귀리추출물에 L. delbrueckii subsp. bulgaricus 또는 S. salivarius subsp. thermophilus를 단일균주로 발효한 것에 비하여 L. delbrueckii subsp. bulgaricus와 S. salivarius subsp. thermophilus를 혼합하여 발효하는 경우에는 미생물균수와 산 생성이 증가하였다. pH의 변화에서도 S. salivarius subsp. thermophilus의 경우가 L. delbrueckii subsp. bulgaricus보다 더 낮은 pH를 나타내었으며, L. delbrueckii subsp. bulgaricus와 S. salivarius subsp. thermophilus를 혼합하여 발효하는 경우에는 pH가 더 빠르게 감소하였다. 이러한 결과는 우유를 원료로 한 요구르트의 경우처럼 귀리추출물의 젖산발효에서도 L. delbrueckii subsp. bulgaricus와 S. salivarius subsp. thermophilus의 두 균주 간에 생육촉진 현상이 있음을 의미하는 결과로 해석될 수 있는데 그 정도는 매우 적었다. 본 실험에서 S. salivarius subsp. thermophilus의 미생물균수와 산 생성이 더 증가한 반면 pH는 더 낮은 이유는 L. delbrueckii subsp. bulgaricus에 비하여 귀리추출물에 더 잘 적응하였기 때문이라고 생각된다.
This study was conducted to investigate lactobacillus salivarius subsp. salivarius having probiotic properties to be used as the health adjuncts with fermented milk products. Acid- and bile-tolerant lactobacillus salivarius subsp. salivarius was isolated with lactobacilli MRS broth from faeces of 80 healthy persons (infants, children and adults). It was used as a probiotic strain in fermented milk products. The pH of fermented milk decreased from pH 6.7 to 5.0 and titratable acidity increased from 0.3% to 1.0% by L. salivarius subsp. salivarius (isolation strain 20, 35, and 37), when incubated for 36 h at 37$^{\circ}C$. The number of viable cell counts of fermented milk was maximized at this incubation condition. The SDS-PAGE evidenced no significant change of casein but distinct changes of whey protein were observed by isolated L. salivarius subsp. salivarius for titratable acidity being incubated by 0.9-1.0% at 37$^{\circ}C$. All of the strains produced 83.43 to 131.96 mM of lactic acid and 5.39 to 26.85 mM of isobutyric acid in fermented products. The in vitro culture experiment was performed to evaluate ability to reduce cholesterol levels and antimicrobial activity in the growth medium. The selected L. salivarius subsp. salivarius reduced 23-38% of cholesterol content in lactobacilli MRS broth during bacterial growth for 24 h at 37$^{\circ}C$. All of the isolated L. salivarius subsp. salivarius had an excellent antibacterial activity with 15-25 mm of inhibition zone to E. coli KCTC1039, S. enteritidis KCCM3313, S. typhimurium M-15, and S. typhimurium KCCM40253 when its pH had not been adjusted. Also, all of the isolated L. salivarius subsp. salivarius had partial inhibition zone to E. coli KCTC1039, E. coli KCTC0115 and S. enteritidis KCCM3313 when it had been adjusted to pH 5.7. The selected strains were determined to have resistances of twelve antibiotic. Strains 27 and 35 among the L. salivarius subsp. salivarius showed the highest resistance to the antibiotics. These results indicated that some of the L. salivarius subsp. salivarius (strain 27 and 35) are considered as effective probiotic strains with a potential for industrial applications, but the further study is needed to establish their use as probiotics in vivo.
Newborn chicks are susceptible to Salmonella enterica serovar Enteritidis (SE). The objective of this study was to evaluate the effect of Lactobacillus probiotic isolated from chicken feces on heterophil phagocytosis in broiler chicks. A total of 150 newborn broiler chicks were divided into 5 groups (30 chicks per group) as follows: group 1 (normal control), given feed and water only, group 2 (positive control) given feed, water and SE infection, group 3 (L61 treated) given feed, water, SE infection followed by Lactobacillus salivarius L61 treatment, group 4 (L55 treated) given feed, water, SE infection followed by L. salivarius L55 treatment, and group 5 given feed, water, SE infection followed by L. salivarius L61 + L55 combination treatment. After SE infection, L. salivarius treatment lasted for 7 days. The results showed that L. salivarius L61 and L. salivarius L55 treatment, either alone or combination of both, increased the survival rate after SE infection, and upregulated heterophil phagocytosis and phagocytic index (PI). Conversely, chick groups treated with Lactobacillus showed lower SE recovery rate from cecal tonsils than that of the positive control group. The PI values of the chicken group with SE infection, followed by the combination of L. salivarius L61 and L. salivarius L55 were the highest as compared to either positive control or normal control group. Two Lactobacillus strains supplementation group showed significantly (p<0.05) higher PI value at 48 h than 24 h after treatment.
산란계의 분변으로부터 생균제 특성을 가진 유산균을 분리하기 위하여, 무작위 선발법과 agar well diffusion assay법을 사용하여 다수의 유산균을 1차 선발하였으며 이 중에서 대장균 억제능이 가장 우수한 CPM-7 균주를 분리하였다. 최종 선발된 CPM-7 균주는 형태학적 특징, 당 이용성 및 16S rRNA 서별 분석을 통하여 Lactobacillus salivarius CPM-7으로 동정되었다. L. salivarius CPM-7은 내산성 및 내담즙성이 우수한 것으로 나타났는데, pH 2에서 30분 동안 및 pH 3에서 6시간 동안 생균수가 거의 유지되었으며, bile salt 0.2%가 첨가된 MRS 배지에서 증식할 수 있었다. L. salivarius CPM-7은 a-galactosidase를 포함한 다수의 효소를 생산하는 것으로 확인되었으며, 돼지의 장 상피세포에 흡착할 수 있었다. L. salivarius CPM-7의 배양액 및 중화액은 자돈 설사를 유발하는 것으로 알려진 E. coli K88에 대한 강력한 억제능을 나타내었다.
본 연구는 탈지율에 4%의 쌀 분말과 탈지분유를 첨가하여 단독 균주인 L. salivarius ssp. salivarius와 L. casei 그리고 B. longum, L. acidophilus, Streptococcus salivarius ssp. thermophilus의 혼합 균주로 요구르트를 제조하여 젖산균주에 따른 발효특성을 연구하였다. L. salivarius ssp. salivarius로 제조한 요구르트의 경우 쌀 분말과 탈지분유를 첨가한 시료 무두 산 생성이 활발하지 못해 배양 14기산까지 적정 pH인 4.5와 적정 산도인 1.0%에 도달하지 못하였다. L. casei로 제조한 요구르트의 경우 발효는 빨리 진행되었으나 8시간 이후부터는 pH와 산도가 너무 낮아 요구르트의 품질을 유지하기가 어려웠다. B. longum, L. acidophilus, Streptococcus salivarius ssp. thermophilus의 혼합 균주로 제조한 요구르트 중 탈지분유를 첨가한 시료는 배양 8시간 이후부터 14시간까지 적정 pH와 산도가 잘 유지되었다. 점도는 균주의 종류에 관계없이 탈지분유를 첨가한 시료가 쌀 분말을 첨가한 시료보다 높았다. L. salivarius ssp. salivarius와 B. longum, L. acidophilus, Streptococcus salivarius ssp. thermophilus의 혼합 균주로 제조한 요구르트 중에서는 쌀 분말을 첨가한 시료가, 그리고 L. casei로 제조한 요구르트 중에서는 탈지분유를 첨가한 시료가 lactic aciddm 생성량이 많았다. B. longum, L. acidophilus, Streptococcus salivarius ssp. thermophilus의 혼합 균주로 제조한 요구르트에서는 쌀 분말과 탈지분유를 첨가한 시료에서 요구르트의 향기성분인 acetic acid가 많이 생성되었다. Galactose는 B. longum, L. acidophilus, Streptococcus salivarius ssp. thermophilus의 혼합 균주와 L. salivarius ssp. salivarius로 제조한 요구르트에서 측정되었다. 관능검사 결과 쌀 분말을 첨가한 시료가 모든 항목에서 높은 값을 나타내었으며 젖산균주에 따른 차이를 보면 색은 L. salivarius ssp. salivarius가 가장 높은 값은 나타내었으나 풍미와 단맛과 신맛의 조화, 조직감, 전체적인 기호도에서는 B. longum, L. acidophilus, Streptococcus salivarius ssp. thrrmophilus의 혼합 균주가 가장 높은 값을ㄹ 나타내었다. 이러한 결과를 바탕으로 4% 쌀 첨가 요구르트의 제조에 사용되는 젖산균주는 B. longum, L. acidophilus, Streptococcus salivarius ssp. thermophilus의 혼합 균주가 가장 좋은 것으로 판단된다.
요구르트의 제조 시 기능성 성분을 함유한 첨가제로서 구기자, 구기엽 및 지골피를 기질로 하여 요구르트를 제조하여 젖산균주에 따른 발효특성을 시험하였고, 각 부위를 첨가한 요구르트의 cholestol 저하 효과 및 병원성 균주의 성장 억제 효과를 시험하였다. 상업용 starter를 사용한 모든 처리구에서 발효 후 pH가 4.06 이하로 나타나 발효 촉진 효과가 있었고, 산 생성은 S. salivarius ssp. thermophilus와 L. delbrueckii ssp. bulgaricus에서 높아 발효촉진 효과가 우수하였으며 젖산균수는 S. salivarius ssp. thermophilus와 L. delbrueckii ssp. bulgaricus를 이용한 구기자 extract 첨가구에서 9시간째 2.62${\times}$$10^9$ cfu/$m\ell$로서 최대 균수를 나타내었다. 유당분해율은 S. salivarius ssp. thermophilus와 L. dilbrueckii ssp. bulgaricus를 이용한 구기자, 구기엽, 지골피 extract 처리구에서 36.11%, 37.76% 및 32.70%를 나타내어 높았고, 유기산 생성은 S. salivarius ssp. thermophilus와 L. delbrueckii ssp. bulgaricus 균주를 stsrter로 사용한 요구르트의 경우에만 isobutylic acid가 34.39${\sim}$37.72 mM로 높은 유기산을 생성하였다. 점도는 L. acidophilus, B. longum과 S. salivarius ssp. thermophilus를 starter로 사용하였을 때 1,615${\sim}$2,030 cP로서 모든 첨가구에서 높은 점도를 나타내었고, 관능검사 결과 대조구가 3.27${\sim}$3.44인데 비하여 구기자와 구기엽 extractffm 첨가한 요구르트의 관능검사 결과는 1.77${\sim}$2.58로서 상당히 낮은 기호도를 나타내었다. 그러나 지골피 extract 첨가구에서 L. casei와 L. acidophilus. B. longum 및 S. salivarius ssp. thermophilus를 starter로 사용한 요구르트 기호도의 경우는 3.34${\sim}$3.77로 나타나 기호성이 좋았다. 구기자, 구기엽 및 지골피 extract 첨가에 의한 cholesterol 저하 효과는 인체 유래의 각 젖산균과 상업용 starter 균주를 이용한 모든 처리구에서 17.38${\sim}$32.08%의 콜레스테롤 저하 효과를 나타내었다. 그 중 L. acidophilus KCTC315.와 L. salivarius subsp. salivarius CBU27 젖산균은 25.75${\sim}$32.08%의 높은 콜레스테롤 저하 효과를 보였다. 구기자, 구기엽 및 지골피 extract 첨가 요구르트의 식중독 유발 살모넬라 균주에 대한 성장 억제 효과는 S. typhimurium M-15 균주에서 약간의 억제 효과를 보였고, 설사와 식중독을 유발하는 것으로 알려진 대장균 중 E. coli KCTC1021와 리스테리아증을 유발하는 L. monocytogenes에 대해서는 높은 성장 억제 효과를 보여 구기자, 구기엽, 지골피를 기질로 한 요구르트가 살모렐라, 대장균 및 리스테리아 유발 병원성 균주에 대한 탁월한 억제 효과가 있었다.
전통발효식품으로부터 L. monocytogenes ATCC 19114에 강한 항균활성을 보이는 균주를 분리하였다. 분리된 균주의 형태학적 및 생화학적 특성과 16S rRNA 염기서열 분석을 통해 Lactobacillus salivarius LCH1227으로 동정되었다. L. salivarius LCH1227이 분비하는 항균물질은 L. monocytogenes 뿐만 아니라 vancomycin-resistant Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Bacillus cereus, Lactobacillus fermentum 등과 같은 그람양성 세균에 대해 폭 넓은 항균 활성을 나타내었다. L. salivarius LCH1227의 생육에 따른 항균 활성을 측정한 결과, 생장정체기 초기에 최대 활성(300 AU/mL)을 나타내었고, 생장정체기 이후부터 활성이 점차 감소하였다. 항균물질의 활성은 pH 2-12 구간에서 비교적 안정하였으며, 열처리에 의해서도 활성이 소실되지 않아 열에 안정한 물질임을 알 수 있었다. L. salivarius LCH1227이 생산하는 항균물질은 단백질 분해효소 처리 후에 활성이 실활됨으로써 단백질성 물질인 것으로 추정되었으며, Tricine-SDS-PAGE 실험을 통하여 항균물질의 분자량은 약 5 kDa 정도임을 알 수 있었다.
Objective: Gut health improvements were monitored with respect to growth performance, diarrhea incidence, fecal bacterial population and intestinal morphology of suckling pigs orally supplemented with live Lactobacillus salivarius (L. salivarius) oral suspensions and challenged with $F4^+$ enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC). Methods: Two groups of newborn pigs from 18 multiparous sows were randomly designated as non-supplemented (control: n = 114 piglets) and L. salivarius supplemented groups (treatment: n = 87 piglets). Treatment pigs were orally administered with 2 mL of $10^9$ colony-forming unit (CFU)/mL L. salivarius on days 1 to 3, then they were orally administered with 5 mL of $10^9CFU/mL$ L. salivarius on days 4 to 10, while those in control group received an equal amount of phosphate buffered saline solution. On day 24 (2 weeks post supplementation), one pig per replicate of both groups was orally administered with $10^8CFU/mL$$F4^+$ ETEC, then they were euthanized on day 29 of experiment. Results: Results revealed that pigs in treatment group had a statistically significant increase in average daily gain, body weight and weight gain, and tended to lower diarrhea throughout the study. Numbers of Lactobacillus population in feces of treatment pigs were higher than control pigs, especially on day 10 of study. Numbers of total bacteria in intestinal contents of control pigs were also increased, but not Coliform and Lactobacillus populations. Histological examination revealed statistically significant improvements of villous height and villous/crypt ratio of duodenum, proximal jejunum and distal jejunum parts of treatment pigs compared with controls. Duodenal pH of treatment group was significantly decreased. Conclusion: Oral supplementation of live L. salivarius during the first 10 days of suckling pig promoted growth performance and gut health, reduced diarrhea incidence, increased fecal Lactobacillus populations and improved intestinal morphology.
Vulvovaginal candidiasis is a major urogenital infection in women. Lactobacilli are important in maintaining vaginal health. In the present study, the effect of heat adaptation at $47{\sim}52^{\circ}C$ prior to heat stress at $60^{\circ}C$ in improving the viability of Lactobacillus salivarius MG242 was examined. L. salivarius MG242 has antifungal effects against Candida albicans. Heat-adapted cells had a higher survival rate than non-adapted cells during the subsequent heat stress. When chloramphenicol was added during the adaptation process, heat tolerance was abolished, suggesting the involvement of de novo protein synthesis with the heat adaptation of L. salivarius MG242 strain. Exopolysaccharide quantification and scanning election microscopy did not reveal any appreciable changes during heat adaptation. The antifungal activity of L. salivarius MG242 against C. albicans was maintained during the heat adaptation. These results suggest that heat adaptation can be applied for the development of probiotic products using L. salivarius MG242 to improve its stress tolerance during processing.
Lactobacillus spp. are the bacteria most commonly used as probiotics and it has been proven that they inhibit pathogenic bacterial growth and improve skin repair in humans. This study was conducted to investigate the growth inhibitory effect of Lactobacillus on Staphylococcus pseudintermedius, the most commonly isolated pathogen in canine pyoderma, and whether Lactobacillus could inhibit the adhesion capability of S. pseudintermedius to canine corneocytes. For this study, L. salivarius and S. pseudintermedius were isolated from healthy beagle fecal samples and the skin surface of dogs with skin infection, respectively. S. pseudintermedius was co-cultured with L. salivarius to assess the inhibitory effect. For the adhesion assay, corneocytes were collected from healthy beagle ventral abdominal skin. Both bacterial species attached to corneocytes and were assessed in number. As a result, L. salivarius significantly inhibited the growth of S. pseudintermedius in the culture medium. Moreover, L. salivarius reduced attachment of S. pseudintermedius in the adhesion assay. These results suggest that L. salivarius has an inhibitory effect on S. pseudintermedius and may be effectively used in the topical therapy of canine skin infections.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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