International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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v.22
no.2
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pp.75-82
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2011
To elucidate the novelty of Hyphantria cunea nucleopolyhedrovirus (HcNPV) isolated in Korea, polyhedrin and inhibitor of apoptosis (iap) gene structures were determined and analyzed. The analysis of HcNPV polyhedrin showed a little difference with 97.6% at the nucleotide level but no difference at the amino acid level when compared with that of previously reported H. cunea NPV (HycuNPV). On the other hand, iap genes showed variable differences with 89.0-99.6% nucleotide and 90.0-99.6% amino acid sequence identities. Especially, the 5' and 3' non-coding flanking sequences of iap1 gene had lower degree of identity with those of HycuNPV. Although the phylogenetic analyses using polyhedrin and iap genes showed that HcNPV is closely related with HycuNPV, we could provide that HcNPV is a novel isolate having novel gene structures.
Yolk protein-3 (YP3) was purified from the ovary of Hvpharatria cunea D. and the synthesis and fate during embryogenesis of WP3 were investisated by electrophoresis and fluorography. YP3 purified through gel slice and electrophoretic elution'was determined to have M. W. of 18 Kd and consist of one subunit. Haemolymph and fat body of male and female %were electrophoresed during vifellogenic stages to indentifv the vitellosenin in female. The result showed that there was no distinct difference in electrophoretic patterns betweerl male and female. However, tissue culture of fat body and maturing ovary indicated that YP3 was svuthesized by fat body. Aiso, vP3 in iaid eggs was maintained constant untii naut s artier oviposition and then decreased, indicating that YP3 was drastically used during late embryosenesis. However, a part of YP3 was present even in newly hatched first instar larvae.
The polyhedrin gene-containing DNA fragment of Hyphantria cunea nuclear polyhedrosis virus (HcNPV) was localized by southern hybridization with Autographa california CPA EcoRI-I fragment (7.3 kb), Bombyx mori NPV PatI-F fragment (7 kb) and synthetic oligonucleotide(30-mer) as probes. the PstI-L(5.3 kb) fragment of HcNPV was cloned to E. coli and the plasmid of the fragment was named as pHcP-L(8.0 kb). The pHcP-L was physically mapped and subcloned to E. coli as pHcP-L1(4.7 kb), pHcP-L2(7.1 kb), pHcP-L3(5.3 kb), pHcP-L4(4.2 kb) and pHcP-L5(4.5 kb).
Fine structures of the testis and vas deferens in the fall-web worm, Hyphantria cunea Drury, are studied with electron microscope. Adult worms have single testis close to the midlines of the abdomen. Testis is composed of 4 follicles which are incompletly separated from each other and bounded together by a peritoneal sheath. The peritoneal sheath consisted of outer cuticular layer and two kinds of inner layers, in which glycogen particles are dispersed commonly. These two layers are divided by the morphology of cytoplasmic granules. Follicular epithelium forming the wall of the follicles have melanin pigment granules, and trachea or tracheoles are extended through this epithelium. In the cysts of adult testis, matured spermatozoa are grouped together in bundles and after releasing the sperm bundles to the vas deferens, lamellar shaped lysosomes appeared in the cytoplasms of the cyst cells. The number of spermatozoa per cyst is exactly 256 ($2^8$), this number is characteristics of the Lepidoperan species. Vas deferens is a tube with a fairly thick bounding epithelium, a basement membrane and a layer of circular muscle outside it. At the apical portion of the epithelial cells, microvilli are well developed. And in the cytoplasms of these cells, numerous excretory granules are observed.
The prolein components of each crystal toxin of Bacillus thuringiensis kurstaki and alzawai were separated by SDS-PAGE. The major clqistal proteins from both shins were composed of paiypeptides having molecular weights of 130 kd and 64 kd. Digestive mixture of both. toxins with t~ypsin and gut juices shared 62 kd polypeptide which may be major actwe toxh. However, aizawal produced much less amount of 62 kd polypeptide than kurstaki did. On ingestion with Bt &-endotoxin, larvae of Hyphantria cunea developed 45 kd stress protein in the several tissues including fat body, which was induced by heat and cold shock.
Carborhydrate contents were compared between diapausing and non-diapausing pupae of the fall webworm, Hyphantria cunea DRURY. Glycogen content in the whole body of diapausing pupae kept at $-5{\pm}1^{\circ}C$ was less than that of those left at room temperature, while the amounts of trehalose and sorbitol showed the reverse trend. The osmotic pressure of haemolymph was higher in diapausing pupae than that in non-diapausing pupae. The mean oxygen consumption rate of diapausing pupae was $4{\sim}6.7$ times less than that of non-diapausing, normal pupae.
In this study, comparative replicational properties of Hyphantria cunea nucleopolyhedrovirus (HycuNPV) in Lymantria dispar (IPLB-LdElta) and Spodoptera frugiperda (IPLB-Sf21) cell lines were investigated. Our microscopic observations showed that cytopathic effects (CPEs) in LdElta cells appeared 12 h later than those in Sf21 cells. Whereas polyhedral inclusion bodies (PIBs) formed at 48 h postinfection (p.i.) in LdElta cells, it formed at 36 h p.i. in Sf21 cells. Extracellular virus production determined according to the 50% tissue culture infective dose ($TCID_{50}$) method in LdElta cells started about 12 h later when compared with Sf21 cells. Titers of extracellular virus in LdElta and Sf21 cells were calculated as $1.77{\times}10^9$ plaque forming units (PFU)/ml and $5.6{\times}10^9PFU/ml$, respectively, at 72 h p.i. We also showed that viral DNA replication began at 12 h p.i. in both cell lines. Viral protein synthesis was determined by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and polyhedrin synthesis was observed at 12 h p.i. in both cell lines. The results indicate that while the synthesis of macromolecules is 12 h later and production of extracellular virus is almost 3-fold lower in LdElta cells compared with those in Sf21 cells, the LdElta cell line is still a productive cell line for infection of HycuNPV.
Occurrence Hyphantria cunea was confirmed in 35 cities and counties nationwide in 2011, each of which reported some form of crop and/or ecological damage caused by the moth. Only a larva of the black-headed form were reported to have occurred in the nation. H. cunea was found in street trees 66.7%, followed by landscape trees 19.4% and forests 13.9%. This suggests that artificial environment 86.1% suffered from H. cunea more severely than natural forests. The study identified 44 families and 102 species of host plants, and found an additional 29 species, to those which had been identified in previous studies. At present, the identified host plants of H. cunea are composed of 62 families and 219 species in total since their first appearance was reported approximately 50 years ago. Host plants include 5 species of food crops (2.3%), 6 species of vegetables (2.7%), 4 species of medicinal crops (1.8%), 1 species of industrial crops (0.5%), 13 species of fruit trees (5.9%), 6 species of other trees crops (2.7%) as well as a further 5 species of farmed crops (2.3%). Seven species of host plants (18.4%) originate from North America where Hyphantria cunea has been introduced from, while 11 species (29.0%) are from China and Japan, Europe and India were the native sources of (10.5%) of the origin with 4 species, respectively. Seventeen species of trees, including Platanus occidentalis L., Ulmus davidiana (var.) japonica (Rehder) (Nakai) and Cornus officinalis (Siebold & Zucc) were heavily noted to be heavily infected with larval populations.
The morphology and whole genome sequence of Hyphantria cunea nucleopolyhedrovirus W1 (HycuNPV-W1) isolated in Korea were analyzed for the use as an eco-friendly control agent against H. cunea. The HycuNPV-W1 had irregular tetrahedral polyhedra with a size of 1.5-2.2 ㎛ which is similar to that of previously reported HycuNPV isolated in Korea. As a result of whole viral genome analysis, HycuNPV-W1 was composed of 131,353 bp, which is 1,606 bp shorter than that of the previously reported HycuNPV. The G+C content was 45% and six of the homologous repeated regions were found, so there was no significant difference from the previous report. As a result of ORF analysis, HycuNPV-W1 contains total of 145 ORFs which is three ORFs less than the previous report, while two ORFs were exclusively found in HycuNPV-W1. The functions of these ORFs remains unclear and are not considered to have a significant influence on the characteristics of the HycuNPV. The genome vista analysis showed that the overall sequence identity between HycuNPV-W1 and the previously reported HycuNPV was very high. The whole genome of HycuNPV-W1 analyzed was found to be similar to those of the previously reported HycuNPV, however, it is supposed to be a novel resource in Korea with different isolate.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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