A mutant herpes simplex virus 1, mtHSV, was constructed by inserting the E. coli beta-galactosidase gene into the loci of icp34.5, the apoptosis-inhibiting gene of HSV. The mtHSV replicated in and lysed U251 (human glioma cells), EJ (human bladder cells), and S-180 (mice sarcoma cells), but not Wish (human amnion cells) cells. With its intact tk (thymidine kinase) gene, mtHSV exhibited susceptibility to acyclovir (ACV), which provided an approach to control viral replication. An in vivo test with mtHSV was conducted in immune-competent mice bearing sarcoma S-180 tumors, which were treated with a single intratumoral injection of mtHSV or PBS. Tumor dimensions then were measured at serial time points, and the tumor volumes were calculated. Sarcoma growth was significantly inhibited with prolonged time and reduced tumor volume. There was microscopic evidence of necrosis of tumors in treated mice, whereas no damage was found in other organs. Immunohistochemical staining revealed that virus replication was exclusively confined to the treated tumor cells. HSV-1 DNA was detected in tumors, but not in the other organs by a polymerase chain reaction analysis. From these experiments, we concluded that mtHSV should be a safe and promising oncolytic agent for cancer treatment.
In order to explore the potential of ascorbic acid supplementation for the prevention and treatment of herpes simplex viral diseases, plaque reduction assays were performed. Ascorbic acid as well as copper chloride/ferric chloride were added to wells containing Vero cells infected with herpes simplex virus type 1 (HSV-1), and the infectivity of HSV-1 was determined. Since copper and iron are major transition metals in human plasma, near the normal human plasma concentrations of them were used for experiments. When Cu(II) and Fe(III) were applied, there were no significant differences between virus control and Cu(II)/Fe(III)-treated groups. But, when appropriate concentrations of ascorbic acid were added to wells, meaningful differences between control and ascorbate-treated groups were found. In the presence of Cu(II)/Fe(III) at $5.8/3.7\;{\mu}M$, 72-h treatment with ascorbate at $50\;{\mu}M$ reduced HSV-1 infections to $10.77%{\pm}4.25%$ (P < 0.001) and $500\;{\mu}M$ did to $3.06%{\pm}1.62%$ (P < 0.001). Moreover, the cytotoxicities for Vero cells at those concentrations were insignificant (P > 0.05). Current recommended dietary allowance (RDA) of ascorbic acid is 60 mg/day, and the oral intake of 60 mg/day of ascorbic acid yields plasma ascorbic acid at 45 to $58\;{\mu}M$ in a healthy adult man. Therefore, the results of this study suggest that the maintenance of appropriate level (more than $50\;{\mu}M$) of ascorbic acid in human plasma by appropriate amount (more than the RDA) of ascorbic acid supplementation may be helpful for the prevention and treatment of diseases caused by HSV -1 in an adult man. In addition, this study also suggests that ascorbic acid may be useful for the prophylaxis of fatal HSV-1 infections in neonates and the prevention of HSV-1 reactivation in immunocompromised hosts.
인간을 비롯하여 여러 동물의 생식기와 구강. 안구 점막에 수포성, 괴양성 병변을 일으키는 Herpes simplex 2형 바이러스(HSV-2)에 대한 단클론항체를 하이브리도마 기술을 이용해 생사하였다. 생산된 단클론항체 C-2는 western blotting에서 134, 86 그리고 43 kDa의 분자량을 갖는 항원을 인식하였다. C-2의 isotype은 IgM이었다. SDS-PAGE를 이용하여 HSV-2에 감염되어 원형의 다핵 거세포를 형성한 vero 세포주를 인식하였으며, 이는 HSV-2 항원이 숙주세포에서 발현되고 있음을 알 수 있다. 이 결과는 HSV-2 백신개발의 목표항원이 되는 항원검출과 HSV-2 감염 진단법 개발에 기초가 될 수 있을 것이다.
In order to find antiviral effect against Human immunodeficiency virus(HIV), Herpes simplex virus type I(HSV-1) and II(HSV-2) from herb medicines, publicated 29 paters on anti-viral effect of herbal medicines and a convenient virus-induced cytopathic effect (CEP) inhibition assay was introduced. The major virus on experiment are HIV, Hepatitis B virus and HSV-1,2. Those of other studies showed inhibition of infected virus DNA replication and screening test of herbal medicines. More than 15 extractions were prepared by pure water boiling from herbal medicines, and their toxicity of infected cell and anti-viral activities were evaluated. Among them, the major part of herbal medicines showed cell stability compared with the contrast. Cytotoxic concentration (CC) of the $H_2O$ extracts of Padoo against HIV was <4.0, Hyungbangpaedoksan against HIV was 9.3, Whangyonhaedoktang against HIV-1 and HSV-2 was 15.3. These are high level cytotoxic concentration compared with the contrast. But antiviral effect was unable to figure out for selective $index(SI)=CC_{50}/EC_{50}$. The other herbal medicines were unable to showed potent anti-HIV and anti-HSV activity. The antiviral activation using herbs in this thesis have unlimited objects, to select research object will help to show the direction of antiviral drug development that have less side effect and more excellent efficiency.
For screening of the antiviral agent from soil, about 520 strains of microorganisms were evaluated for their antiviral activity, About 6.9% of strains showed more than 95% antiviral activity against Herpes Simples Virus (HSV)-1. Two strains among 30 strains active against HSV-1 virus showed a quite strong activity against human immunodeficiency virus.
In order to investigate the prevalence of sexually transmitted viruses such as human papillomavirus (HPV) and herpes simplex virus (HSV) in Korean commercial sex workers (CSWs), we selected 188 CSWs (age range 20-44 years, median age 24 years) who regularly visited one public health center in Seoul, Korea. HPV genotypes were analyzed by using a HPV DNA Chip, and an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect type-specific IgG against HSV2 antibody identifying seropositivity for HSV2 infection. Polymerase chain reaction (PCR) was performed with specific primers to detect HPV and HSV1/2 in cervical swabs from the CSWs. The prevalence of HPV infection was 83.5% in 188 cervical swab specimens and the main high-risk HPV genotypes were HPV16, 18, 56, and 58. The principal low-risk HPV genotypes were HPV6 and 11. The prevalence of HSV1/2 DNA was 13.8% and HSV2 seroprevalence was 86.2%. These results suggest that high frequencies of HPV and HSV2 infection might contribute to the rapid spread of STD viruses in CSWs in Korea. Additionally, an understanding of why high-risk HPV genotypes are so prevalent could provide guidelines for prophylactic vaccine development in Korea.
Herpes simplex virus, Varicella zoster virus and Human herpes virus-6 caused central nervous system infections and latent infections but there is no data of the 3 viruses being tested from the same cerebrospinal fluid samples with aseptic meningitis or encephalitis in adults patients. These viruses produced similar neurologic symptoms but difficulties existed in differentiating of etiologic agents and therefore the viruses needed to be detected in the early state. Herpes simplex virus encephalitis (HSVE) in adults, if not treated promptly was fatal. If treated with antiviral drugs in the early phase of encephalitis, neurologic sequales decreased by 65%. Recently, a PCR method for detection of HSVE with CSF was developed. VZV primary and secondary infections caused neurologic symptoms of encephalitis or meningitis. The second frequency of adult encephalitis that caused VZV were reported. HHV-6 caused CNS latent infection that was studied with normal adults brains. But there is no data of HSV, VZV and HHV-6 for aseptic meningitis and encephalitis of Korean adults through etiologic study. We cultured CSFs on HEp-2 cells and simultaneously tested for HSV PCR, VZV nested PCR and HHV-6 PCR with 8 specific primers. The PCR results of CSF from meningitis Korean adults were 13/19 (68.4%) for HSV, 10/19 (52.6%) for VZV and 12/19 (63.2%) for HHV-67/19 (36.8%) cases were triple infected HSV PCR, VZV PCR and HHV-6 PCR positive; 3/19 (15.8%) cases were dual infected HSV PCR and HHV-6 PCR positive; 1119 (0.5%) cases was VZV PCR positive. Strong viral DNA amplification of CSF means a causative virus may be present in aseptic meningitis or encephalitis patients and may cause clinical neurologic symptoms. HSV and HHV-6 viruses detection rate were higher than VZV by PCR with CSFs.
항구 도시인 부산의 바이러스성 성병 감염 현황과 고위험군 지표로서 HPV, HSV 및 HBV 감염자의 성별, 연령대별 유형율 조사 등 기초자료를 확보하여 성매개감염증 사업관리 및 전파방지에 중요한 자료를 제공하고자 한다. 자궁경부도찰물 674건 중 HPV 23건(3.4%)과 HSV 1 2형 3건(0.4%) 9건(1.3%)이 각각 분리되었으며, 혈청 586건 중 HSV IgM 121건(3.6%), HSV-1 IgG 487건(83.1%), HSV-2 IgG 135건(23.0%), HBsAg 26건(4.4%), HBeAg 7건 (1.2%) 등이 검출되었다. HPV 유전자형별 분포도는 고위험군이 15종(13명), 저위험군이 6종(3명)으로 나타났으며, 복합감염은 7명이었다. 연령별 발생분포는 자궁경부도찰물의 경우 20대 이하가 24건(7.2%), 혈청의 경우 40대 이상이 101건(100%)으로 가장 높았다. 그리고 업소별 분포도는 자궁경부도찰물에서 보건소의 검진대상자(유흥업소종사자)들이 감염율이 가장 높았고, 혈청에서는 대용성병진료소의 검진대상자(특수업태부)가 감염율이 가장 높았다.
면역 결핍 바이러스와 허피즈 바이러스 -1,2에 대한 한약의 항바이러스 작용을 관찰하기 위하여, 세포 바이러스 검색에 초기 독성과 감염 바이러스의 생존 세포 수를 비교적 단기간내 볼 수 있는 96-well plate를 이용한 MTT assay로 측정하였다. 본 실험은 예비 실험 단계에서 사용된 총 85가지의 한약중 단미제 6가지와 복합처방 44가지를 선정하였으며 복합처방은 유사한 치법으로 분류하였고 한약의 시료 추출은 순수하게 물로 전탕하여 여과하였다. 실험 결과 파두와 맥아가 면액 결핍 바이러스에 대해 감염초기 유의성이 있었으며 호장근, 갈근우방자탕과 형방패독산이 허피즈 바이러스-1,2에 대해 감염초기 유의성이 있었으나 실험의 시간 경과에 따른 지속적인 약효 안정성을 보이지는 못하였다. 이 실험을 통하여 한약을 이용한 우수한 바이러스 치료를 개발하기 위해서는 단미제나 복합 처방에서 항바이러스 작용이 큰 유효성분의 대량 분리와 세포 실험에 있어서 오차를 줄 일 수 있는 세포면역학적 실험의 도입 등이 필요할 것으로 사료된다.
The araC prodrugs (1~5) carrying a special acyl group at 5'-Ο-or $N^4$-position were evaluated for in vitro antiviral activity against various human viruses. When tested against HSV-1 and HSV-2 cultured in the verso cells, the prodrugs exhibited slightly higher $ED_{50}$ values compared with one of the parent araC but showed more increased $CC_{50}$ values in all cases. Consequently the overall selectivity indexes of prodrugs were higher than that of arab. The prodrugs, except compound 5, exhibited very potent activity similar to that of araC ($ED_{50}$ about $0.12{\mu}g/mι$) when evaluated against another human DNA virus, cytomegarovirus. However, theses araC prodrugs were completely inactive against RNA viruses i.e. poliovirus and coxackie B3 virus at the concentration of 4250{\mu}g/mι.$
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[게시일 2004년 10월 1일]
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