Production of yeast diet has been carried out in batch fermenters under optimum culture conditions. The fermentation of Candida utilis on a $2\%$ complex medium resulted in 1.22 g/L/h productivity and $65\times10^8$ viable cells/ml, and the addition of $15{\mu}M$ zinc to the medium increased both the productivity and the number of viable cells just a little more. In the case of the fermentation of Kluyveromyces fragilis, the highest value of the biomass productivity, 1.94 g/L/h, was obtained on a $2.5\%$ fructose medium with $70\times10^8$ viable cells/ml, and $1\%$ peptone was found to be a growth factor in this fermentation. When $3.5\%$ NaCl was added to the given medium, both the biomass productivity and the number of viable cells decreased significantly in each fermentation, but this may be considered to preserve yeast diet long without osmotic lysis.
Kluyveromyces fragilis KCTC 7260 and Saccharomyces cerevisiae KCTC 7904, which both grew well in pear marc extract, were selected and their growth profiles and physiological functionalities were determined. Both of the selected yeasts established maximal growth by 20 hr of cultivation at $30^{\circ}C$ in pear marc extract. The cell-free extracts showed high antihypertensive angiotensin I-converting enzyme inhibitory activity of 68.9% and 52.1%, respectively. The extracts also displayed 9.2 U/mL and 12.0 U/mL of protease activity, respectively.
Yeast cells of a fusant strain constructed by protoplast fusion of Saccharomyces cerevisiae and Kluyveromyces frugilis were immobilized on calcium alginate beads. The increment of the ethanol tolerance of this strain to 8.0%, when compared with the parent K, fragilis, was confirmed. Based on the results from jar fermentation, a packed-bed reactor of theh immobilized yeast cells was operated. The optimal performance of the immobilized yeast reactor for ethanol production was achieved when supplying 10% lactose (suplemented 1.0% yeast extract) at a temperature of 30.deg.C. The maximal ethanol productivity was obtained as 13.3 g/I/hr at a dilution rate of $0.76 hr^{-1}$.
From the pSKH201 plasmid which had been previously cloned in our laboratory, a 3.0kbp insert DNA encoding the alkaline phosphatase of Kluyveromyces fragilis was cleaved with several restriction endonucleases and ligated int the appropriate sites of M13mp18/19 vectors and sequenced by Sanger's dideoxy chain termination method. The sequence contained a 1,638 bp open reading frame(ORP) whose similarities in nucleotide, when compared with those of Saccharomyces cerevisiae and Escherichia coli by GENETYX program, were found to be 61% and 46%, respectively. The deduced amino acid sequence consists of 546 amino acids and contains several homologous regions in the alkaline phosphatases of E. coli, S.cerevisiae and human placenta.
A gene coding for the $\beta$-galactosidase (lactase) of Kluyveromyces tragilis UCD 55-55 was isolated by complementation in Escherichia coli YMC9. From the plasmid library made from Sau3A-digested chromosomal DNA, one positive clone was selected. The cloned gene for $\beta$-galactosidase was on 7.3 kilobase pair DNA fragment, and a slightly low level of $\beta$-galactosidase enzyme activity was detecied in E. coli. It was also confirmed that the cloned gene comes from K. tragilis by DNA-DNA hybridization and immunochemical blotting experiments. In order to construct a new yeast strain having the metabolic ability for lactose, the cloned gene for K. tragilis $\beta$-galactosidase was inserted in yeast vector YEp24 and YRp17, and transformed into Saccharomyces cerevisiae YNN27 and Ml-2B. The yeast transformants showed the nearly the same $\beta$-galactosidase productivity as level of K. tragilis when uninduced, but these could not utilize lactose as a sole carbon source, presumably due to the lack of lactose transport system. Nevertheless, a slightly higher ethanol productivity was achieved by these transformants than S. cerevisiae or K. tragilis, in the medium containing glucose and lactose.
균체 재순환이 없는 연속 발효조에서 K.fragilis에 의한 돼지감자 착즙의 알콜발효시, 정상상태에서 주입 당농도와 희석속도가 에탄올 발효특성에 미치는 영향에 대하여 구명한 결과를 요약하면 다음과 같다. 즉, 주입 당농도가 낮고, 희석속도가 낮을 때는 기질제한성의 균체발효특성을 보였다. 그리고 희석속도가 증가할수록 에탄올 농도와 균체농도는 감소하였으나, 잔당농도는 증가하였다. 에탄올 생산성 및 균체유실율은 희석속도 0.36$hr^-1에서 최대값을 나타내었다. 에탄올 생산성과 균체유실율에 대한 희석속도 변화의 영향이 주입 당농도 변화의 영향보다 큰 것으로 추정되었다. 에탄올 생산성이 높고 동시에 당의 유실율이 낮은 최적조건은 희석속도 0.22$hr^-1, 주입 당농도85g/l 이었다. 이 조건하에서 에탄올 생산성은 5.9g/l-hr, 당유실율은 3.8g/l-hr, 에탄올 수율 0.39, 당이용율 0.8, 비 알콜생산성 1.6g/l-hr이었다.
식염농도 3로$15^{\circ}C$에서 발효시킨 물김치에서 젖산균과 효모의 균수변화를 측정한 결과 숙성기까지 효모의 수가 증가한 후 후기에 감소하는 것으로 나타났으며 숙성적기에 효모를 분리동정한 결과 Saccharomyuces sp.가 24주로 대부분을 차지하였으나 Kluyveromyces fragilis 3주, Torulopsis candida 2주도 발견되었다. 이 중에서 S.saitoanus Y17, S.capensis Y29, S.chevalieri Y13, K.fragilis Y2, T.candida Y9를 같은 김치에서 분리한 젖산균 Lactobaccillus plan tarum Lp2, Pediococcus pentosaceus P1, Leuconostoc mesentroides Lu5와 각각 혼합배양하여 효모와 생육에 미치는 영향을 조사한 결과 모두 생육이 억제되었으며, 이는 lacti acid나 H2O2에 의한 억제가 아닌 다른 물질에 의한 것으로 밝혀졌다. 이 세 종류의 젖산균에 의해 영향을 받는 정도는 효모의 종류에 따라 매우 큰 차이를 나타내었다.
Saccharomyces cerevisiae STV89와 Kluyveromyces fragilis CBS397의 에탄올 내성에 대한 산소와 불포화 지방산의 첨가 영향을 연구하기 위한 알콜발효를 수행하였다. 실험결과 통기에 의하여 세포성장과 에탄올 생성속도가 촉진되어으며, 세포와 에탄올 생성량도 크게 증가되었다. 특히 균주의 비교에서 cell의 최대 비성장 속도와 에탄올 생성 속도가 S.cerevisiae의 경우 1.7배와 2.3배 증가하였지만, K. fragilis인 경우 6.4배와 4.4배가 증가하여 K. FRAGILIS가 에탄올 생성 및 cellgrowth를 위하여 S. cerevisiae보다 산소가 더 필수적인 요인으로 작용한다. 또한 S. cerevisiae와 K. fragilis 모두 ergosterol, linoleic acid 및 oleic acid의 첨가에 의하여 cell growth와 에탄올 형성이 향상되었다. 따라서 산소와 불포화 지방산은 효모의 에탄올 내성 증가에 중요한 요인으로 작용함을 알 수 있었다.
대두유중에서 L, acidophilus와 K. fragilis를 단독발효시키는 것 보다 혼합배양 함으로써 젖산의 생성이 촉진되었는데 균간의 어떠한 상호작용에 의하여 산의 생산이 증가되었는가를 연구하였다. 대두유와 Soywhey를 사용하였을 때의 젖산 생성속도는 L. acidophilus 단독보다는 K. fragilis 와 혼합배양하는 것이 빨랐다. 이들 균을 단독 또는 혼합배양하여 경시적으로 발효 대두유중의 당 성분을 HPLC로 분석하였다. 그 결과 L. acidophilus가 발효하기 어려운 sucrosed raffinose, stachyose를 K. fragilis가 생산하는 효소에 의하여 젖산균이 발효할 수 있는 glucose, fructose로 분해되기 때문에 혼합배양 함으로써 젖산 발효가 촉진된다는 것을 알았다.
양식을 위한 먹이사료로서 가능성 있는 효모균주를 연구하였다. Kluyveromyces fragilis효모와 Candida utilis 효모의 최대 비증식 속도와 바이오매스 효율은 Saccharomyces cervisiae 효모에 비하여 굉장히 높은 값을 나타내었다. 따라서, 이 연구는 대량생산을 위하여, 플라스크 배양을 통한 이들 두 효모균들의 성장특성에 그 초점을 맞추었다. 5% 접종량을 가지고 실험한 결과, 가장 좋은 $\mu$$_{max}$ 와 OD$_{max}$ 값들은 K, fragilis는 2.5% fructose 배지에서, C. utilis는 2% YE배지에서 각각 얻었으며, 이 때의 이 값들은 K. fragilis는 0.73 hr$^{-1}$1 와 3.00을 C. uitilis는 0.59 hr$^{-1}$ 와 2.80으로 밝혀졌다. 또한, 아연과 염의 초기종도가 증가할수록 균성장에 있어서의 우도기는 증가하였으며, 접종량이 증가할수록 유도가는 감소하였다. 두 효모균은 3.5% 염농도에서 비교적 잘 자랄 수 있었으며, C. utilis 효모균만이 아연을 이용할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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