• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
• /
• 제27권4호
• /
• pp.574-579
• /
• 2014

A lysozyme gene from breast of Tibetan sheep was successfully expressed by secretion using a-factor signal sequence in the methylotrophic yeast, Pichia pastoris GS115. An expression yield and specific activity greater than 500 mg/L and 4,000 U/mg was obtained. Results at optimal pH and temperature showed recombinant lysozyme has higher lytic activity at pH 6.5 and $45^{\circ}C$. This study demonstrates the successful expression of recombinant lysozyme using the eukaryotic host organism P. pastoris paving the way for protein engineering. Additionally, this study shows the feasibility of subsequent industrial manufacture of the enzyme with this expression system together with a high purity scheme for easy high-yield purification.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
• /
• 제5권1호
• /
• pp.13-16
• /
• 2000

Simple procedures have been devised for purifying recombinant human interleukin-2 (hIL-2), which was expressed in Escberichia coli using sequences of glucagon molecules and enterokinase cleavage site as an N-terminus fusion partner. The insoluble aggregates of recombinant fusion protein produced in E. coli cytoplasm were easily dissolved by simple alkaline pH shift $(8\rightarrow12\rightarrow8)$. Following enterokinase cleavage, the recombinant hIL-2 was finally purified by one-step reversed-phase HPLC with high purity. The ease and high efficiency of this simple purification process seem to mainly result from the role of used glucagon fusion partner, which could be applied to the production of other therapeutically important proteins.

• 공업화학
• /
• 제25권1호
• /
• pp.116-120
• /
• 2014

접촉분해 가솔린 제조공정의 부산물의 하나인 접촉분해경유(LCO)는 많은 유용 방향족 성분을 함유하고 있다. 그 중에서도 특히 2,6-dimethylnaphthalene (2,6-DMN)은 PEN 수지, 고분자 액정 등의 기초 원료로서 주목된다. 지금까지 중유에 혼합되어 연료로서만 사용되고 있는 LCO로부터 2,6-DMN 등과 같은 유용 방향족 탄화수소를 분리, 정제하는 것이 가능하게 되면 자원의 유용이용이라는 관점에서 그 의미는 매우 크다. 본 연구는 melt crystallization (MC)과 solute crystallization (SC)의 조합에 의해 2,6-DMN의 고순도 정제를 검토했다. MC와 SC의 원료로서는 증류-추출 조합에 의해 LCO로부터 회수한 DMN 이성체 혼합물(2,6-DMN의 농도: 10.43%)과 MC로부터 회수한 결정을 각각 사용했다. SC의 용매는 메탄올과 아세톤 혼합물(60 : 40 wt%)을 사용했다. MC-SC의 조합에 의해 99.5%의 2,6-DMN 결정을 회수할 수 있었다. MC-SC는 DMN 이성체 혼합물에 함유된 2,6-DMN의 고순도 정제에 매우 유용한 조합의 하나임을 확인했다.

• KSBB Journal
• /
• 제24권2호
• /
• pp.212-215
• /
• 2009

본 연구에서는 식물세포배양으로부터 항암물질 paclitaxel을 고 순도, 고 수율로 분리 가능한 액-액 추출 공정에서의 주요 공정 변수들을 최적화 하였다. 액-액 추출을 위한 최적의 유기용매 (methylene chloride) 첨가량, 추출횟수, 혼합시간, 정체시간은 각각 0.28 (v/v), 3 (times), 30 min, and 40 min 임을 알 수 있었다. 액-액 추출 공정은 특히 메탄올을 이용한 biomass 추출물에 포함되어 있는 다량의 극성불순물을 제거하는데 매우 효과적이었다. 또한 액-액 추출 후 농축조건으로는 후속공정에서의 높은 순도의 paclitaxel 뿐만 아니라 작업의 용이성 측면에서 액-액 추출액을 rotary evaporator로 완전히 농축하는 것이 가장 바람직함을 알 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제18권10호
• /
• pp.1648-1654
• /
• 2008

Superoxide dismutase (SOD) removes damaging reactive oxygen species from the cellular environment by catalyzing the dismutation of two superoxide radicals to hydrogen peroxide and oxygen. Extracellular superoxide dismutase (EC-SOD) is a tetramer and is present in the extracellular space and to a lesser extent in the extracellular fluids. Increasing therapeutic applications for recombinant human extracellular superoxide dismutase (rEC-SOD) has broadened interest in optimizing methods for its purification, with a native conformation of tetramer. We describe a solid phase refolding procedure that combines immobilized metal affinity chromatography (IMAC) and gel filtration chromatography in the purification of rEC-SOD from Escherichia coli. The purified rEC-SOD tetramer from the $Ni^{2+}$-column chromatography is refolded in Tris buffer. This method yields greater than 90% of the tetramer form. Greater than 99% purity is achieved with further purification over a Superose 12PC 3.2/30 column to obtain the tetramer and specific activities as determined via DCFHDA assay. The improved yield of rEC-SOD in a simple chromatographic purification procedure promises to enhance the development and therapeutic application of this biologically potent molecule.

• 자원리싸이클링
• /
• 제13권1호
• /
• pp.22-27
• /
• 2004

전기로제강분진을 환원휘발시켜 얻은 조산화아연을 염화암모늄용액으로 침출, 전해채취하여 99.9％(3-Nine) 이상의 고순도금속아연을 회수하기 위하여 침출용액 중의 Pb 및 Cd 불순원소이온들의 석출, 제거에 관한 기초실험을 수행하였다. Pb 및 Cd 이온 등의 석출, 제거는 금속아연분말의 첨가에 의한 cementation 반응을 이용하였으며, 정제된 용액을 전해액으로 사용한 전해채취실험을 수행하여 정액 중의 Pb 및 Cd 이온농도가 회수되는 금속아연 중의 Pb 및 Cd 함량에 미치는 영향을 분석하여 3N 이상의 고순도금 속아연 회수를 위한 정액조건을 조사, 검토하였다. Pb 및 Cd 이온농도가 각각 2ppm 및 0.1 ppm 이하인 정액을 전해액으로 사용할 때 3N 이상의 고순도금속아연을 회수할 수 있었으며, 이때 침출용액의 정액에 필요한 금속아연분말 첨가량은 8.5g/l 이상으로 조사되었다. 또한 정액과정에서 금속아연분말 첨가 시 용액의 Eh 변화를 측정하여 Eh 변화에 의한 금속아연분말첨가량의 제어가능성을 검토하였다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
• /
• 한국생물공학회 2005년도 생물공학의 동향(XVI)
• /
• pp.355-359
• /
• 2005

분별침전 공정에서 순도 및 수율에 미치는 온도의 영향을 확인하였다. 분별침전을 위해 일정 온도에서 보관할 경우와 단계적으로 보관 온도를 하강하는 경우에 대한 분별침전 효율을 확인하였다. 일정온도$(0^{\circ}C)$에서 보관할 경우 높은 수율$({\sim}84%)$을 얻을 수 있는 반면 단계적으로 보관 온도를 하강할 경우 상대적으로 높은 순도$({\sim}79%)$를 얻을 수 있었다. 또한 단계적으로, 큰 폭으로 보관 온도를 하강 시킬 경우 더 높은 순도를 얻을 수 있었다. 저장온도$(-20^{\circ}C{\sim}12^{\circ}C)$를 일정하게 유지할 경우 paclitaxel 순도 면에서 $0^{\circ}C$가 가장 효과적이었으며 온도변화에 따른 수율은 거의 영향이 없었다. 따라서 최종 정제를 위한 전 처리 공정으로 분별침전 공정이 간단하고 매우 효과적임을 알 수 있었다.

• 청정기술
• /
• 제24권1호
• /
• pp.15-20
• /
• 2018

Hexafluoropropyleneoxide ($C_3F_6O$, HFPO) is highly expensive and it may be used as a raw material for the synthesis of various fluorine based compounds. Currently, extractive distillation method has gained considerable attention to collect the HFPO from a mixture of HFPO / hexafluoropropylene ($C_3F_6$, HFP). Optimized operating conditions are studied using a theoretical method for the extraction process. Among available solvents for the purification process, the use of 1,1-dichloro-1-fluoroethane exhibits a high purity of HFPO as a top product and minimize the required heat duty. Since the boiling point of the solvent increases as the pressure in the column increases, the enhanced extractive capability of the solvent led to the high purity of HFPO at the high pressure.

• KSBB Journal
• /
• 제23권1호
• /
• pp.37-43
• /
• 2008

(주)녹십자는 1986년 "훽나인"을 B형 혈우병 치료제로 제조품목허가를 받아 B형 혈우병치료제 공급을 시작하였다. 또한 1991년 New York Blood Center에서 selvent/detergent 바이러스 불활화 방법을 도입하여 제조공정에 추가한 후 혈액유래 바이러스로부터 안전한 제품을 생산하여 왔다. 하지만 이 제품은 혈액응고 제2인자, 제7인자, 제10인자가 함유된 제9인자 복합체로, 정맥 혈전증과 파종성 혈관내응고병증 같은 혈전형성 부작용이 일어날 가능성이 있어, 훽나인보다 순도, 유효성, 바이러스 안전성이 우수한 제품의 개발이 필요하였다. 이를 위해 고순도 제9인자 제제인 "GreenNine VF" 제조공정을 개발하였다. GreenNine VF 제조공정은 기존의 훽나인 생산 공정에 heparin 친화성 크로마토그래피와 양이온 크로마토그래피가 추가된 공정으로, 바이러스 안전성을 증진시키기 위한 바이러스 필터 공정도 포함하고 있다. 이러한 공정에 의해서 산업적 규모로 생산된 GreenNine VF는 훽나인에 비해 순도와 바이러스 안전성이 월등히 높은 것으로 확인되었다. 또한 고순도 혈액응고 제9인자 제제인 Mononine, Octanyne, Berinin HS, Immunine STIM plus 600보다 순도가 더 높았다. Cryo-poor plasma 1,600 L를 원료로 사용했을 때 1 batch 당 250IU 분병제품 2,400병 이상, 500 IU 분병제품 1,200병 이상을 생산할 수 있었다.

• KSBB Journal
• /
• 제23권6호
• /
• pp.557-560
• /
• 2008

본 연구에서는 식물세포배양으로부터 항암제 paclitaxel 정제를 위한 전처리 공정으로 계면활성제 (surfactant)를 이용한 마이셀(micelle) 공정을 개발하였으며, 특히 마이셀 공정에서의 계면활성제 영향에 대해 조사하였다. 마이셀은 친수성 그룹과 소수성 그룹으로 구성되어 있어 마이셀 내부로는 물에 녹지 않는 paclitaxel을 소수성 그룹이 감싸게 되고 외부는 친수성 그룹이 되어 수용액에 용해될 수 있게 된다. 따라서 식물세포인 biomass로부터 유기용매 추출액을 건조하여 상 분리에 적합한 유기용매에 녹인 후 마이셀 형성에 적합한 계면활성제를 첨가하고 교반하여 정체시키면 물에 녹지 않는 paclitaxel이 마이셀 내부의 소수성 그룹에 감싸여 수용액 상로 이동하고 paclitaxel을 제외한 여러 가지 불순물들 (특히 lipid 성분들)은 유기용매 상에 그대로 존재하게 되어 paclitaxel과 불순물들을 효율적으로 분리하게 된다. 본 실험에서는 분리 및 정제에 많이 쓰이는 대표적인 양이온(CPC, CTMAC, LTMAC), 음이온 (SDS, AOT), 비이온 (Tween, PEG, Triton) 계면활성제의 영향에 대한 실험을 수행하였다. 양이온 계면활성제인 CTMAC (5%, w/v)을 이용한 마이셀 공정에서 가장 높은 수율 (${\sim}99%$)과 순도 (${\sim}21%$)를 얻었으며 또한 마이셀 형성 후 상 분리에 30 min 정도 소요되어 가장 단시간에 상 분리가 이루어짐을 알 수 있었다. 전처리 공정에서의 마이셀 형성 및 상 분리 방법은 불순물로부터 효과적으로 높은 순도의 paclitaxel을 고수율로 회수할 수 있어 최종 정제를 위한 전처리 공정으로 매우 유용하게 활용될 수 있을 것으로 판단된다.