Kang-Sil Lee;Sang-Ha Kim;Young-Bin Yu;Young-Kwon Kim
대한의생명과학회지
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제29권4호
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pp.314-320
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2023
The purpose of this study was to provide basic data on hepatitis B infection control in the community through the results of the hepatitis B surface antigen and antibody tests conducted at the Cheongyang-County Health Medical Center. From 2012 to 2020, we retrospectively analyzed the HBsAg, HBsAb, HBeAg, HBeAb, and HBV DNA results of 7,329 hepatitis B-related testers. Among 7,329 subjects, the HBsAg positivity rate was 1.7%, and the positivity rate according to age was the highest at 4.4% in their 30s, 4.2% in their 40s, 4.1% in their 50s, 2.0% in their 60s, 1.9% in their 70s and over, and 10 it was shown in the order of 0.3% from less than large. The HBsAb positivity rate was 43.1% for men, 38.2% for men, and 46.7% for women (P<0.001). To summarize the above results, for infection control of hepatitis B in Cheongyang-County, hepatitis surface antigen proton management is required for those in their 30s or older, and it is thought that efforts to acquire immunity are necessary for those in their 20s or younger.
Patients of chronic hepatic diseases(n=107) including chronic hepatitis caused by hepatitis B virus infections(n=31), liver cirrhosis(n=53), and hepatocellular carcinoma(n=23) were examined to ascertain genetic relationship between chronic hepatic diseases and histocompatibility antigen. Peripheral blood lymphocytes were separated from whole blood by the method of Ficoll/Hypaque gradient. Total 54 histocompatibility antigens(class I antigens: 41, class II antigens: 13) were analysed by performing of complement dependent microlymphocytotoxicity method using Terasaki's and Catholic Medical College tissue typing plates. HLA antigen frequencies were compared with those of 661 normal controls. The following results were obtained: 1. HLA antigen frequencies of HLA-Bw46, -Bw76, -Cw1, -Cw6, and HLA-DR8 in chronic hepatitis patients were shown to be higher than those in controls(P<0.01). 2. HLA antigen frequencies of HLA-Bw46, -Cw7(P<0.01), and HLA-B37, -Bw58, -Cw1, -MT1(P < 0.05) in liver cirrhosis patients were shown relatively higher frequencies than those in controls. 3. In patients with hepatocellular carcinoma, antigens of HLA-A1, -A26, -Cw3, -Cw7 and HLA-DR6 were dominantly detected. 4. There were negative associations with HLA-Cw4, and -DR4 in patients of chronic hepatic diseases(P < 0.05).
A method of dual-signal generation from two different enzymes was developed and utilized to simultaneously perform dual immunoassays in a single microwell. Two enzymes selected as tracers were horseradish peroxidase (HRP) and β-galactosidase (GAL). 3, 3', 5, 5'-Tetramethylbenzidine (TMB) and chlorophenolred-β-galactopyranoside (CPRG) as chromogenic substrates for the respective enzyme were used. Although the two enzymes showed their maximum activities at distinct pH conditions (pH 5.1 for HRP and 7.5 for GAL), the enzyme reactions were able to be concurrently carried out at pH 5.75 in a dual-substrate solution without signal loss. This performance was achieved by increasing TMB concentration two-fold, introducing potassium salt as activator of GAL reaction, and extending total reaction time 50%. The signal generation method was then used for dual-enzyme immunoassays to detect antibodies with co-immobilized Hepatitis C virus antigens (core and NS5) and a Hepatitis B virus antigen (PreS(2)) in a microwell. Dose-response curves of the assays revealed cooperativity between different antigen-antibody complex formation, which suggested that dual immunoassays can only be used for qualitative screening tests unless the antigens immobilized were spatially separated.
The complete nucleotide sequence of hepatitis B virus DNA isolated from Korean patient serum was determined and characterized, and its phylogenetic relation was then investigated. The viral genome was 3,215 base pairs long and included four well known open reading frames (i.e. surface antigens, core antigens, X protein and DNA polymerase). The sequence of the surface antigen showed that the HBV genome under investigation, designated HBV 315, was characteristic of subtype adr. A phylogenetic analysis using the total genome sequence revealed that HBV315 was grouped into genomic group C together with isolates from Japan, China, Thailand, Polynesia, and New Caledonia. The mean percent similarity between HBV315 and other HBV isolates in genomic group C was 97.25%, and that with other genomic groups ranged from 86.16% to 91.25%. The predicted amino acid sequences of HBV315 were compared with two closely related subtype adr isolates, M38636 and D12980. The results showed that the X gene product was identical in the three strains, while there were significant amino acid sequence differences between HBV315 and M38636 in the Pre-S1 and Pre-S2 regions.
To elucidate structure of group "a" epitope, mouse antibodies that express idiotype monoclonal antibody and anti-idiotype monoclonal antibody against the group specific "a" determinant were purified by hydroxyapatite column. To obtain hepatitis B surface antigens (HBsAg). HBsAg positive blood was sequencially purified by ammonium sulfate precipitation, hydroxyapatite, sepharose 4B column chromatography and ultracentrifugation. The major protein (p25) and glycoprotein (gp30) of HBsAg were isolated by concanavalin-A-sepharose 4B. The ability of p25-gp30 among the HBsAg to inhibit the idiotype-anti-idiotype reaction was dependent on conformation, since reduced and alkylated p25-gp30 virtualy lost their inhibitory capacity when compared to native HBsAg. The data suggest that hepatitis B antigen is a conformational antigen critically dependent upon the disulfide bonds of p25-gp30.
대한임상검사정도관리협회 면역혈청프로그램의 2016년 간염바이러스 항원항체검사 신빙도조사 사업은 6월과 10월에, 2017년 신빙도조사사업은 5월과 10월에 2회에 걸쳐 시행되었다. 간염바이러스 항원항체검사 신빙도조사사업은 총 10종목에 대하여 실시하였다. 저자들은 2016년 1회차 2개, 2회차 3개의 혼합혈청 검체를 각각 965기관, 962기관에 발송하였다. 참여기관은 1회차에 915 기관(94.8%), 2회차 913기관(95.0%)이었다. 2017년도에는 매 회차 3개의 혼주혈청 검체를 각각 936기관, 1,015기관에 발송하였다. 참여기관은 1회차에 920기관(98.3%), 2회차 996기관(98.1%) 이었다. Hepatitis B surface antigen에 가장 많은 기관이 참여하였고, hepatitis B surface antigen, anti-hepatitis C virus, hepatitis B envelope antigen, antibodies to hepatitis B envelope antigen, anti-hepatitis A virus 및 antibodies to hepatitis B core antigen 순으로 참여하였다. 간염바이러스 항원항체검사 신빙도조사 결과, matrix effect로 인하여 전기화학발광면역검사법을 포함한 화학발광면역검사법에서 위양성 결과가 발생하였다. Anti-hepatitis A virus검사에서 면역크로마토그래피법의 낮은 민감도는 위음성 결과를 초래하였다. 검사실의 간염바이러스 신빙도조사사업의 지속적인 참여를 통한 검사의 질 향상이 필요할 것으로 생각되었다.
Hepatitis B virus (HBV) is a major cause of liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. With recent identification of HBV receptor, inhibition of virus entry has become a promising concept in the development of new antiviral drugs. To date, 10 HBV genotypes (A-J) have been defined. We previously generated two murine anti-preS1 monoclonal antibodies (mAbs), KR359 and KR127, that recognize amino acids (aa) 19-26 and 37-45, respectively, in the receptor binding site (aa 13-58, genotype C). Each mAb exhibited virus neutralizing activity in vitro, and a humanized version of KR127 effectively neutralized HBV infection in chimpanzees. In the present study, we constructed a humanized version (HzKR359-1) of KR359 whose antigen binding activity is 4.4-fold higher than that of KR359, as assessed by competitive ELISA, and produced recombinant preS1 antigens (aa 1-60) of different genotypes to investigate the binding capacities of HzKR359-1 and a humanized version (HzKR127-3.2) of KR127 to the 10 HBV genotypes. The results indicate that HzKR359-1 can bind to five genotypes (A, B, C, H, and J), and HzKR127-3.2 can also bind to five genotypes (A, C, D, G, and I). The combination of these two antibodies can bind to eight genotypes (A-D, G-J), and to genotype C additively. Considering that genotypes A-D are common, whereas genotypes E and F are occasionally represented in small patient population, the combination of these two antibodies might block the entry of most virus genotypes and thus broadly neutralize HBV infection.
목적: 소아 만성 B형 간염 환아들에게 라미부딘으로 치료 시작 후 그 치료 효과를 평가하고 소아에서 라미부딘 장기 치료의 지속성과 안정성에 대해 검증하고자 하였다. 대상 및 방법: 1999년 3월부터 경북대학교병원 소아과에서 만성 B형 간염으로 라미부딘 치료를 시작한 후 2004년 9월 현재까지 최소 6개월 이상 치료한 48명(남 31, 여 17명, 1~18세, 평균 8세)을 대상으로 29개월(8~66개월) 추적 관찰하면서 연구를 시행하였다. 치료에 대한 효과는 치료 시작 후 혈청 ALT 치의 정상화와 HBV DNA의 음전 및 HBeAg/anti-HBe로의 혈청전환을 모두 만족할 때 치료반응이 있다고 정의하였다. Kaplan-Meier법을 이용한 누적 HBeAg 혈청전환율을 치료 시작 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3년에서 구하였다. 결과: 라미부딘으로 치료 시작 후 0.5년이 경과한 48명 중 치료 반응은 29명(60%)에서 보였고 9명(19%)에서는 HBsAg의 소실도 일어났다. 치료 시작 1년째 ALT치가 정상화된 환아는 94%, HBV DNA치가 음전된 환아는 94%, HBeAg 혈청전환까지 되어 치료 반응이 있던 환아는 34%였다. Kaplan-Meier법에 의한 누적 HBeAg 혈청전환율은 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3년째에 각각 13, 34, 50, 68, 79, 90%로 계산되었다. 특히 7세 미만의 소아 22명 중에서는 HBsAg의 소실이 8명(36%)에서 일어나 7세 이상에서 치료를 시작하는 것에 비하여 탁월한 성적을 보여주었다(p=0.002). 결론: 한국의 소아 만성 B형 간염 환아에서 라미부딘의 장기 치료는 HBeAg 혈청전환을 가속화 시키며 3년 동안 추적 관찰 결과 장기적으로 치료 반응이 지속되었다. 소아 만성 간염의 경과 관찰 중 면역제거기에 들어서면 라미부딘으로 장기간 적극적인 치료를 시도하는 것이 좋을 것으로 생각한다.
목 적 : 소아 만성 B형 간염 환아들에게 인터페론 또는 라미부딘으로 치료 후 그 치료효과를 치료 시작 후 2년 경과 시점에서 비교해 보고 소아에서 라미부딘의 장기 치료효과와 안정성에 대해 검증하고자 하였다. 방 법 : 1996년 9월부터 경북대학교병원 소아과에서 만성 B형 간염으로 치료를 시작한 후 2004년 6월까지 2년이 경과한 44명을 대상으로 하였다. 이중 23명은 알파 인터페론으로, 나머지 21명은 라미부딘으로 치료하면서 전향적 연구를 시행하였다. 인터페론 치료군과 라미부딘 치료군 사이에 성비, 나이, 치료 전 혈청 ALT 및 HBV DNA치에서는 유의한 차이가 없었다. 치료에 대한 효과는 치료 시작 2년 후 혈청 ALT 치의 정상화와 HBV DNA의 음전, HBsAg 소실 및 HBeAg 혈청전환 여부에 따라 결정하였다. 결 과 : 인터페론으로 치료한 23명 중 2년 경과 후 ALT치가 정상화된 환아는 10명(43%), HBV DNA치가 음전된 환아는 12명(52%), HBsAg이 소실된 환아는 1명(4%), HBeAg 혈청전환된 환아는 9명(39%)이었다. 이에 비해 라미부딘으로 치료한 21명에서는 각각 20명(95%), 19명(90%), 5명(24%), 13명(62%)이었다. 특히 라미부딘 치료군 중에서 7세 미만의 어린 환아 8명에서는 HBeAg 및 HBsAg 혈청전환이 각각 6명(75%)과 5명(63%)에서 일어나서 인터페론 치료군에 비해 좋은 치료효과를 보여주었다. 특히 유아기에 치료를 시작한 경우 7세 이상에 비해 HBsAg 소실이 유의하게 더 잘 일어났다. 결 론 : 한국의 소아 만성 B형 간염 환아에서 라미부딘의 장기 치료효과는 알파 인터페론에 비해 우수한 편이었고 부작용도 적었다.
B형 간염은 B형 간염 바이러스(Hepatitis B virus ; HBV)에 의해 일어나는 감염으로 B형 간염 검사는 현재 여러 가지 검사 방법과 여러 종류의 Kit, 장비로 시행되고 있는데, 이에 따라 검사 결과간의 차이가 있을 수 있다. 이러한 차이를 관리하기 위해서는 특정 표준물질을 이용하여 검사시약, 검사 시스템의 성능을 평가하는 과정이 필요하다. 본 연구는 B형 간염 검사 국가 표준물질을 이용하여 여러 다른 검사법 시약과 비교 실험을 통해 본원 핵의학과에서 사용하고 있는 RIA법 시약이 동일한 결과로 정확하게 수행되고 있는지를 알아보는데 있다. 실험에 사용된 B형 간염 검사에 대한 식품의약품안전평가원의 생물의약품 국가 표준물질은 총 5가지로 항원물질 4가지와 항체물질 1가지로 구성 되어 있다. "B형 간염 바이러스표면 항원(혼합농도패널)", "B형 간염 바이러스 표면 항원(저농도 패널)", "B형 간염 바이러스 표면 항원 86.76 IU/vial", "B형 간염 사람 면역글로불린 95.45 IU/vial", "B형 간염 바이러스 표면 항원 표준물질 0.02~11.52 IU/mL"이며, 이를 본원에서 사용하고 있는 A사, B사 두 종류의 시약으로 각각 검사 방법에 따라 실험하였다. 보다 정확한 결과를 산출하기 위해 위의 모든 실험은 반복 측정하였다. "B형 간염 바이러스 표면 항원 (혼합농도패널)"은 S/CO단위를 기준으로 RIA법을 EIA 3가지 시약, CIA 2가지 시약과 비교한 일치율이 A사는 94.4%(17/18), 83.3%(15/18), B사는 88.9%(16/18), 77.8%(14/18)였다. "B형 간염 바이러스 표면 항원 (저농도 패널)" 의 결과 EIA 2가지 시약은 7개, CIA 3가지 시약은 11개가 양성 결과를 보였고 RIA법 A사는 3개, B사는 2개가 양성 결과를 보였다. 희석검사를 시행한 "B형 간염 바이러스 표면 항원 86.76 IU/vial"에서는 A사 시약은 600배(0.14 IU/mL), B사 시약은 300배(0.29 IU/mL)까지 양성 결과를 나타냈다. "B형 간염 사람 면역글로불린 95.45 IU/vial"의 경우에서는 A사 Kit는 10,000배(9.5 mIU/mL), B사 Kit는 4,000배(24 mIU/mL)까지 양성 결과를 보였다. "B형 간염 바이러스 표면 항원 표준물질 0.02~11.52 IU/mL"에 대한 실험 결과A사 시약은 0.38 IU/mL, B사 시약은 2.23 IU/mL 농도까지 검출하여 그 이상의 농도에서 양성 결과를 나타냈다. B형 간염 검사에 대해 국가 표준물질을 통해 비교해 보았을 때 여러가지 검사법 시약과 RIA 법 시약의 결과값 경향이 동일한 성향으로 나타나고 있으며, B형 간염 항원, 항체에 대한 역가 시험의 부분에 있어서도 항원은 최대 600배(0.14 IU/mL), 항체는 최대 10,000배(9.5 mIU/mL)까지 양성 결과를 얻을 수 있었다. 따라서 본원 핵의학과에서 시행 하고 있는 RIA 방법을 통한 B형 간염 검사의 검사시약과 검사시스템은 원활한 성능으로 정확한 결과보고가 수행되고 있다고 판단된다. 하지만 저농도 패널에서 다른 검사법 시약과의 낮은 일치율은 위양성과 민감도의 측면에서 해결되어야 할 숙제로 보이며, 또한 동일한 RIA 방법 일지라도 Kit간 민감도와 특이도의 격차는 계속해서 연구되고 개발 되어야 할 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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