The purpose of this study was to aid in the prediction of tumor cell tolerance to radiotherapy and/or chemotherapy. For this study, cell surviving curves were obtained for human epidermoid carcinoma A-253 cell line using semiautomated MTT assay. 2,4,6,8,10 Gy were irradiated at a dose rate of 210 cGy/min using /sup 60/Co Irradiator ALDORADO 8. After irradiation, A-253 cell lines(2×10⁴cells/mil were exposed to bleomycin or cisplatin for 1 hour. The viable cells were determined for each radiation dose with/without 2 /lg/mi of drug at the 3rd day. And they were compared to control values. The results were obtained as follows : 1. The surviving curve with gentle slope was obtained after irradiation of 2, 4, 6, 8, 10 Gy on A-253 cell line. 2. The cytotoxicity of bleomycin or cisplatin at the concentration of 2㎍/ml was great on A-253 cell line. But, there was no significant difference between the cytotoxicity of bleomycin and that of cisplatin. 3. There were significant differences of surviving fractions after irradiation with 2㎍/mi of bleomycin compared with irradiation only on A-253 cell line. 4. There were significant differences of surviving fractions after irradiation with 2㎍/ml of cisplatin compared with irradiation only on A-253 cell line. 5. There were no significant differences of surviving fractions between the groups of irradiation with bleomycin and the groups of irradiation with cisplatin on A-253 cell line.
The cytotoxic activity of 33,4,5-trihydroxybenzoic acid methylester and related compounds on the growth of normal cell lines, human skin melanoma cells and human oral epithelioid cell line were evaluated by the 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and 2,3-bis-[2-methoxy-4-nitro-5-sulfo-phenyl]-2-H-tetrazolium-5-caboxanilide (XTT) methods. 3,4,5-Trihydroxybenzoic acid methylester decreased the cell viability of human skin melanoma cells and human oral epithelioid cells shown by the MTT method and the cell adhesion activity of human skin melanoma cells and human oral epithelioid cells shown by the XTT method. In light microscopy, 100 ${\mu}M$ 3,4,5-trihydroxybenzoic acid methylester showed the highest cytotoxic activity. These results suggest that 3,4,5-trihydroxybenzoic acid methylester has a potential anticancer activity.
The cell growth inhibitor effect of cervical cancer cells was investigated by liposome mediated transfection (pRcCMVp53/lipofectin) and by transfection using adenovirus (AdCMVp57). The papilloma virus cancer cell lines we used in this study were HPV16 positive, having inhibiter gene, wild p53 gene, CaSki, SiHa, HPV18 positive HeLa, HeLaS3 and HPV negative C33A, HT3. LacZ gene of E.coli was used as the marker gene for the transfection efficiency. The effect on the inhibition of tumor cell growth was measured by cell count and cell viability though ELISA analysis and MTT assay. The inhibition of tumor cell growth was confirmed by measuring each assay for six days, comparing with the normal control cell growth. The cell growth of cervical cancer calls by transfection was significantly reduced and showed tittle differences among the cell lines. To eliminate the potential problem of Ad(adenovirus) contamination during rAAV production, rAAV can be produced by a triple transfection of vector plasmic, packaging plasmid, and adenovirus helper plasmid. To examine the helper functions of Ad plasmids on the production of rAAV vector, we carried out cotransfection of three plasmids, AAV vector, packaging construct, and Ad helper plasmids. The optimized transfection condition for calcium phosphate method is 25ug of total DNA per 10-cm-diameter plate of 293 cell. We found that rAAV yields peaked at 48hr after Ad infection. The titer of rAAV was measured by the dot blot analysis to measure the number of particles/ml based on the quantification of viral DNA. Recent1y, Kombucha(fungi) was identified as a very potent antileukefic agent. In the present study, effect of natural toxin(plankton) and Kombucha is PSP(GTXI-3, neoSTX), on various MTT assay cervical cancer cell line. Toxin(GTX 1-3, neoSTX) also inhibited the proliferation in primary cervical cancer calls in a dose-dependent toxin concentration. These results showed that toxin was very potent in inhibiting the proliferation of cervical cancer calls in vitro. Toxins and Kombuoha exhibited a dose dependent inhibition of cellular proliferation in cancer cell line.
TRAIL, tumor necrosis factor (TNF)-related apoptosis-inducing ligand belongs to one of important cytokine superfamilIES, tumor necrosis factor ($TNF{\alpha}$). TRAIL-2 receptor agonists activate several cell signaling pathways in cells in different manners and could lead to apoptosis or necrosis. Agonistic egg yolk antibodies like IgY which have been developed in a selective manner could activate TRAIL death receptors such as TRAIL-2 (DR5) and thus apoptosis signaling. We here investigated induction of apoptosis in human breast cancer cells (MCF7 cell line) by an IgY produced against an 21 aminoacid epitope of the human TRAIL-2 receptor. As the first step a small peptide of 21 aminoacids choosen from the extracellular domain of DR5 protein was produced with a peptide synthesizer. After control assays and confirmation of the correct amino acid sequence, it was injected to hens immunized to achieve high affinity IgYs. At the next step, the produced IgYs were extracted and examined for specificity against DR5 protein by ELISA assay. Subsequently, the anticancer effect of such IgYs was determined by MTT assay in the MCF7 human breast cancer cell line. The produced peptides successfully immunized hens and the produced antibodies which accumulated in egg yolk specifically recognized the DR5 protein. IgYs exerted significant toxicity and killed MCF7 cells as shown by MTT assay.
참외 종자의 기능성을 규명하는 연구의 일환으로 항암활성을 조사하고자 하였다. 추출용매에 따른 항암활성을 조사하고자 헥산, 에탄올, 물 등 다양한 추출용매를 사용하여 참외 종자 추출물을 제조하였고, 가공에 따른 활성 증진효과를 알아보기 위해 볶음 처리하였다. 볶음 처리한 참외 종자는 볶음 처리하지 않은 종자보다 활성이 2~4배까지 증가하는 경향을 보여주었다. 추출용매에 따른 활성은 에탄올 추출물, 헥산 추출물, 물 추출물 순으로 항암활성이 나타났다. 인체 유래 5종(MCF-7, A549, AGS, HT-29, HepG2) 암 세포주를 이용하여 항암 활성의 조직 특이성을 알아보고자 하였다. 참외 볶음 종자 에탄올 추출물이 간암 세포주인 HepG2세포와 유방암 세포주인 MCF-7 세포에서 우수한 항암활성을 보여주었다. 용매분획법을 실시하여 제조한 분획물의 경우 에탄올 추출물보다 활성이 증가하였고, 비극성 분획물인 에칠아세테이트층이 극성 분획물인 부탄올층 보다 강한 항암활성을 보여주었다. 이상의 연구결과, 참외 볶음종자가 간암과 유방암 예방 및 치료 소재로서 개발될 가치가 있는 것으로 사료된다.
Curcumin, a natural compound extracted from rhizomes of Curcuma longa, has been shown to possess potent anti-inflammatory and anti-tumor activity. The mechanism by which curcumin initiates apoptosis remains poorly understood. In this study, we investigated the effects of curcumin on caspase-3 activity and protein expression of procaspase-3, Bcl-2, Bax, total Akt and phosphorylated Akt in SW480 human colon cancer cell. We cultured SW480 cells in the presence of various concentrations (0, 10, 20 or 30 uM) of curcumin. Curcumin inhibited colon cancer cell growth in a dose-dependent manner (p < 0.05). Caspase-3 activity was significantly increased dose-dependently in cells treated with curcumin (p < 0.05), concisely procaspase-3 expression was significantly decreased. Bcl-2 levels were decreased dose-dependently in cells treated with curcumin (p < 0.05), but Ben remained unchanged. In addition, phosphorylated Akt levels and total Akt levels were markedly lower in cells treated with 20 uM of curcumin treatment (p < 0.05), In conclusion, we have shown that curcumin inhibits cell growth and induces apoptosis in SW480 human colon cancer cell lines via Akt signal pathway.
PARK JUNHO;YU SUNGRYUL;YOON JAESEUNG;BAEK KWANGHEE
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제15권6호
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pp.1397-1401
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2005
Bone morphogenetic protein-4 (BMP-4) is a signaling homodimeric molecule that acts as a morphogen to influence cell fate in a concentration-dependent manner. The limited supply of a pure preparation of BMP-4, due to very low level of their expression in vivo, makes it difficult not only to study the biological activities of BMPs, but also to use them as a clinical tool. For a large-scale production of BMP-4, human BMP-4 cDNA was expressed in Chinese hamster ovary (CHO) cells by a recently development vector system, which confers position-independent stable expression of the foreign genes. The CHO cell line expressing recombinant human BMP-4 (rhBMP-4) at the level of $7\;{\mu}g/ml$ could be obtained after stepwise selection with methotrexate. This level of expression is about 70 times higher than those previously reported. The partially processed form of BMP-4 as well as mature form could be detected, when the aliquots of culture media were analyzed by Western blot. The glycosylation pattern and biological activity of the rhBMP-4 were determined by glycosidase treatment and the induction rate of alkaline phosphatase in mouse osteoblastic cells.
The trichothecenes are sesquiterpenoid mycotoxins characterized by the 12,13-epoxytrichothec-9-ene ring system. We have tested cytotoxicity of several naturally-occurring or synthesized trichothecenes against human solid tumor cell lines. Among them, trichothecin(I) and $4-\beta$-Acetoxy-12,13-epoxytrichothec-9-ene (trichodermin, II) exhibited highly cytotoxic activities. 4-.betha.-Hydroxy-12,13-epoxytrichothec-9-ene (trichodermol, III) and $4-\beta$-Methoxy-12,13-epoxytrichothec-9-ene (IV) had mild cytotoxicities. But 12,13-Epoxytrichothec-9-ene-4-one (V) and $4-\beta$-Hydroxy-12,13-epoxytrichothec-9-ene(VI) had no cytotoxicities up to 10 $\mug/ml$. And in the tested cell lines, HCT15 colon cancer cell line was the most sensitive to all tested trichothecenes.
During the screening for cytotoxic compounds from plants grown in Korea, Betula platyphylla (BP) showed potent activity against the adenocarcinomic human alveolar basal epithelial A549 cell line. To identify the cytotoxic components from BP, the $CH_2Cl_2$ fraction with the most significant cytotoxic effect was applied to the column chromatographies. Seven compounds were isolated: lupeol (1), betulinic acid (2), (-)-rhododendrol (3), platyphyllenone (4), platyphyllone (5), (-)-centrolobol (6), and oleanolic acid (7). Among them, three diarylheptanoids (4 - 6) exhibited cytotoxicity toward A549 cells. Especially, $50{\mu}M$ of 4 reduced A549 cell viability to $18.93{\pm}0.82%$ compared to control ($100.00{\pm}21.48%$). Lactate dehydrogenase (LDH) leakage and intracellular reactive oxygen species (ROS) production were also induced by $50{\mu}M$ 4. This is the first report on the cytotoxic effect of BP-derived diarylheptanoids 4-6 against A549 cells. The compound 4 may be useful for the development of early hit compounds for non-small cell lung carcinoma, but the consideration about selectivity of 4 is required since 4 also showed the cytotoxicity in the human normal lung epithelial BEAS-2B cell line.
대한약학회 2002년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2
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pp.324.1-324.1
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2002
Human 5-reductase type II(5AR2) is an important target for the treatment of benign prostatic hyperplasia. In this study we describe the establishment of cell line which stably expressed 3X FLAG tagged human 5AR2. We used this cell line as a cell based assay tool and source for 5AR2 enzyme. First a plasmid (3XFLAGpCMVl0-5AR2) for the expression of 5AR2 was constructed by the use of the vector 3XFLAGpCMV10 and transfected into the HEK 293. By selection with G418 sulfate. ten HEK 293 single cell clones were obtained of which three stably exhibited high 5AR2 activity. (omitted)
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[게시일 2004년 10월 1일]
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