The growth and cultural characteristics of Bacillus sp. SH-8 and SH-8M were investigated at various pH conditions. Bacillus sp. SH-8 showed normal growth pattern above pH 9.0. However, with the pH adjusted below 7.7, 0.$D_{550}$ decreased rapidly with concomitant reduction in viable cell numbers. In contrast, Bacillus sp. SH-8M demonstrated growth capability at pH 7.7, but with slightly reduced growth rate at pH 6.9. Similar results were obtained when those two strains were cultivated on the solid medium. Both of them showed short rod shapes at pH 10.2. However, at pH 7.7 only Bacillus sp. SH-8 was observed to have elongated rod shape. Extracellular pH of both the strains, when cultured at initial pH of 10.2, reached to 9.0 after the incubation of 28 hours. At the initial pH of 9.0 and 9.6, the extracellular pH was reduced at the beginning of cultivation, but elevated after 12 hours. When cultured at initial pH of 6.9 and 7.7, extracelluar pH of Bacillus sp. SH-8M increased to 8.0 and 8.7, respectively, while that of Bacillus sp. SH8 remained constant pH 7.0. The highest sporulation rate of Bacillus sp. SH-8 and SH-8M was obtained at the initial pH of 10.2 and after the incubation of 3 days with the sporulation rate of 95% and 85%, respectively.
This study evaluated the effects of culture conditions, including carbon and nitrogen sources, L-monosodium glutamate (MSG), and initial pH, on gamma-aminobutyric acid (GABA) production by Lactobacillus brevis HYE1 isolated from kimchi, a Korean traditional fermented food. L. brevis HYE1 was screened by the production analysis of GABA and genetic analysis of the glutamate decarboxylase gene, resulting in 14.64 mM GABA after 48 h of cultivation in MRS medium containing 1% (w/v) MSG. In order to increase GABA production by L. brevis HYE1, the effects of carbon and nitrogen sources on GABA production were preliminarily investigated via one-factor-at-a-time optimization strategy. As the results, 2% maltose and 3% tryptone were determined to produce 17.93 mM GABA in modified MRS medium with 1% (w/v) MSG. In addition, the optimal MSG concentration and initial pH were determined to be 1% and 5.0, respectively, resulting in production of 18.97 mM GABA. Thereafter, response surface methodology (RSM) was applied to determine the optimal conditions of the above four factors. The results indicate that pH was the most significant factor for GABA production. The optimal culture conditions for maximum GABA production were also determined to be 2.14% (w/v) maltose, 4.01% (w/v) tryptone, 2.38% (w/v) MSG, and an initial pH of 4.74. In these conditions, GABA production by L. brevis HYE1 was predicted to be 21.44 mM using the RSM model. The experiment was performed under these optimized conditions, resulting in GABA production of 18.76 mM. These results show that the predicted and experimental values of GABA production are in good agreement.
Microorganisms capable of degrading trlchloroethylene(TCEI using phenol as a induction substrate were isolated from industrial effluents and soil. The strain MS-64K which had the highest blodegradablllty was identified as the genus Micrococcus. The optimal conditions of medium for the growth and blodegadatlon of trlchloroethylene were observed as follows; the initial pH 7.0, trlchloroethylene 1, 000ppm as the carbon source, 0.2% ${(NH_4)}_2SO_4$, as the nitrogen source. respectively. Lag period and degradation time on optimal medium were shorter than those on Isolation medium. Growth on the optimal medium was Increased. Addition of 0.1% Triton X-100 Increased the growth rate of Micrococcus sp. MS-64K, but degradation was equal to optimal medium. Trlchloroethylene degradation by Micrococcus sp. MS-64K was shown to fit logarithmic model when the compound was added at initial concentration of 1, 000ppm.
Lactic acid fermentations were conducted using water hyacinth. It is known that the pretreatment and enzyme hydrolysis process optimize the potential of water hyacinth. Lactic acid produced by using lactic acid bacteria. All cells were grown at $37^{\circ}C$ and initial pH 5.5. Lactic acid production was measured by HPLC. All Lactobacillus strains could produce lactic acid from pretreated water hyacinth. The highest lactic acid was achieved when lactic acid fermentation was carried out by L. delbrueckii for D-form and L. helveticus for L-form lactic acid production. The lactic acid concentration was 10.70 g/L by L. delbrueckii and it converted glucose in the medium to lactic acid, almost perfectly. Lactic acid production became higher when fermentation was carried out at a controlled pH 5.5. Lactic acid yield and productivity were 0.52 g/g and 0.19 g/L/h for L. helveticus, while L. delbrueckii was 0.64 g/g and 0.27 g/L/h. This study showed that water hyacinth medium could be alternative medium which can replace the complex and expensive medium for growing Lactobacillus strains in production of lactic acid.
Asp. usumii IAM 2185 was selected as a strain producing the powerful raw starch digesting glucoamylase. The optimum initial pH, the optimum temperature and the optimum cultural time for the enzyme production on wheat bran medium were pH 6-8,25-$30^{\circ}C$ and 72 hrs, respectively. The addition of ammonium nitrate and albumin on wheat bran medium, respectively, increase slightly the enzyme production. The enzyme was purified by ammonium sulfate fractionation, CM-cellulose and DEAE-cellulose column chromatography. The specific activity of the purified enzyme was 34.3 U/mg protein and the yield of enzyme activity was 10.3%. The purified enzyme showed a single band on polyacrylamide disc gel electrophoresis and its molecular weight was estimated to be 67,000 by SDS polyacrylamide disc gel electrophoresis. The isoelectric point for the purified enzyme was pR 3.7. The optimum temperature and optimum pH were $60^{\circ}C$and pH 3.0 and the purified enzyme was stable in the pH range of 1.0-11.0. The purified enzyme was stable below $50^{\circ}C$ and its thermostability was greatly increased by the addition of $Ca^{2+}$. The purified enzyme showed a high hydrolysis rate on various raw starches such as corn, rice, yam, arrow root, sweet potato and glutinous rice.
The rising demand for carotenoids can be met by microbial biosynthesis as a promising alternative to chemical synthesis and plant extraction. Several species of lactic acid bacteria (LAB) specifically produce C30 carotenoids and offer the added probiotic benefit of improved gut health and protection against chronic conditions. In this study, the recently characterized Lactiplantibacillus plantarum subsp. plantarum KCCP11226T produced the rare C30 carotenoid, 4,4'-diaponeurosporene, and its yield was optimized for industrial production. The one-factor-at-a-time (OFAT) method was used to screen carbon and nitrogen sources, while the abiotic stresses of temperature, pH, and salinity, were evaluated for their effects on 4,4'-diaponeurosporene production. Lactose and beef extract were ideal for optimal carotenoid production at 25℃ incubation in pH 7.0 medium with no salt. The main factors influencing 4,4'-diaponeurosporene yields, namely lactose level, beef extract concentration and initial pH, were enhanced using the Box-Behnken design under response surface methodology (RSM). Compared to commercial MRS medium, there was a 3.3-fold increase in carotenoid production in the optimized conditions of 15% lactose, 8.3% beef extract and initial pH of 6.9, producing a 4,4'-diaponeurosporene concentration of 0.033 A470/ml. To substantiate upscaling for industrial application, the optimal aeration rate in a 5 L fermentor was 0.3 vvm. This resulted in a further 3.8-fold increase in 4,4'-diaponeurosporene production, with a concentration of 0.042 A470/ml, compared to the flask-scale cultivation in commercial MRS medium. The present work confirms the optimization and scale-up feasibility of enhanced 4,4'-diaponeurosporene production by L. plantarum subsp. plantarum KCCP11226T.
As a way to determine the optimal culture conditions for the production of ${\gamma}$-linolenic acid by Mucor sp. KCTC 8405P, the influence of different carbon and nitrogen sources, initial pH, and C/N ratio of medium was investigated. Glucose was found to be the best carbon source in terms of lipid content and ${\gamma}$-linolenic acid yield. Ammonium sulfate and organic nitrogen sources such as urea and peptone resulted in relatively increased lipid and ${\gamma}$-linolenic acid production. The highest accumulation of lipid was obtained at a C/N ratio of 56.6 using glucose and (NH$_4$)$_2$SO$_4$ as carbon and nitrogen source, respectively. It was found that the lipid content increased significantly with increasing initial pH of medium up to pH 9.0. The influence of mixed carbon source on the ${\gamma}$-linolenic acid yield was also investigated. High accumulation of lipids, 315 mg/100 ml medium, and 13-14% of ${\gamma}$-linolenic acid content in the cellular lipid were obtained in a shaking culture containing 3% of glucose and 2% sodium acetate as carbon source and 0.1% of (NH$_4$)$_2$SO$_4$ as nitrogen source at pH 8.0.
The effects of medium pH and culture temperature on the expression and secretion of inulinase and invertase were investigated with recombinant Saccharomyces cerevisiae cells. These cells were obtained by transformation of 2$\mu$-based plasmids pYI10 and pYS10 which contain Kluyveromyces marxianus inulinase gene (INU1A) and S. cerevisiae invertase gene (SUC2), respectively, in the downstream of GAL1 promoter. The expression level and localization of inulinase and invertase were not affected significantly by the initial medium pH: secretion efficiencies of inulinase and invertase into the medium were about 90% and 60%, respectively, in the pH ranges of 4.0 to 6.5. However, the expression and secretion of both enzymes were strongly dependent on the culture temperature. The highest expression (7.7 units/mL) and secretion (6.7 units/mL) of inulinase were observed at 28$\circ$C and 30$\circ$C. As a consequence of decreased localization of inulinase in the periplasmic space, the secretion efficiency increased from 68% at 20$\circ$C, to 95% at 35$\circ$C,. The total expression level and secretion efficiency of invertase increased from 19 units/mL and 55% at 20$\circ$C to 25 units/mL and 68% at 35$\circ$C, respectively. Irrespective of the culture temperature, the invertase activity in the cellular fraction (periplasmic space and cytoplasmic fractions) was kept constant at around 33-45%.
Basic informations for direct somatic embryo formation in Rehmannja glutinosa Lib. were obtained in 500ml erlenmyer flask. The ratio of ammonium to nitrate nitrogen of 825(mg/l) : 1900(mg/l) was proper condition for somatic embryo formation from stem and petiole explants and 3% sucrose was the most effective carbon source. Full strength MS medium with 2mg/l BA was better than LS medium for somatic embryogenesis. The initial pH 5.7 of medium(full strength MS with 2.0mg/l BA and 0.1mg/l NAA) was good for embryo production. Potassium ion was taken up rapidly within 2 weeks. while $Ca^{++}$ and $Mg^{++}$ ion contents were almost constant during culture period. Sucrose hydrolysis occurred throughout the culture, while glucose and fructose were absorbed simultaneously from the third week of culture.
The bacteriocin-producing lactic acid bacteria Enterococcus faecium DB1 was isolated from Korean traditional gajami sikhae. Culture conditions were optimized by response surface methodology (RSM) to maximize bacteriocin DB1 production. E. faecium DB1 displayed the highest bacteriocin activity when grown in modified MRS medium containing sucrose, rather than glucose, as a carbon source. The effects of temperature, initial pH, and sucrose concentration were tested to determine the optimum conditions for maximum bacteriocin production by E. faecium DB1. A central composite design was used to control the three variables in the experiment. RSM revealed that the optimum values for bacteriocin production were 27.66 g/L sucrose, temperature of $34.37^{\circ}C$, and an initial pH of 6.54. A 2.08-fold increase in bacteriocin production was obtained with sucrose-containing MRS medium compared to production in standard MRS medium.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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