• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제37권2호
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• pp.85-92
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• 1999

To determine the pathogenicity of Acanthamoeba spp. isolated in Korea and to develop a isoenzymatic maker, the mortality rate of infected mice, in vitro cytotoxicity against target cells and isoenzyme band pattern were observed. Five isolates of Acanthamoeba spp. (YM-2, YM-3, YM-4, YM-5 and YM-7) were used in this study as well as three reference Acanthamoeba spp. (A. culbertsoni, A. hatchetti, and A. royreba). According to the mortality rate of infected mice, Korean isolated could be categorized into three groups: high virulent (YM-4), low virulent (YM-2, YM-5, YM-7) and the nonpathogenic group (YM-4), In addition, the virulence of Acanthamoeba spp. was enhanced by brain passage in mice. In the cytotoxicity assay against chinese hamster ovary cells, especially, the cytotoxicity of brain-passaged amoebae was relatively higher than the long-term cultivated ones. The zymodeme patterns of glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD), malate dehydrogenase (MDH), hexokinase (HK), glutamate oxaloacetate transaminase (GOT) and malic enzyme (ME)of Acanthamoeba spp. were different among each isolate, and also between long-term cultrued amoebae and brain passaged ones. In spites of the polymorphic zymodemes, a slow band of G6PD and K, and an intermediate band of MDH were only observed in pathogenic Acanthamoeba spp., which should be used as isoenzymatic makers.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제6권3호
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• pp.171-179
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• 2004

Hormonal requirements inducing different regeneration pathways with particular emphasis on somatic embryo-genesis in Alhagi graecorum were studied. While combination of 0.5 $\mu{M}$ 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), 2.5 $\mu{M}$ 6-benzylaminopurine (BAP) and 5 $\mu{M}$ 1-naphthaleneacetic acid (NAA) in MS medium induced callus formation and callus maintenance from internodal explants, each alone or in combination with other induced distinct regeneration pathway. Adventitious bud formation was induced on MS medium supplemented with 2.5 $\mu{M}$ BAP. It was improved when 2.5 $\mu{M}$ BAP was used in combination with 5 $\mu{M}$ NAA. MS medium containing 0.5 $\mu{M}$ 2,4-D or 5 $\mu{M}$ NAA induced the formation of abnormal direct somatic embryos. While increase of 2,4-D concentration (1.125-9) resulted in the formation of viable embryogenic mass, increase of NAA did not change its effect. NAA should be used in combination with 2,4-D even at low concentration (0.5 $\mu{M}$) to form embryogenic mass. In A. gaecorum, the role of 2,4-D as trigger of somatic embryogenesis and BAP as trigger of adventitious bud formation was deduced, but for maximum yield certain auxin-cytokinin ratio should be applied. Embryogenic masses characterized by high water content, low peroxidase activity, and low number of peroxidase and glutamate oxaloacetate transaminase bands in comparison with calli obtained under conditions stimulating adventitious bud formation. The resulted differential gene expression, which could be detected by native-PAGE patterns, could be used as marker for organogenic pathway in A. graecorum.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제28권10호
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• pp.1196-1202
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• 2005

Omeprazole (OMP) is a proton pump inhibitor used as an oral treatment for acid-related gastrointestinal disorders. In the liver, it is primarily metabolized by cytochrome P-450 (CYP450) isoenzymes such as CYP2C19 and CYP3A4. 5-Hyroxyomeprazole (5-OHOMP) and omeprazole sulfone (OMP-SFN) are the two major metabolites of OMP in human. Cimetidine (CMT) inhibits the breakdown of drugs metabolized by CYP450 and reduces, the clearance of coad-ministered drug resulted from both the CMT binding to CYP450 and the decreased hepatic blood flow due to CMT. Phenobarbital (PB) induces drug metabolism in laboratory animals and human. PB induction mainly involves mammalian CYP forms in gene families 2B and 3A. PB has been widely used as a prototype inducer for biochemical investigations of drug metabolism and the enzymes catalyzing this metabolism, as well as for genetic, pharmacological, and toxicological investigations. In order to investigate the influence of CMT and PB on the metabolite kinetics of OMP, we intravenously administered OMP (30 mg/kg) to rats intraperitoneally pretreated with normal saline (5 mL/kg), CMT (100 mg/kg) or PB (75 mg/kg) once a day for four days, and compared the pharmacokinetic parameters of OMP. The systemic clearance ($CL_{t}$) of OMP was significantly (p<0.05) decreased in CMT-pretreated rats and significantly (p<0.05) increased in PB-pretreated rats. These results indicate that CMT inhibits the OMP metabolism due to both decreased hepatic blood flow and inhibited enzyme activity of CYP2C19 and 3A4 and that PB increases the OMP metabolism due to stimulation of the liver blood flow and/or bile flow, due not to induction of the enzyme activity of CYP3A4.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제24권4호
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• pp.545-555
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• 2014

It has been previously demonstrated that laccases exhibit great potential for use in several industrial and environmental applications. In this paper, two laccase isoenzyme genes, lccB and lccC, were cloned and expressed in Pichia pastoris GS115. The sequence analysis indicated that the lccB and lccC genes consisted of 1,563 and 1,584 bp, and their open reading frames encoded 520 and 527 amino acids, respectively. They had 72.7% degree of identity in nucleotides and 86.7% in amino acids. The expression levels of LccB and LccC were up to 32,479 and 34,231 U/l, respectively. The recombinant laccases were purified by ultrafiltration and $(NH_4)_2SO_4$ precipitation, showing a single band on SDS-PAGE, which had a molecular mass of 58 kDa. The optimal pH and temperature for LccB were 2.0 and $55^{\circ}C$ with 2,2'-azinobis-[ 3-ethylbenzthiazolinesulfonic acid (ABTS) as a substrate, whereas LccC exhibited optimal pH and temperature at 3.0 and $60^{\circ}C$. The apparent kinetic parameters of LccB were 0.43 mM for ABTS with a $V_{max}$ value of 51.28 U/mg, and the Km and $V_{max}$ values for LccC were 0.29 mM and 62.89 U/mg. The recombinant laccases were able to decolorize five types of dyes. Acid Violet 43 (100 g/ml) was completely decolorized by LccB or LccC (2 U/ml), and the decolorization of Reactive Blue KN-R (100 g/ml) was 91.6% by LccC (2 U/ml). Thus, the study characterizes useful laccase isoenzymes from T. versicolor that have the capability of being incorporated into the treatment of similar azo and anthraquinone dyes from dyeing industries.

• 한국식품영양과학회지
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• 제19권6호
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• pp.596-604
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• 1990

Polygalacturonase의 활성은 미숙감과실에서 나타나지 않았으나 완숙감과 연시에서 각각 55.01. 206.70unit/100g-fr. wt.로 연시에서 급격히 증가하였다. 연시에서 추출한 polygalacturonase의 isoenzyme은 2종이었고, 분자량은 다같이 55,000 dal-ton이었다. Polygalacturonase isoenzyme의 특성을 조사한 결과, polygalacturonase I의 Vmax는 0.195$\mu$ mole reducing-sugar/$m\ell$/30min., Km값은 3.50mg/$m\ell$이었고, 최적온도 4$0^{\circ}C$, 최적 pH 3.5이었으며, 열처리시 6$0^{\circ}C$까지 안정하였다. Polygalacturonase II 의 Vmax는 0.11$\mu$mole reducing-sugar /$m\ell$/30min., Km값은 2.50mg/$m\ell$이었고, 최적 온도와 pH는 35$^{\circ}C$와 4.0이었으며. 4$0^{\circ}C$까지 안정하였다. Polygalacturonase I 과 II는 K+, Cu++, Zn++, SDS, EDTA에 의해서 활성이 저해되었고 Ca++ 의해 다소 촉진되었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제42권3호
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• pp.93-119
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• 2004

Acanthamoeba and Naegleria are widely distributed in fresh water, soil and dust throughout the world, and cause meningoencephalitis or keratoconjunctivitis in humans and other mammals. Korean isolates, namely, Naegleria sp. YM-1 and Acanthamoeba sp. YM-2, YM-3, YM-4, YM-5, YM-6 and YM-7, were collected from sewage, water puddles, a storage reservoir, the gills of a fresh water fish, and by corneal washing. These isolates were categorized into three groups based on the mortalities of infected mice namely, highly virulent (YM-4), moderately virulent (YM-2, YM-5 and YM-7) and nonpathogenic (YM-3). In addition, a new species of Acanthamoeba was isolated from a freshwater fish in Korea and tentatively named Korean isolate YM-4. The morphologic characters of its cysts were similar to those of A. culbertsoni and A. royreba, which were previously designated as Acanthamoeba group III. Based on experimentally infected mouse mortality, Acanthamoeba YM-4 was highly virulent. The isoenzymes profile of Acanthamoeba YM-4 was similar to that of A. royreba. Moreover, an anti-Acanthamoeba YM-4 monoclonal anti-body reacted only with Acanthamoeba YM-4, and not with A. culbertsoni. Random amplified polymorphic DNA marker analysis and RFLP analysis of mitochondrial DNA and of a 188 small subunit ribosomal RNA, placed Acanthamoeba YM-4 in a separate cluster based on phylogenic distances. Thus Acanthamoeba YM-4 was identified as a new species, and assigned Acanthamoeba sohi. Up to the year 2002 in Korea, two clinical cases were found to be infected with Acanthamoeba spp. These patients died of meningoencephalitis. In addition, one case of Acanthamoeba pneumonia with an immunodeficient status was reported and Acanthamoeba was detected in several cases of chronic relapsing corneal ulcer, chronic conjunctivitis, and keratitis.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제45권2호
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• pp.388-396
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• 1998

연구배경: 흉수의 원인을 규명하는 방법으로는 임상소견, 흉수 분석, 그리고 흉막생검 등이 있다. 그러나 이와 같은 적극적인 검사에도 불구하고 약 20%의 환자에서 흉수의 원인을 모르는 것으로 알려져 있다. 결핵성 흉막염은 우리나라에서 가장 흔히 보는 흉막질환이지만 흉수에서 결핵균 양성율은 20-30%에 불과하고 흉막생검 양성율도 50%를 넘지 않아 감별진단이 어려운 경우를 임상에서 종종 경험하게 된다. 본 연구에서는 흉수의 감별진단에 있어 흉수에서의 ADA(adenosine deaminase) 및 동종효소의 활성도 측정의 유용성을 평가하고자 하였다. 방 법: 1996년 1월 부터 6월까지 단국대병원 내과에 흉수로 입원한 54명의 환자들의 흉수와 혈청에 대해 ADA 및 동종효소의 활성도를 측정하였다. 흉수의 원인으로는 결핵성 흉수가 25명, 부폐렴성 흉수가 10명, 악성 흉수가 14명, 여출성 흉수가 5명이었으며, 이들 중 소방형 흉수를 보인 경우는 결핵성 흉수가 5명, 부폐렴성 흉수가 6명이었다. 총 ADA 활성도와 동종효소 활성도 측정은 spectrophotometry로 시행하였으며, ADA2 동종효소의 활성도 측정은 ADAl의 강력한 억제제인 EHNA(erythro-9-(2-hydroxy-3-nonyl) adenine)을 이용하여 측정하였다. 결 과: 결핵성 흉수에서의 총ADA 활성도는 악성 흉수보다 높았으나 (p<0.l), 결핵성 흉수와 부폐렴성 흉수사이에는 유의한 차이가 없었다(결핵성 흉수 : $148.9{\pm}89.9IU/L$, 부폐렴성 흉수 : $129.0{\pm}119.4IU/L$, 악성흉수 : $60.7{\pm}17.8%$). 흉수에서 총 ADA에 대한 ADA2 동종효소의 활성도의 비 (ADA2%)는 결핵성 흉수에서 부폐렴성 흉수에 비해 유의하게 놓았으나(p<0.05), 결핵성 흉수와 악성 흉수 사이에는 유의한 차이가 없었다(결핵성 흉수: $57.2{\pm}10.7%$, 부폐렴성 흉수 : $35.9{\pm}17.8%$, 악성 흉수 : $60.7{\pm}17.8%$). 소방형 흉수의 경우 총 ADA 활성도는 결핵성흉수와 부폐렴성 흉수 사이에 유의한 차이가 없었으나(결핵성 흉수 : $157.8{\pm}100.8$ IU/L, 부폐렴성 흉수 : $164.3{\pm}132.3$ IU/L), ADA2% 는 결핵성 흉수에서 부폐렴성 흉수보다 유의하게 높았다(p<0.005)(결핵성 흉수 : $53.3{\pm}3.9%$, 부폐렴성 흉수 : $27.8{\pm}7.9%$). 결 론: 흉수에서 ADA동종효소의 측정은 결핵성 흉수와 부폐렴성 흉수의 감별진단에 유용하며 특히 소방형 흉수의 경우와 같이 임상적으로 강별이 용이치 않은 경우에 더욱 유용할 것으로 생각된다

• 식물조직배양학회지
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• 제24권1호
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• pp.57-61
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• 1997

Superoxide dismutase (SOD) 고생산세포주로 선발된 토마토(Lycopersicun esculentum) 배양세포를 사용하여 현탁배양에 따른 SOD 활성과 isoenzyme변화를 조사하고 토마토 식물체의 것과 비교하였다. 현탁배양은 세포생중량 2 g을 1 mg/L 2,4-D, 30 g/L sucrose를 함유한 MS 배지 50 mL과 함께 mL flask에서 $25^{\circ}C$암상태로 배양(100 rpm)하였다. 세포생장은 계대배양후 20일에 최고점에 도달한 후, 급격히 감소하며 배양 후 23일부터 세포가 검게 변하였다. 세포 단위무게당 SOD활성(unit/g dry cell wt)은 배양 후 23일부터 증가하여 28일째에 최고활성(52,400 unit)을 나타낸 후 급격히 감소하였다. 세포 밖으로 분비되는 extracellular SOD활성은 배양 후 25일에 최고치(27,800 unit/so mL medium)를 나타낸 후 감소하였다. Flask 전체의 SOD활성은 배양 후 25일에 최대치(35,700 unit)를 나타내었으며 extracellular SOD 활성이 약 75%을 차지하였다. 토마토 배양세포에는 4개의 SOD isoenzyme이 존재하며, isoenzyme의 패턴변화는 세포생장에 따른 효소활성의 변화와 일치하였다. 토마토 식물체는 배양세포에 없는 CuZnSOD가 존재하며 배양세포와 식물체 조직사이에는 서로 다른 isoenzyme 패턴이 존재함을 알 수 있었다.

• Journal of Chest Surgery
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• 제31권3호
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• pp.291-297
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• 1998

예전에는 그리 흔하지 않았던 흉골 골절이 자동차 사고의 증가와 비례해서 그 빈도가 증가 추세에 있다. 흉골 골절을 유발할 정도의 과도한 충격이나 골절로 인한 골편부는 그 위치가 종격동이나 흉강안의 기관들 근처에서 발생하기 때문에 이러한 기관이 흉골 골절로 손상을 받지 않았는지 잘 평가하는 것은 치료하는 데 있어 매우 중요하다. 본 연구는 1993년 3월부터 1997년 2월까지 4년간 서울 위생병원 흉부외과에서 치료한 72명의 흉골 골절 환자를 대상으로 이루어졌다. 흉부 손상 중 흉골 골절의 빈도는 12.2%였고 환자의 평균연령은 43.2세였다. 자동차 사고(84%)와 흉골 체부 골절(95.8%)이 가장 흔한 골절 요인과 위치였고 골절 형태는 골단부 이탈(displacement)이나 교차(overriding)없이 골절만인 경우가 51명(70.8%)으로 가장 많았고 골단부의 이탈은 전방(anterior, 19.4%)이 후방(posterior, 5.6%)보\ulcorner 많았다. 흉부 좌상 환자(LDH:13%, CPK:14%, CK-MB:12.2%, CK-MB>6% of CPK:5.3%)보다 흉골 골절 환자(LDH:56.8%, CPK:66.6%, CK-MB:43.1%, CK-MB>6% of CPK:25.4%)와 흉골 골단부 이탈로 수술 받아야 했던 환자(LDH:76%, CPK:95%, CK-MB:38%, CK-MB>65% of CPK:33%)에서 심동위효소 증가의 빈도는 컸고, 심동위효소의 평균 수치도 높았다. 그러나 증가된 심동위효소의 수치가 정상화되는데 소요되는 시간은 흉부 좌상 환자와 흉골 골절 환자 사이에 별 차이가 없었다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제52권4호
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• pp.157-162
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• 2009

한천분해세균 SC-22균을 대전 대청댐부근의 담수에서 분리하였다. 생화학적 분석 및 16S rRNA 염기서열 분석을 통한 계통학적 분류를 통해 SC-22는 Cellvibrio mixtus로 동정되었다. 분리균의 생육 및 agarase 효소 생성능을 검토한 결과, SC-22는 탄소원으로 0.2% agar를 첨가한 배지에서 배양 36시간에 최대 생육을, 배양 48시간에 58.5 units/mL의 최대 효소활성을 나타내었다. 분리균은 세포외 및 세포내 agarase를 생성하였으며, zymogram 실험에 의해 P1, P2 및 P3의 isoenzyme을 분비하는 것으로 확인 되었다. 배양여액으로부터 겔여과법과 이온교환수지법을 단계적으로 이용하여 SC-22 균주로부터 SDS-PAGE에 의해 25 kDa의 효소를 정제하였으며, 정제효소는 zymogram에서 확인된 주 단백질인 P2(29 kDa)과 동일한 단백질임이 확인되었다. 또한 정제한 agarase의 효소학적 성질을 검토한 결과, 효소의 최적 pH와 최적온도는 pH 7.0과 $50^{\circ}C$이었으며, 금속이온 효과의 경우 1 mM 농도의 수준에서도 $Fe^{2+}$, $Na^+$, $Ca^{2+}$ 이온 등은 정제효소의 활성을 10-20% 증가시킨 반면 $Hg^{2+}$, $Mn^{2+}$ 및 $Cu^{2+}$ 이온들은 효소 활성을 크게 저해하였다. 또한 TLC 분석을 통해 정제효소는 한천 분해 올리고당으로 주로 단당류와 이당류를 생성하므로 $\beta$-agarase의 작용특성을 보였다. 기질특이성 실험에서는 정제효소는 agar와 agarose만을 이용 하였고 유사 해조 다당류인 alginate는 물론 다른 다당류를 분해하지 못하였다.