Naddaf, Saied Reza;Razavi, Mohammad Reza;Bahramali, Golnaz
Parasites, Hosts and Diseases
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제48권3호
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pp.231-236
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2010
Anopheles fluviatilis James (Oiptera: Culicidae) is one of the known malaria vectors in south and southeastern Iran. Earlier ITS2 sequences analysis of specimens from Iran demonstrated only a single genotype that was identical to species Y in India, which is also the same as species T. We identified 2 haplotypes in the An. fluviatilis populations of Iran based on differences in nucleotide sequences of D3 domain of the 28S locus of ribosomal DNA (rDNA). Comparison of sequence data from 44 Iranian specimens with those publicly available in the Genbank database showed that all of the 288-D3 sequences from Kazeroun and Khesht regions in Fars Province were identical to the database entry representing species U in India. In other regions, all the individuals showed heterozygosity at the single nucleotide position, which identifies species U and T. It is argued that the 2 species may co-occur in some regions and hybridize; however, the heterozygosity in the 288-D3 locus was not reflected in ITS2 sequences and this locus for all individuals was identical to species T. This study shows that in a newly diverged species, like members of An. fluviatilis complex, a single molecular marker may not be sufficiently discriminatory to identify all the taxa over a vast geographical area. In addition, other molecular markers may provide more reliable information for species discrimination.
느타리 버섯속 6종 23균주에 대한 rDNA의 ITS II 부위의 DNA 염기서 열을 비교 분석함으로서 종간 및 종내의 근연관계를 조사하였다. rDNA의 ITS II 부위를 증폭하고자 5.8S rDNA의 3'말단 부위와 285 rDNA의 5'말단 부위에 두개 프라이머를 이용하여 PCR증폭을 행하였다. 느타리버섯 6종의 게놈 DNA로 부터 ITS II 부위를 증폭한 결과 종에 따라 밴드 길이에 차이가 있었으며 ITS II 부위의 길이 차이로 느타리 버섯 6종을 구분할 수 있었다. 같은 종내 개체간 구분을 위하여 느타리 버섯 6종 23균주의 PCR 증폭 결과는 느타리버섯(P. ostreatus) ASI 2096, ASI 2025와 노랑 느타리 버섯(P. cornucopiae) ASI 2038 균주외에 동일 종내 균주의 ITS II 길이는 동일한 양상을 보였다. 느타리 버섯 6종 및 ASI 2095, ASI 2025 그리고 ASI 2038에 대한 ITS II 부위의 염기서열을 비교해 보면 염기서열의 변이가 ITS II 부위가 시작되는 부분과 말단 부분에서 주로 존재하였다. ASI 2095와 ASI 2025 균주들은 동일 종내 느타리 버섯(P. ostreatus, ASI 2001) 균주와 ASI 2038와 ITS II 부위의 DNA 염기서열에 차이를 보였다. 이들 염기서열을 기초로 하여 Neighbor program을 이용한 균주간 유연관계는 느타리 버섯(P. ostreatus), 사철 느타리 버섯(P. florida), 여름 느타리 버섯(P. cornucopiae) 그리고 맛 느타리 버섯(P. eryngii)들이, 노랑 느타리 버섯(P. cornucopiae)과 호고 느타리 버섯(P. cystidious)이 각각 서로 가까운 유연관계를 나타내었으나 ASI 2025와 ASI 2038 균주 들은 특이한 계통분지를 나타내었다.
세균 및 진균류의 증식을 억제하는 능력이 있는 것으로 보고된 누로와 대계의 추출물을 사용하여 Mycobacterium smegmatis 및 Mycobacterium fortuitum의 증식을 억제하는 능력이 있는지를 시험하였다. 그 결과, 누로의 추출물에서는 증식억제능을 발견할 수 없었으나, 대계의 추출물에서는 뚜렷한 증식억제능이 관찰되었다. 따라서 본 연구에 사용된 대계(엉겅퀴)에 대한 분류학적 또는 진화적 분석을 수행하기 위하여 genomic DNA를 추출한 후, ITS1, 5.8S rRNA 유전자 및 ITS2를 포함하는 부분을 PCR로 증폭시켰다. PCR 산물의 염기서열을 분석한 결과, 733-bp의 염기서열이 얻어졌고, 이것을 GenBank에 등록하였다(accession number GU188570). 이렇게 얻어진 염기서열을 사용하여 BLAST analysis를 수행한 결과, 염기서열이 일치하는 생물체는 아직까지 GenBank에 보고된 적이 없고, 가장 가까운 식물들로는 귀화식물로서 전국적으로 분포하는 Carduus crispus (지느러미엉겅퀴) 및 현재까지 국내에 자생하는 것으로 보고된 적이 없는 Carduus defloratus로서 각각 3개씩의 염기가 다른 것으로 나타났다.
우리나라와 전 세계의 여러 지역에서 수집한 비늘버섯속 18 균주와 개암비늘버섯 2 균주를 대상으로 rDNA의 ITS region 염기서열과 genomic DNA의 RAPD-PCR을 수행하였다. ITS1과 ITS2영역의 염기의 수는 각각 233~271, 158~233 그리고 174~219 염기쌍으로 종에 따라 변이가 있었는데 ITS2영역의 염기서열이 ITS1의 영역보다 변이가 높았고 5.8S지역의염기의수는 비교적 변이가 적었다. 각각의 균주 간 유연관계를 알아보기 위해 ITS영역의 염기서열을 이용하여 계통도를 작성한 결과 실험에 사용한 균주는 8개의 클러스터로 나누어지는 것으로 나타났으며 동일한 종의 버섯은 동일한 클러스터에 속하는 것으로 나타났다. 또한 20종류의 primer를 이용하여 비늘버섯속 버섯을 대상으로 RAPD-PCR을 수행한 결과 15개의 primer가 효과적으로 염색체 DNA를 증폭하는 것으로 나타났다. 증폭의 양상은 primer의 종류와 종에 따라 변이가 있었다. 이 결과를 토대로 계통수를 작성한 결과 계통수는 ITS 영역의 PCR 결과와 매우 유사하였다. 본 실험결과, 실험에 사용한 비늘버섯속 버섯의 종과 계통 간의 유연관계는 높았으며, rDNA ITS 영역의 염기서열분석 결과를 이용해 공시된 각각의 비늘버섯 종을 분류하는데 유용하게 사용이 가능하였다.
For rapid and secure differentiation of P. infestans from other Phytophthora species, two fragments obtained from randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) profiles were selected as markers. Also, primers for in polymerase chain reaction (PCR) to detect P. infestans specifically were developed by analyzing the sequences of ITSII regions in rDNA of Phytophthora species. The primers, PISP-1 and ITS3 amplified a single. Fragment 450 bp of about in P. infestans, but not in other fungal or bacterial isolates. Annealing temperatures and template DNA quantities were varied for the optimization of PCR conditions. From the result of the PCR detection study, species-specific primers were selected under annealing temperatures ranging from 55$^{\circ}C$ to 61$^{\circ}C$, and template DNA levels ranging from 10 pg to 100 ng.
Moon, Ji Hye;Omar, Atef;Quintela-Alonso, Pablo;Jung, Jae-Ho
Animal Systematics, Evolution and Diversity
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제35권4호
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pp.186-190
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2019
DNA barcoding of two marine tintinnids, Eutintinnus rectus and Schmidingerella arcuata, was performed using four samples collected from different sites in the north-eastern coast of South Korea. The loricae morphology was observed by light and scanning electron microscopy. Molecular data were analyzed using five nuclear ribosomal DNA markers(18S, ITS1, 5.8S, ITS2, and 28S genes) and one mitochondrial marker (CO1 gene). The intraspecific pairwise differences of E. rectus and S. arcuata in the CO1 gene were 0.0-0.2% and 0.0-0.6%, respectively, while there were no differences in the 18S rDNA sequences.
Species boundaries among the Alcyonacean soft coral, the genus Dendronephthya, are often obscured by inter- and intraspecific morphological variations. In the present study, we attempted to infer the genetic relationships of eight dendronephthians based on their molecular characters, the internal transcribed spacer (ITS) regions of ribosomal DNA, and then compared this result together with the random amplified polymorphic DNA (RAPD) data from our previous investigation. Dendronephthya. putteri and D. suensoni formed a divaricate form - VI grade specific clade, whereas D. castanea, D. gigantea, D. aurea and D. spinifera, formed a umbellate and glomerate form - IV and III grade specific clade. Therefore, we confirmed that the main characters the growth form and the anthocodial grade and formula, are important in identification of the species in dendronephthians despite some problems. Also, the relationships of the growth form are clarified as the glomerate form is much closer to the umbellate form than to the divaricate form based on two sets of independent molecular data. However, we cannot determine the molecular markers which limit the species boundaries among this genus with ITS sequences.
지렁이과 (family Megascolecidae) 왕지렁이속 (genus Amynthas) 그룹을 rDNA ITS 유전자를 이용하여 계통 유연관계를 알아보고자 하였다. 2과 10속에서 26종의 DNA 염기서열을 이용하여 종간 계통적 유연관계를 MP (Maximum Parsimony), NJ (Neighbor Joining), QP (Quartet Puzzling)로 계통도를 작성하였다. 염기서열이 확보된 Megascolecidae (지렁이과)의 국내외 26종에 대한 계통 분석은 위 3개의 알고리즘 모두 동일한 5개의 그룹으로 나뉘는 것을 확인하였다. 또한 Amynthas 속은 크게 한국산 그룹과 필리핀산 그룹으로 구분되었다. 첫 번째 그룹, Amynthas jirensis, A. agrestis, A. gucheonensis, A. sopaikensis, A. bubonis, A. multimaculatus, A. koreanus, A. dageletensis, A. heteropodus, A. odaesanensis, Pontoscolex sp., Pheretima sp. 1와 다른 그룹, Dendropheretima banahawensis. Amynthas halconensis, A. isarogensis, A. mindrooensis, Pithemera sp. 2, Pithmera sp. 1, and Pleionogaster sp.이다. 이는 ITS 유전자가 속간의 차이를 보여주는 것보다 동일한 속이라 하더라도 지리적 차이에 따른 환경의 영향을 받았음을 알 수 있다. 즉 형태적 분화가 이루어졌다고 하더라도 유전적으로는 동질성을 나타내고 있음을 알 수 있다. 형태적 특징에 의한 명백한 차이는 구분되지 않았다.
Four strains of Phellinus spp. was identified based on internal transcribed spacer(ITS) region of rDNA sequence analysis and morphological characteristics. Basidiocarps of all strains were effused-reflexed and hymenial surface was poroid. Hyphal system was dimitic and basidiospore was globose to ellipsoid. The amplification of ITS regions produced a DNA fragment of 500 to 780 by in all strains examined. The determined sequences were analyzed for the reconstruction of phylogenetic tree. From these results, Phellinus sp. KM-1, KM-2, and KM-4 was identified as P. hartigii, P. baumii, and P. linteus, respectively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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