42권4호
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pp.562-570
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2018
Background: Lung cancer is the leading cause of cancer-related death worldwide. In this study, we used a bioactivity-guided isolation technique to identify constituents of Korean Red Ginseng (KRG) with antiproliferative activity against human lung adenocarcinoma cells. Methods: Bioactivity-guided fractionation and preparative/semipreparative HPLC purification were used with LC/MS analysis to separate the bioactive constituents. Cell viability and apoptosis in human lung cancer cell lines (A549, H1264, H1299, and Calu-6) after treatment with KRG extract fractions and constituents thereof were assessed using the water-soluble tetrazolium salt (WST-1) assay and terminal deoxyribonucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) staining, respectively. Caspase activation was assessed by detecting its surrogate marker, cleaved poly adenosine diphosphate (ADP-ribose) polymerase, using an immunoblot assay. The expression and subcellular localization of apoptosis-inducing factor were assessed using immunoblotting and immunofluorescence, respectively. Results and conclusion: Bioactivity-guided fractionation of the KRG extract revealed that its ethyl acetate-soluble fraction exerts significant cytotoxic activity against all human lung cancer cell lines tested by inducing apoptosis. Chemical investigation of the ethyl acetatesoluble fraction led to the isolation of six ginsenosides, including ginsenoside Rb1 (1), ginsenoside Rb2 (2), ginsenoside Rc (3), ginsenoside Rd (4), ginsenoside Rg1 (5), and ginsenoside Rg3 (6). Among the isolated ginsenosides, ginsenoside Rg3 exhibited the most cytotoxic activity against all human lung cancer cell lines examined, with $IC_{50}$ values ranging from $161.1{\mu}M$ to $264.6{\mu}M$. The cytotoxicity of ginsenoside Rg3 was found to be mediated by induction of apoptosis in a caspase-independent manner. These findings provide experimental evidence for a novel biological activity of ginsenoside Rg3 against human lung cancer cells.
This study was designed to evaluate the effect of the bee venom(BV) aqua-acupuncture on the neuronal activities of serotonergic(5-HT) system in the brainstem. After the BV aqua-acupuncture was applied on Chok-Samni(ST36) and the gluteal part(Blank locus) in rats, the number of Fos immunoreactive neurons was counted by using computerized image analyzing system. Also, the number of colocalization between 5-HT containing neurons Fos immunoreactive neurons were analyzed by using the double immunohistochemical technique. The results of the experiments were summarized as follows : 1. In almost every neucli, the Chok-Samni group and Blank locus group showed more increase in the number of Fos immunoreactive neurons than the control group. Especially, in Arc, DR, LC, RMg, Gi, PAG Rost and PAG LV, the Chok-Samni group showed more significant increase than the control group. Also, in PAG LV Mid and Arc, Chok-Samni group showed more significant increase than the Blank locus group. 2. In DR and PAG LV Mid, Chok-Samni group and the Blank locus group showed more significant increase in the number of colocalization between 5-HT containing neurons and Fos immunoreactive neurons than the control group after the BV aqua- acupuncture. Also, the Chok-Samni group showed more significant increase than the Blank locus group. Consequently, the BV aqua-acupuncture increased more potent the number of Fos immunoreactive neurons and the activity of serotonergic neurons. Furthermore, the BV aqua-acupuncture was more effective on Chok-Samni than Blank locus group. These results indicate that the BV aqua-acupuncture is very effective therapy to control pain. The therapeutic effect of BV aqua-acupunture may associated with the endogenous modulatory system such as serotonin Those data from the study can be applied to establish the effective treatment of the BV for pain control in the clinical field.
이용자의 서비스 고급화 및 다양화에 대한 요구수준이 증대함에 따라 차세대 기술을 이용한 고속도로교통관리시스템 제공과 체계적인 운영이 필요하게 되었으며, 이에 따라 향후 차세대 고속도로 교통관리시스템(exTMS)을 제공하고자 한다. 이러한 exTMS 기반의 고속도로 교통관리방안의 정량적 효과분석을 통한 시스템 도입의 타당성을 마련해야하며, 체계적인 운영이 이루어질 수 있도록 효과를 기반으로 한 운영 기준이 필요하다. 따라서 본 연구에서는 교통상황(V/C=0.5/0.8/1.2)에 따라 각 상황별 전체시스템 및 개별시스템(갓길LCS/VMS(Hi-pass기반의 교통정보제공, VMS의 기능 및 서비스 개선포함)/램프미터링)을 적용하여 효과를 분석하였다. 그 결과 전 시스템 및 개별시스템이 적용되었을 경우 모두 통행속도가 개선되는 효과가 나타났으며, V/C가 높은 교통상황일수록 시스템의 적용효과가 큰 것으로 분석되었다. 개별시스템 중 갓길 LCS의 효과가 가장 크게 나타났으며, 교통정보제공을 통한 우회율이 11%일 경우도 효과가 비교적 높게 나타났다.
Background: Exploring the pharmacokinetic (PK) changes of various active components of single herbs and their combinations is necessary to elucidate the compatibility mechanism. However, the lack of chemical standards and low concentrations of multiple active ingredients in the biological matrix restrict PK studies. Methods: A putative multiple reaction monitoring strategy based on liquid chromatography coupled with mass spectrometry (LC-MS) was developed to extend the PK scopes of quantification without resorting to the use of chemical standards. First, the compounds studied, including components with available reference standard (ARS) and components lacking reference standard (LRS), were preclassified to several groups according to their chemical structures. Herb decoctions were then subjected to ultrahigh-performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry analysis with appropriate collision energy (CE) in MS2 mode. Finally, multiple reaction monitoring transitions transformed from MS2 of ultrahigh-performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry were used for ultrahigh-performance liquid chromatography coupled with triple quadrupole mass spectrometry to obtain the mass responses of LRS components. LRS components quantification was further performed by developing an assistive group-dependent semiquantitative method. Results: The developed method was exemplified by the comparative PK process of single herbs Radix Ginseng (RG), Radix Polygala (RP), and their combinations (RG-RP). Significant changes in PK parameters were observed before and after combination. Conclusion: Results indicated that Traditional Chinese Medicine combinations can produce synergistic effects and diminish possible toxic effects, thereby reflecting the advantages of compatibility. The proposed strategy can solve the quantitative problem of LRS and extend the scopes of PK studies.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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