Because of the cases of Japanese Encephalitis(J.E.) were reported every year in Korea. We, Dong-A Pharmaceutical Co., Ltd., produced J.E. virus vaccine, with lower price, since 1970 in order to prevent ourselves from being infected by the disease. And inoculated the J.E. virus vaccine for the children with a great success. We are going to report several questions which brought about in producing the J.E. virus vaccine by alcohol precipitation, protamine sulfate treatment method. The results obtained were as folows ; 1) In process treated with 40% alcohol, we used to ethanol made in Germany, but it was too expensive to use it. As the result which we had studied about it, we were satisfied with J.E. virus vaccine which produced with alcohol made in Korea, and then, we treated with accurate specific gravity of 40% ethanol for the precipitation of the virus. And also, we knew that it was the best method to be treated it for 3hrs, $13^{\circ}C$. 2) When we treated with protamine sulfate (0.025mg/ml), we acquired the highest potent titer, and suited into purpose for the nitrogen concentration. 3) The filtration of the purified J.E. virus vaccine, in case of millipore filter paper of large pore size was not suitable for the sterility. Therefore the pore size less than 0.8.$\mu$ (AA filter paper) in millipore filter paper was very suitable. But it seemed to be important subhects that the smaller was the pore size, the lower was the potent titer.
Japanese encephalitis (JE) is a common infection caused by the Japanese encephalitis virus in Southeast Asia, which is transmitted to humans through Culex mosquitoes. Magnetic resonance imaging (MRI) is used to diagnose JE, which is often characterized by the presence of bilateral symmetric thalamic involvement. Here, we report a rare case of JE characterized by leptomeningeal enhancement without thalamic involvement. This leptomeningeal enhancement disappeared with the treatment; however, new non-specific multifocal and bilateral high signal intensities in the cerebral white matter were found on follow-up MRI.
Three dimensional structures of envelope protein from Korean isolates and Nakayama-NIH strain of Japanese encephalitis virus (JEV) were deduced by a computer program (HyperChem 4.0 Chemplus 1.0) based on the data of the three dimentional structure of Tick-borne encephalitis virus. In the three dimensional structure of envelope protein, neutralizing epitope and T-helper cell recognition site of C-terminal region of Korean isolates were structually similar to those of Nakayama-NIH but the N-terminal region was not. Korean JE isolates were compared with Nakayama-NIH strain by using cross-neutralization antibody test. Neutralizing activities of Korean isolates derived from guinea pigs were higher than those of Nakayama-NIH strain against Korean isolates, although the polyclonal antibody titers of Nakayama-NlH showed 1:160 to 1:640 against Korean isolates. According to the results from three dimentional structures and cross-neutralization analyses, the antigenic difference between Korean JE isolates and Nakayama-NIH strain may be dependent on structural difference of envelope protein.
Since the report in 1946 on the first isolation of Japanese encephalitis virus in Korea, the disease is known to occur every year and has occasionally spread in epidemic proportion among human populations. Because of its public health importance, it was deemed highly desirable to gain specific information as to natural history of the disease in Korea if we are to accomplish our ultimate objective of controling the disease in Korea. There still remain, however, unknown factors as to the ecology of Japanese encephalitis virus in Korea. This paper presents the results of serologic study on Korean cattle, hog and horse by means of hemagglutination inhibition (H.I.) test. The serum specimens were collected from Korean cattle, hog and horse their estimated ages being 3 to 9 years, 6 to 24 months and 2 to 14 years respectively, by jugular puncture; in Seoul and Kyung-Ki are a from the first part of May to November last, 1968. The strain used was designated by M 5/596. The methods of H.I. test employed in this study were essentially simillar to those employed by Clark and Fred. The results obtained summarized as follows; 1. Of samples of cattle sera tested, 183 (98%) was found to be positive, H.I. antibodies showing the highest proportion, on September. The lowest proportion showed 81 (68%) of 117 samples, on June. 2. One hundred and ninety-five and 114 swine serum samples tested were all of positive in both on September and October respectively. The lowest proportion showed 92 (29%) of 314 on June too. 3. Ninety (99%) of 91 equine serum samples tested contained demonstrable H.I. antibodies the highest proportion, on August. The lowest proportion was 19 (27%) of 70 samples on June. 4. Implications of these findings in the ecology of Japanese encephalitis Seoul and Kyung-Ki area were discussed.
The characterization of the 5 Korean isolates (K96P10, K94P05, K91P55, K87P39, and K82P01) of Japanese encephalitis virus (JEV) was compared with JE virus prototype Nakayama-NIH (NKY-NIH) using prM/M and envelope gene sequences of the JEV genome and phylogenetic analysis. The antigenic analysis of these viruses were done by the cross-hamagglutination inhibition (HI) test using polyclonal antibodies against Korean isolates and NKY-NIH. The sequence homology of the Korean isolates and NKY-NIH ranged between 87.4 % - 95.6 % at the nucleotide level and between 98.2 % - 97.2 % at the amino acid level over the E nucleotides compared. Alignment of E protein amino acid sequences revealed that residue positions E89, E129, E221, E244, E327, E366, E459, and E477 characterized the Korean strains. According to phylogenetic analysis bases on the E nucleotide, there are at least 2 genetic types of JEV existing in Korea and Korean strains were distinct from NKY-NIH. However, the cross HI test results of all the Korean isolates were serologically no different from NKY-NIH strain.
Japanese encephalitis virus (JEV) envelope (E) protein holds great promise for use in the development of a recombinant vaccine. Purified recombinant E (rE) protein may be useful for numerous clinical applications; however, there are limitations in using the Escherichia coli expression system for producing high-quality rE protein. Therefore, in this study, the yeast expression system was used to generate the rE protein. For protein production using the yeast system, the full-length JEV E gene was cloned into Pichia pastoris. SDS-PAGE and immunoblotting analysis demonstrated that the rE protein had a molecular mass of 58 kDa and was glycosylated. The predicted size of the mature unmodified E protein is 53 kDa, suggesting that post-translational modifications resulted in the higher molecular mass. The rE protein was purified to greater than 95% purity using combined ammonium sulfate precipitation and a SP-Sepharose Fast Flow column. This purified rE protein was evaluated for immunogenicity and protective efficacy in mice. The survival rates of mice immunized with the rE protein were significantly increased over that of Hyphantria cunea nuclear polyhedrosis virus E protein (HcE). Our results indicate that the rE protein expressed in the P. pastoris expression system holds great promise for use in the development of a subunit vaccine against JEV.
Japanese encephalitis (JE) is an important zoonosis caused by the mosquito-transmitted JE virus (JEV), which is a causative agent of reproductive failure in pregnant sows. Detection of JEV antibodies in swine is performed by hemagglutination inhibition (HI), virus neutralization (VN), and the plaque reduction neutralization test (PRNT). The most stringent PRNT is the 90% endpoint PRNT ($PRNT_{90}$). These conventional assays are difficult to carry out in diagnostic laboratories with insufficient instruments or cell culture systems. An alternative assay that is easily conducted and time efficient is required. In this study, we improved the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (I-ELISA) with clarified antigen for the detection of JEV antibodies. The I-ELISA results obtained from 175 swine serum samples were compared with HI, VN, and $PRNT_{90}$ results. The sensitivity of I-ELISA was 91.8%, 95.0%, and 94.7% compared with HI, VN, and $PRNT_{90}$ results, respectively. The specificity of I-ELISA was 92.2%, 94.7%, and 94.7% compared with HI, VN, and $PRNT_{90}$ results, respectively. Moreover, the I-ELISA results were significantly correlated with the HI (r = 0.93), VN (r = 0.95), and $PRNT_{90}$ (r = 0.92) results. These results suggest that the improved I-ELISA is useful for serosurveillance of JEV in swine.
A total of453 wilci hats inhabiting in Korea were captured ancl .he IgG antibodies againstJapanese Encephalitis Virus(J1IV) were detected by the heniagglut:nation inhibition te5t. 35501' the 453 blood sera showecl positive reaction to JEV with titers of I0 up to 40. Positiverates of male and kniale hats were 70.0'%1 anel 78.1'k. rcspectivclv. Positive ratci accordingto area were 74.7%) in Chungnan~. 72.h'\ulcorner6 in Kangwon and 74.3'"; in C'hungbuk. the resultbof which indicated no dil'krencc in areii. Whereas positive ratus according to hats specie5were 87.5(% f i ~ rC i..cpc~rtilios upernns. fi~llowedb y 83 3'%, k)r Mpoii.\ i ~ ~ : t r u ~ i tci.i~lis~. ~75l.0. '\4 1 forRhitrolol~h.\ '||'&'||',rurn~uic,r~unal ncl 59.6'!41 for Minioprc,ru.s schrc~ibersii.I t was Ibund by incli rrctini~nunofluorosce~icae nd clectron microscope techniques that the virus particles 01. JEVcould infect the brain of a Korean wilcl bats and proliferatn ill the brain cells.he brain cells.
Japanese encephalitis virus (JEV) persistence was established and maintained in Vero cell culture for over 1 year. Eleven clones of plaque morphology mutant JEV, with large and small plaque sizes, were obtained from the cell culture supernatant. Genomic RNA replication efficiency of the mutants in naive Vero cell appeared to correspond to their different plaque sizes. No significant changes in envelop protein ORF or in non-coding regions at both ends of the RNA genome suggested that there could be an unidentified factor(s) playing role in JEV attenuation. Unlike to the replication of wild-type JEV, the mutants did not induce severe degree of cytopathic effect in Vero cells upon infection. While obvious decrease of Bcl-2 and its mRNA expression and sharp increase of p53 in naive Vero cells infected with either wild-type JEV or the large plaque-forming mutant, those changes were not observed with the small plaque-forming one. Together with these observation, internucleosomal DNA fragmentation and chromosomal DNA profile in the Vero cells infected with the mutants suggest that an overall changes in cytopathic effect in the plaque morphology mutants-infected cells should be primarily due to the reduced genomic RNA replication and the compromised degree of p53-independent apoptosis by the virus infection at least in part.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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