• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권3호
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• pp.305-308
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• 1990

Shuttle plasmid vector인 pHN114를 이용하여 Kluyveromyces fragilis의 3-isopropylmalate dehydrogenase 유전자를 cloning 하였다. 그 결과 Saccharomyces cerevisiae의 leu2변이와 E.coli의 leuB변이를 상보하는 두가지 clone 체 pJK104와 pJK106을 얻었다. Restriction mapping 결과 이들은 서로 반대방향으로 삽입되어 있었으며 expression activity는 pJK104가 높았다. pJK104에 삽입된 유전자를 BglII와 SalI으로 끊은 1.6kb fragment를 probe 로 하여 Southern Hybridization 한 결과 유전자의 유래가 Kluyveromyces fragilis 임을 확인하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제3권2호
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• pp.91-94
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• 1993

A 3-isopropylmalate dehydrogenase (3-IPMD) gene was cloned from Kluyveromyces fragilis. pJK104 could complement Escherichia coli leuB and Saccharomyces cerevisiae leu2 auxotrophs. The coding region was subcloned and the nucleotide sequence was determined. A 1.8 Kb EcoRI/SphI fragment of pJK104 subcloned in pUC18 could still complement the leuB mutation. An open reading frame of 1164 bp that corresponds to a polypeptide of 387 amino acids was found in the cloned fragment. The homology between the 3-isopropylmalate dehydrogenase of S. cerevisiae and that of K. fragilis was 68.13％ in nucleotides.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권2호
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• pp.131-137
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• 1995

The alkaline phosphatase (K-ALPase) gene of Kluyveromyces fragilis has been cloned (1) and determined its base sequences (2) previously in our laboratory. When the K-ALPase gene was expressed in Escherichia coli and Saccharomyces cerevisiae, it showed a constitutive activity in E. coli, and a derepressed activity in S. cerevisiae in phosphate-limited medium. Northem hybridization experiment was performed to elucidate the transcription level of the K-ALPase gene. Northern experiment showed that transcription level of K-ALPase gene in S. cerevisiae was higher in phosphate depletion, but it was higher in high phosphate medium than in phosphate limited medium in K. fragilis. The transcription initiation site of the K-ALPase gene was determined by primer extension analysis. It matched nucleotide position - 169 in relation to the putative trnslational start site.

• 한국균학회지
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• 제41권1호
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• pp.33-37
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• 2013

배 유과를 이용하여 새로운 고부가가치의 생리기능성 배 유과 시제품을 개발하고자 냉동배 유과를 해동하여 건조시킨 후 Saccharomyces cerevisiae, Kluyveromyces fragilis 및 Lactobacillus plantarum으로 혼합발효시켜 배 유과 발효 시제품을 제조한 다음 이들의 주요 생리기능성을 조사하였다. 배 유과 발효 시제품은 87.4%의 높은 항고혈압성 안지오텐신 전환효소 저해활성을 보였고 항산화 활성도 69.6%로 높았다. 또한, 냉동 배 유과를 $20^{\circ}C$에서 해동시키고 효모와 젖산균으로 혼합발효 시켜 제조한 배 유과 발효 시제품이 $40^{\circ}C$ 해동 후 S. cerevisiae나 Bacillus subtilis로 단독발효 시킨 시제품보다 항고혈압활성과 항산화활성 등이 더 높았다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제3권1호
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• pp.6-11
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• 1993

An autonomously replicating sequence (Kf-ARS1) of Kluyveromyces fragilis was cloned from the genomic library which was constructed using pHN134 as a cloning vector to make a new host-vector system for the production of heterologous protein from K. fragilis as a host. The cloning vector pHN134 was composed of $Km^r, Ap^r$ and multiple cloning site in LacZ . A clone carrying Kf-ARS1 was isolated and the recombinant plasmid was designated as pIKD102. The cloned fragment was 2.3 kb (EcoRI/EcoRI) in length. Subcloning experiment showed that the region for ARS activity was 1.5 kb (SalI/EcoRI) fragment. It was shown that the Kf-ARS1 was active in Saccharomyces cerevisiae and Kluyveromyces fragilis.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권4호
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• pp.287-292
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• 1988

두유를 L. acidophilus와 K. fragilis로 혼합발효시 균의 생육과 젖산발효에 미치는 아미노산의 영향을 알아보기 위하여 이 두균주가 어떠한 상호작용으로 두유 중의 유리아미노산들과 대두단백질을 이용하는지에 대하여 조사하였다. 두유를 L. acidophilus와 K. fragilis로 혼합발효시 K. fragilis는 두유중의 유리아미노산들을 이용하여 생육하나 부족한 것은 L. acidophilus에 의해 대두단백질이 가수분해되어 생성되는 여러 종류의 유리아미노산들 중 젖산균이 생육인자로 이용하지 않아 발효액에 축적되는 Leu., Phe., Lys., Arg., Glu., Asp., Ala. 등의 유리 아미노산들 특히 Leu., Phe., Lys.을 이용함으로써 K. fragilis의 생육이 촉진된다고 생각되었다. 이와 같은 두균의 아미노산 대사의 상호작용과 당대사의 상호작용(2)을 함께 고려할 경우 두유를 L. acidophilus와 K. fragilis로 혼합발효할 때 두균사이에는 공생관계 (symbiotic relationship)가 성립되었으며 이로 인하여 두유를 두균으로 혼합발효하는 것이 L. acidophilus만으로 단독발효하는 것보다 젖산생성량이 많고 젖산생성속도가 바르다는 것을 알 수 있었다.

• 한국수산과학회지
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• 제33권1호
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• pp.20-24
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• 2000

은어 자어 배합사료에 효모의 첨가효과를 조사하기 위해 K. fragilis, protoplasted K. fragilis, C. utilis, protoplasted C. utilis 및 맥주효모를 각각 $5{\%}씩$ 첨가한 6종류의 실험사료를 미립자 크럼블 형태로 제조하여 평균체중 l00 mg 전후의 자어를 대상으로 사육 실험하였다. 사료별 3반복으로 7주간 사육 실험한 후의 생존율은 protoplasted K. fragilis, C. utilis 및 protoplasted C. utilis 첨가구가 $93{\~}94{\%}$로 효모 무첨가구인 대조구의 $87{\%}$보다 유의하게 높은 경향이었으며 (P<0.05), K. fragilis 및 맥주효모 첨가구는 대조구와 유의한 차이를 보이지 않았다 (P>0.05). 증체율은 protoplasted K. fragilis 첨가구가 $149{\%}$로 대조구의 $78{\%}$보다 유의하게 높았고 (P<0.05), 그 외 실험구들과는 유의한 차이가 없었다 (P>0.05). 전어체의 단백질과 회분 함량은 모든 실험구간에 유의한 차이는 없었고 (P>0.05), 지질 함량은 K. fragilis와 맥주효모 첨가구들이 대조구보다 낮은 값을 보였다 (P<0.05). 전어체의 아미노산 조성중 Asp는 효모 첨가구들이 대조구보다 유의하게 높은 값을 보였으며 (P<0.05), 그 외 아미노산들은 실험구간에 유의한 차이가 없었다 (P>0.05). 이상의 결과로부터 C. utilis보다는 K. fragilis를 외벽 처리하여 첨가하는 것이 은어 자어의 성장과 어체 지질 성분을 더 개선시킬 수 있을 것으로 전망된다.

• 미생물학회지
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• 제22권1호
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• pp.49-56
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• 1984

Novozym 234에 의한 K. fragilis와 C. pseudotropicalis의 원형질체 형성과 재생에 관한 연구를 하였다. intact cell을 원형질체로 전환시키는데 정지기의 세포보다 대수기에 있는세포가 효과적이었으며 osmotic stabilizer로는 $(NH_4)_{2}SO_4$가 두 종 똑같이 원형질체 형성이나 재생에 있어서 적합했고 최적 효소농도는 K. Fragilis에서는 3mg/ml, C. pseudotropicalis에서는 1~3mg/ml이었다. 반응 후 관찰된 세포 중의 원형질체 형성 수율은 K. fragilis에서 약 95%, C. pseudotropicalis에서 약 100%였으나 원형질체의 재생은 Glusulase와 비교해 볼 때 매우 낮았다. 그러나 세포 이물질이 없는 원형질체를 얻는데는 Novozym 234가 적합한 것 같다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제1권3호
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• pp.151-156
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• 1991

In order to construct a yeast strain having high ethanol tolerance together with good lactose fermentation ability, the protoplast fusion using Saccharomyces cerevisiae STV 89 and Kluyveromyces fragilis CBS 397 was carried out. Auxotrophic mutants of K. fragilis were obtained as a selection marker by treatment of ethylmethane sulfonate. The best mutant for protoplast fusion was selected based on the capabilities of ${\beta}-galactosidase$ production and lactose fermentation. The protoplast fusion using polyethylene glycol and calcium chloride solution led to the fusion frequence of $3{\times}10^{-6}$ and a number of fusants were obtained. Among these fusants, a fusant F-3-19 showed the best results in terms of ethanol tolerance, ${\beta}-galactosidase$ activity and lactose fermentation. The performance of lactose fermentation and ethanol tolerance by this fusant were better than those of K. fragilis. Study on the ethanol tolerance having relation to fatty acid composition and intracellular ethanol concentration revealed that the fusant F-3-19 had a higher unsaturated fatty acids content and accumulated less amount of intracellular ethanol compared with a parent of K. fragilis.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제2권2호
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• pp.67-73
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• 1987

Kluyveromyces fragilis로부터 $\beta$-galactosidase의 생성조건과 조효소액의 성질 그리고 당 전이 반응에 의한 oligosaccharide 생성을 조사한 결과 다음과 같은 결과를 얻었다. \circled1 Peptone-Yeast extract 배지에 6% lactose를 첨가하였을 때 최대 효소생산을 보였다. \circled2 0.05 M potassium phosphate buffer (pH 7.0)에서 3% toluene를 첨가하여 37$^{\circ}C$ 5시간 배양하였을 때 K. fragilis로부터 효소가 최대로 추출되었다. \circled3 효소의 최적온도는 4$0^{\circ}C$이고 4$0^{\circ}C$ 이상의 열처리에서는 효소가 파괴되었으며, pH6-7에서는 상당히 안정하였다. \circled4 ONPG 기질로 사용하였을 때 Km 값은 2.5mM이었다. \circled5 당 전이 반응의 결과, 7개의 oligosaccharide가 생성되었다. 이상의 실험결과로 볼 때, 본 실험에 사용한 K. fragilis SKD 7001은 Beta-galactosidase의 생산을 위해서 이용 가치가 인정되었으며, 특히, 이 효소의 활성이 중성 pH에서 강하고 안정한 상태를 보이는 것은 시유나 원료우유의 lactose를 중성에서 해야 한다는 점을 고려할 때, 실용적 가치가 있다고 본다. 또, 이 효소의 작용과정에서 생성되는 oligosacchride는 장내 bifidus균의 생육을 촉진시키는 효과가 인정되고 있기 때문에 이용가치를 더욱 높여주는 것으로 생각된다.