Blood plasma proteins dissolved in isotonic phosphate-buffered saline were found to be adsorbed to red blood cell ghosts suspended in the solution. This was evidenced by concentration reduction of the plasma proteins in the bulk solution. For initial concentration of 0.1mg/mL immuno globulin, concentration reduction increased from 14% to 45% as the volume fraction of red blood cell ghosts in the solution increased from 5% to 45%. For initial concentration of 0.075mg/mL albumin, the concentration reduction increased from 12% to 47% as the volume fraction of red blood cell ghosts in the solution increased from 5% to 70%. The concentration reduction of plasma proteins in hardened red blood cell ghosts was higher than that in red blood cell ghosts. The number of adsorbed protein molecules per a red blood cell ghost were reduced as volume fraction of the ghosts in the solution increased.
An experiment was conducted to establish a large scale production method of anti-serum against chicken IgM and to profile the developmental changes of serum IgM levels during the feeding period(from hatching to 7 weeks of age) in broiler chicks. Blood samples were taken from Hubbard chicken at the age of hatching, three days of age, and weekly thereafter till to 7 weeks of age. The pure IgM was isolated from ammonium sulfate treated chicken serum by both sephadex G-200 and sepharose CL-6B chromatography. The breaking-through peak containing IgM appeared from the fraction 26 to 28. These fractions consisted mainly of IgM when tested by anti-chicken IgM(Nordic, Netherlands). Immunized with the heavy chain of this purified IgM, the rabbit immune sera(anti-chicken IgM) were formed a reaction only with the purified chicken IgM. The quantitative assay of serum IgM were carried by RID method. The optimal time for diffusion was 14 hours and the coefficient of determination($R^{2}$) for regression equation of standard curve was 0.992. It was observed that IgM concentrations were the highest at hatching(3.23 mg /mL), after that decreased gradually. From 2 to 5 weeks of age the levels unchanged(2.0 ~ 2.3mg /mL), and gradually decreased to 7 weeks of age(1.3 mg /mL).
An experiment was conducted to establish a large scale production method of anti-serum against chicken IgA and to profile the developmental changes of serum IgA levels during the feeding period(from hatching to 7 weeks of age) in broiler chicks. Blood samples were taken from Hubbard chicken at the age of hatching, 3 days of age, and weekly thereafter till to 7 weeks of age. The pure IgA was isolated from ammonium sulfate treated chicken bile juice by gel filtration chromatography ( Sepharose GL-6B) - The quantitative assay of serum IgA were carried by RID method. Developmental changes of serum IgA concentrations were 0.42 mg /mL at hatching, thereafter dicreased gradually, lowest at 1 week of age(0.17 mg /mL), and gradually increased to 7 weeks of age(2.73 mg /mL). There was no sexual difference in serum IgA level, but female chicks showed higher IgA levels than male chicks during the experimental period.
This work was conducted to examine the variation of immunoglobulins (Igs) in serum, immune milk, normal milk and colostrum upon implantation of a new Antigen Releasing Device (ARD). The core of each ARD housed an immunostimulating complex (ISCOM) that was made of adjuvant Quil A and type XIII lipase from a Pseudomonas sp. Each ARD was coated with polylactic acid, known as polylactide, that controls antigen release. Twenty lactating Chinese Holstein cows were divided into 2 groups (n = 10): test group and control group. All cows in the test group were implanted with a single injection in the right iliac lymph node with 3 types of ARDs, which were designed to release the antigens at d 0, 14 and 28 post-implantation. Blood and milk samples were collected from both groups, and colostrum samples were also collected from other post-partum cows in the same farm. Concentrations of $IgG_1$, IgA and IgM in whey and serum were measured by sandwich ELISA. The results showed that the $IgG_1$, IgA and IgM concentrations in serum and whey from the test group were higher than from the control group. Among the three Igs measured, the $IgG_1$ concentration in serum was significantly higher at d 40 after ARD implantation, and the $IgG_1$ concentration in whey peaked at d 9, 17 and 30, which corresponded with release of the antigen. Based on Pearson's correlation between Ig concentration and production parameters, IgA concentration in normal milk was positively correlated with lactation period, which reflected IgA changes during the lactation period in immune milk. In colostrum, $IgG_1$, IgA and IgM decreased abruptly from d 0 to 3, and then decreased slightly. In conclusion, serum $IgG_1$ concentration can be affected by controlled release of the ARD, while whey IgA levels are primarily affected by lactation period. These results may be useful in future studies designed to regulate concentrations of Igs in immune milk.
In order to investigate the effects of bisphenol A (BPA) on immune system in mice we examined the various immunological parameters. After single oral administration of BPA to female ICR mice, the weights of bodies and lymphoid organs, splenic cellularity and hematological parameters were examined on day 2 and 7. Among them WBC and splenic cellularity were slightly decreased on day 2. To assess the effects of BPA on humoral immune responses, splenic IgM plaque forming cell (PFC) and serum IgM were assayed. When BPA was administered after immunization with SRBC, but not before immunization, IgM PFC against SRBC was significantly lowered in a dose dependent manner. Serum IgM level was also decreased on day 4 when high dose (2000 mg/kg) of BPA was administrated after injection of OVA-antigen. The indexes of splenocyte proliferation (SP) to concanavalin A (Con A) and bacterial lipopolysaccharide (LPS) were measured in vitro by MTT assay. At low concentration BPA slightly increased splenocyte proliferation but at higher concentration it showed significant inhibitory effects on cell proliferation. Mitogen-stimulated SP was also determined with spleen cells from BPA treated mice. Con A-induced SP was slightly decreased and LPS-induced SP was especially inhibited at 1000 mg/kg and 2000 mg/kg of BPA. These results indicate that BPA is able to acutly evoke humoral and cell mediated immune suppression in mice.
To determine the concentration of Lactoperoxidase (LPO), an indirect enzyme-linked immunosorbant assay(ELISA) was developed. Anti-LPO egg yolk immunoglobulin(IgY) was transferred to egg yolk by immunizing of Brown hens with LPO. The titer of purified anti-LPO IgY was 1: 520,000. The immunological response of anti- LPO IgY with ${\alpha}$-lactalbumin, ${\beta}$-lactoglobulin, casein and lysozyme were evaluated, resulting that the anti-LPO IgY found to be a specific antibody toward LPO and no cross-reaction was observed against ${\alpha}$-lactalbumin, ${\beta}$-lactoglobulin, casein, and lysozyme in double immunodiffusion test and ELISA test. In indirect ELISA method, coating concentration of LPO and dilution rate of anti-LPO IgY was 0.25$\mu\textrm{g}$/mL and 1:8,000 respectively. Sensitivity in the standard curve of LPO was ranged from 0.01 to 1$\mu\textrm{g}$/mL using anti-LPO IgY.
Kim, Young-Boong;Rho, Jeong-Hae;Shon, Dong-Hwa;Kim, Hee-Joo;Seong, Ki-Seung;Lee, Nam-Hyung
Korean Journal of Food Science and Technology
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v.32
no.6
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pp.1319-1325
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2000
Antimicrobial effects of the specific IgY separated from eggs which were laid by hens vaccinated with Streptococcus mutans were investigated. The comparison tests of vaccination, addition levels of crude specific IgY, and innoculation concentration were applied by microscopic observation and turbidity test. Ten% addition of crude specific IgY obtained from vaccinated hens showed agglomerative clusters of S. mutans cells in supernatants and sediments, while crude IgY produced by non-vaccinated hens showed no cluster. IgY addition above 5% showed agglutinating clusters of most S. mutans cells and there was definite difference between IgY addition below 2.5% and above 5%. Concentration tests of crude IgY revealed that antimicrobial effects were differentiated by addition level and addition over 10% produced satisfactory results with turbidity test. The cluster size was dependent upon concentration of crude IgY addition. $10^5\;cfu/mL$ inoculation showed agglutinated cells and extent of agglomeration was proportional to cell numbers. Study of inoculation levels showed that 10% addition of crude IgY decreased turbidity effectively regardless of number of S. mutans cells. Plaque formation decreased to 75% with 15% addition of specific IgY concentration. These results implied that IgY separated from eggs laid by S. mutans-vaccinated hens might prevent dental caries caused by S. mutans.
This study was performed to elucidate the histopathologic distribution of immunoglobulins, particularly IgA, IgG and IgM in the periapical lesions, including 22 periapical granulomas and 18 periapical cysts. The immunoperoxidase staining method using reagents manufactured and supplied by Danish DAKO company was employed in this study. In comparison with the immunohistochemical methods, this method was proved to be reliable and convinient one to detect immunoglobulins in the tissue. The following results were obtained: 1. In the 22 periapical granulomas, IgG was found in 20 cases (90.9%), IgA in 16 cases (72.7%) and IgM in 19 cases (86.3%). 2. In the 18 periapical cysts, IgG was found in 16 cases (88.8%), IgA in 13 cases (72.2%) and IgM in 15 cases (83.3%). 3. The distribution of immunoglobulins both in periapical granulomas and periapical cysts was in great diversity according to the lesion and area. 4. More immunoglobulins were found in the exudative area with moderate or severe infiltrations of plasma cells and lymphocytes and less concentration of immunoglobulins were seen in the area with leukocytes infiltration and tissue destruction. 5. The area with collagenolysis and reparative activity contained more abundant IgG and IgM than IgA in periapical granulomas. 6. IgG was dominant in the granulomatous connective tissue and immunoglobulins were not easily found in the fibrous capsule in periapical cysts.
This study was undertaken to observe the relationship between salivary IgA, IgG, agglutinin titer & dental caries. The subjects divided into two groups, an active caries group (AC group) and caries-free and treated caries group (CFTC group). The AC group consisted of 36 subjects who had one or more carious lesions and the CFTC group of 12 subjects who had no evidence of caries or had filled teeth without present carious teeth for the last six months. The IgA, IgG and IgM levels in their saliva were measured by single radial immunodiffusion method using a disposable low-level immunodiffusion plate. The salivary agglutinin titers to Streptococcus mutans were measured by microtitration system. The results were as follow; 1. The mean value of IgA concentration in saliva of AC group was slightly higher than that of CFTC group, but its difference was slight. 2. The mean value of IgG concentration in saliva of AC group was slightly lower than that of CFTC group. The IgM concentration in saliva of both groups was neither below 1.1 mg/dl nor detected on LC partigen immunodiffusion plate. 3. There was no difference in the agglutinin titer to S. mutans antigen by serotypes, but low level agglutinin to type d was measured in both groups. 4. AC group showed low correlation between IgA, IgG & DMFT, but CFTC group revealed negative correlation. 5. The relationship between salivary IgA & agglutinin titers to S. mutans was low correlation in AC group, but CFTC group showed significant positive correlation. (P<0.05) 6. There were no specific correlations among the concentrations of salivary immunoglobulins, agglutinin titers to S. mutans, and the DMF teeth. They had no close concern to induce the dental caries.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.30
no.4
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pp.600-604
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2001
Immunoassay was used to study the detection method of irradiated shrimp. Sandwich ELISA was formatted with monoclonal antibody (Ab) (M-IgG) and polyclonal Abs (P-IgG) and polyclonal Abs (P-IgG) individually produced against brown shrimp tropomyosin (TPM) as an antigen. When M-IgG was used as a coating Ab to capture TPM, and P-IgG were used as reaction Ab against captured TPM could be detected in the range of 12.5 to 50 $\mu\textrm{g}$/mL. Detected concentrations of TPM from irradiated shrimp decreased dose-dependently, and the concentration of Ag by combination of irradiation with heating or freezing treatments also decreased. This results suggests the possibility for Sandwich ELISA, one of immunological analyses, to be applied for detecting irradiated shrimp.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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