Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) are ubiquitous in the environment. They are highly toxigenic and carcinogenic. Probiotic bacteria isolated from fermented foods were tested to check their ability to degrade and/or detoxify PAHs. Five probiotic bacteria with distinct morphologies were isolated from a mixture of 26 fermented foods co-cultured with benzo(a)pyrene (BaP) containing Bushnell Haas minimal broth. Among them, B. velezensis (PMC10) significantly reduced the abundance of BaP in the broth. PMC10 completely degraded BaP presented at a lower concentration in broth culture. B. velezensis also showed a clear zone of degradation on a BaP-coated Bushnell Haas agar plate. Gene expression profiling showed significant increases of PAH ring-hydroxylating dioxygenases and 4-hydroxybenzoate 3-monooxygenase genes in B. velezensis in response to BaP treatment. In addtion, both live and heat-killed B. velezensis removed BaP and naphthalene (Nap) from phosphate buffer solution. Live B. velezensis did not show any cytotoxicity to macrophage or human dermal fibroblast cells. Live-cell and cell-free supernatant of B. velezensis showed potential anti-inflammatory effects. Cell-free supernatant and extract of B. velezensis also showed free radical scavenging effects. These results highlight the prospective ability of B. velezensis to biodegrade and remove toxic PAHs from the human body and suggest that the biodegradation of BaP might be regulated by ring-hydroxylating dioxygenase-initiated metabolic pathway.
비브리오 패혈증의 원인균인 V vulnificus에 대한 어류의 저항성을 증강시키기 위한 연구로써, 비브리오 백신이 경구로 투여된 넙치에서의 특이 또는 비특이적 면역반응을 조사하였다. 넙치에 대하여 UHKB (uncoated heat killed bacterin of V. vulnincus)를 20rng1kg b.w.의 농도로 경구를 통하여 4주 연속 투여 (4W) 또는 1주 동안 투여하고 2주 동안 투여하지 않다가 다시 1주 동안 투여 (1-2-lW) 하는 두 가지 방법으로 실시한 후 형성된 혈청내 특이 항체량을 비교한 결과 1-2-1W group은 4W group에는 도달하지 못하였지만 명백히 증가된 특이 항체량을 보여주었다. UHKB를 1주일에 2회씩 4주 연속 투여한 실험구가 최종 투여 후 2주 째부터 가장 높은 항체가를 보여 주었고 이러한 경향은 전 실험기간 동안 계속 유지되었다. 이러한 실험 결과는 단일세포수준에서 분석된 특이항체 생성세포 (SASC) 수의 계측에서도 확인되었는데 백신의 최종 경구투석 후 1주 째부터 대조구에 비하여 증가를 보인 실험구의 SASC수는 최종 투여 후 8주 째까지 유지되었다. 그러나 내산성으로 제조된 백신 (ECHB)은 V.vulnificus에 대한 항체생성 면역반응 그리고 인위 감염시킨 V vulnifcus (1$\times$10 CFU/kg b.w.) 생균의 체내 제거능력 분석 양쪽 모두에서 UHKB에 비하여 낮은 결과를 보여 주었다. 그러므로 넙치에 경구 투여된 UHKB는 V vulnificus의 오염을 억제 할 수 있는 효과적인 방법으로 확인되었으나 내산성으로 제조된 ECHB는 면역반응 증가를 유도하지 못하는 것으로 나타났다.
Objective: The aim of this study was to examine shifts in the composition of the bacterial population in the intestinal tracts (ITs) of weaning piglets by antibiotic treatment using high-throughput sequencing. Methods: Sixty 28-d-old weaning piglets were randomly divided into two treatment groups. The Control group was treated with a basal diet without antibiotics. The Antibiotic group's basal diet contained colistin sulfate at a concentration of 20 g per ton and bacitracin zinc at a concentration of 40 g per ton. All of the pigs were fed for 28 days. Then, three pigs were killed, and the luminal contents of the jejunum, ileum, cecum, and colon were collected for DNA extraction and high-throughput sequencing. Results: The results showed that the average daily weight gain of the antibiotic group was significantly greater (p<0.05), and the incidence of diarrhea lower (p>0.05), than the control group. A total of 812,607 valid reads were generated. Thirty-eight operational taxonomic units (OTUs) that were found in all of the samples were defined as core OTUs. Twenty-one phyla were identified, and approximately 90% of the classifiable sequences belonged to the phylum Firmicutes. Forty-two classes were identified. Of the 232 genera identified, nine genera were identified as the core gut microbiome because they existed in all of the tracts. The proportion of the nine core bacteria varied at the different tract sites. A heat map was used to understand how the numbers of the abundant genera shifted between the two treatment groups. Conclusion: At different tract sites the relative abundance of gut microbiota was different. Antibiotics could cause shifts in the microorganism composition and affect the composition of gut microbiota in the different tracts of weaning piglets.
Enterococcus faecalis, a gram-positive bacterium, has been implicated in endodontic infections, particularly in chronic apical periodontitis. Proinflammatory cytokines, including tumor necrosis factor-$\alpha$ (TNF-$\alpha$), are involved in the pathogenesis of these apical lesions. E. faecalis has been reported to stimulate macrophages to produce TNF-$\alpha$. The present study investigated the mechanisms involved in TNF-$\alpha$ production by a murine macrophage cell line, RAW 264.7 in response to exposure to E. faecalis. Both live and heat-killed E. faecalis induced high levels of gene expression and protein release of TNF-$\alpha$. Treatment of RAW 264.7 cells with cytochalasin D, an inhibitor of endocytosis, prevented the mRNA up-regulation of TNF-$\alpha$ by E. faecalis. In addition, antioxidant treatment reduced TNF-$\alpha$ production to baseline levels. Inhibition of extracellular signal-regulated kinase (ERK) and p38 mitogen-activated protein (MAP) kinase also significantly attenuated E. faecalis-induced TNF-$\alpha$ expression by RAW 264.7 cells. Furthermore, activation of NF-${\kappa}B$ and AP-1 in RAW 264.7 cells was also stimulated by E. faecalis. These results suggest that the phagocytic uptake of bacteria is necessary for the induction of TNF-$\alpha$ in E. faecalis-stimulated macrophages, and that the underlying intracellular signaling pathways involve reactive oxygen species, ERK, p38 MAP kinase, NF-${\kappa}B$, and AP-1.
Pediococcus pentosaceus JWS 939 (JWS 939) is a nonpathogenic bacteriocin-producing probiotic isolated from the duck intestine. This study assessed the immunomodulatory effects of JWS 939 and compared them with those of Lactobacillus rhamnosus GG (LGG), a well-known immune enhancer. The immune-enhancing effects of JWS 939 were measured by measuring the production of nitric oxide (NO) and cytokines in C57BL/6 mouse peritoneal macrophages. In addition, to assess the immune enhancement abilities of JWS 939, in vivo, a Listeria monocytogenes challenge mice model was used. The results showed that heat-killed JWS 939 induced more NO and interleukin (IL)-$1{\beta}$ production in mouse peritoneal macrophages than in LGG, and that oral administration of viable JWS 939 in mice increased more NO, IL-$1{\beta}$, and tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$ level than in LGG in serum upon L. monocytogenes challenge. In addition, mice fed with JWS 939 had a longer survival time after lethal challenge with L. monocytogenes, and these effects were stronger than those induced by LGG. Collectively, P. pentosaceus JWS 939 is a remarkable strain that, by releasing bacteriocin and enhancing host immune responses, may have potential as a duck feed additive to suppress pathogens.
Molecular insights on the role of plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) in potato tuberization are reported in the present study. The PGPRwere isolated from the soil collected from potato fields of Highland Agricultural Research Centre, Pyeongchang, Korea and they were identified to the genus level based on the 16S rRNA sequence analysis. These PGPR were heat-killed, filtered and the filtrates were addedindividually at a concentration of $10^7\;cfu\;mL^{-1}$ in MS (Murashige and Skoog's) medium supplemented with 7% (w/v) sucrose to study their influence on in vitro potato tuberization. Tuber initiation occurred early in untreated control, while tuber growth was pronounced in case of PGPR treatments. The control explants showed tuber formation as a result of sub-apical swelling of stolons while several sessile tubers formed directly in the axils of nodal cuttings in case of PGPR treatments, which is an indication of strong induction for tuberization. Theexplants cultured on MS medium supplemented with bacterial isolate 6 (Bacillus firmus strain 40) showed highest average tuber yield (Ca. 12.56 g per treatment) after 30 days of culture, which was 3 folds increase over the untreated control. A significant increase in lipoxygenase (LOX1) mRNA expression and activity of LOX enzyme were also detected in the tubers induced on PGPR treatments as compared to untreated control. This LOX expression level correlated with increased tuber growth and tuber yield. Further studies focused on the role of bacteria cell wall components, growth regulators and signal molecules released by PGPR are under investigation to elicit clues for PGPR-mediated signal pathway controlling potato tuberization.
It has been suggested that probiotics could be useful for the prevention of symptomatic relapse in patients with inflammatory bowel disease (IBD). Interleukin (IL)-8 has been well recognized as one of the pro-inflammatory cytokines that could trigger inflammation and epithelial barrier dysfunction. In this study, the anti-inflammatory effects of probiotics were investigated using a human epithelial cell line (HT-29). Probiotics from infant feces and kimchi were tested for their cytotoxicity and effects on adhesion to epithelial cells. The present results show that seven strains could form 70 % adhesion on HT-29. The probiotics used in this study did not affect HT-29 cell viability. To screen anti-inflammatory lactic acid bacteria, HT-29 cells were pretreated with live and heat-killed probiotics, and lipopolysaccharide (LPS) ($1{\mu}g/mL$) was then added to stimulate the cells. The cell culture supernatant was then used to measure IL-8 secretion by ELISA, and the cell pellet was used to determine IL-8 and toll-like receptor (TLR-4) mRNA expression levels by RT-PCR. Some probiotics (KJP421, KDK411, SRK414, E4191, KY21, and KY210) exhibited anti-inflammatory effects through the repression of IL-8 secretion from HT-29 cells. In particular, Lactobacillus salivarius E4191, originating from Egyptian infant feces, not only decreased IL-8 mRNA expression, but also decreased TLR-4 expression. These results indicate that Lactobacillus salivarius E4191 may have a protective effect in intestinal epithelial cells.
프로바이오틱스는 위장관에서 고유의 생리활성을 발휘하기 때문에 섭취 후 최대한 장까지 사멸하지 않고 도달하도록 하는 코팅이나 encapsulation 기술이 개발되어 왔다. 이와 함께 제품의 형태도 여러 종류의 유산균이 포함된 multispecies probiotics가 선호되는 추세이며 높은 생균수를 가지는 제품들이 개발되고 있다. 프로바이오토틱 시장은 현재까지 생균 중심의 제품들이 대부분을 차지하고 있으나 사균체 제품 또는 박테리오신과 같은 항균물질을 포함하는 제품 또한 다양한 분야에 적용될 수 있고 생균제와 비교하여 여러가지 장점을 가지고 있어 관련 제품개발이 이루어져야 할 것으로 보인다. 프로바이오틱 제품들은 살아 있는 생균제로서 질환특이적 효능을 바탕으로 개발되고 있으나 질환개선 효능 표시에 대한 규제가 강화되고 있어 이에 대한 대비가 필요하다. 이를 위해 제품에 사용된 strain의 동정, 안전성 및 기능성에 대한 과학적 증거가 제시되어야 할 것이며 임상을 통한 안전성과 효능에 대한 검증 자료가 필요할 것으로 보인다. 이와 같은 프로바이오틱스 제품의 헬스클레임에 대한 엄격해진 검증은 앞으로 프로바이오틱 시장에 큰 영향을 미칠 것으로 판단된다.
이 연구에서는 탄산칼슘 형성 박테리아의 내생포자를 접종한 알지네이트 겔과 포자현탁액 형태의 균열치유제를 모르타르에 첨가하여 균열치유성능을 비교, 분석함으로써 균열치유제 제조방법별 균열치유성능을 분석하였다. 또한 박스형 암거 형태의 실 구조물에 적용하여 실험실 환경뿐만 아니라 개발된 균열치유제가 실제 현장에 적용될 수 있는 환경을 조성하여 실구조물 스케일에서 균열치유성능을 검증하고자 하였다. 건조 방식을 달리한 두 가지 형태의 알지네이트 겔로 구성된 균열치유제를 분석한 결과, 건열건조 방식의 균열치유제는 균열치유 성능을 나타내었으나, 동결건조 방식의 경우 얼음 결정에 의해 다수의 포자가 사멸되어 균열치유성능을 잃는 것으로 나타났다. 실스케일 구조물의 균열부에서 추출된 균열치유 추정물질의 SEM 사진과 XRD 패턴 분석 결과 균열치유제에 적용된 균열치유 미생물이 생성한 탄산칼슘 결정 중 하나인 calcite인 것으로 나타났으며, 미생물에 의한 균열치유메커니즘이 실구조물에서 구현될 수 있음을 확인하였다.
여드름 완화 효과를 갖는 천연 약용식물 추출물을 개발하기 위하여 여드름 원인균에 대한 항균 활성 및 항염증 효과를 다양한 추출물을 대상으로 분석하였다. 검색 결과 얻어진 후보 소재들 중, 비교적 높은 항균 활성을 갖는 보골지, 당후박과 항염증 효과를 갖는 목향, 구절초 추출물을 대상으로 선정하였고 이후의 실험을 진행하였다. 보골지 (Psoralea corylifolia L., AC-1), 당후박(Magnoliae officinalis. AC-2) 목향(Inula helenium L., ACF-1), 구절초(Chrysanthemum zawadskii var. latilobum, ACF-2) 추출물 및 복합소재 (AC)는 $50{\mu}g/mL$ 이하에서 세포 독성이 없는 것으로 확인되었다. 보골지, 당후박 추출물 및 복합소재의 경우 여드름 유발 원인균인 Propionibacterium acnes (P. acnes)에 대해 양성대조군으로 사용한 10 % salicylic acid 대비 각각 약 2.8배, 2.5배, 3.2배의 높은 항균 효과를 보였다. 또한 Staphylococcus aureus (S. aureus) 에 대해서도 당후박 추출물과 복합소재의 경우 양성 대조군으로 사용한 10 % Methylparaben 대비 각각 약 1.4배, 1.5배 높은 항균 효과를 보였다. 목향 구절초 추출물 및 복합소재의 경우 열에 의해 사멸시킨 P. acnes에 의해 활성화된 THP-1 세포의 IL-8 발현을 $50{\mu}g/mL$ 농도에서 각각 27%. 38%, 44% 저해하였고 TNF-$\alpha$ 발현을 $50{\mu}g/mL$ 농도에서 각각 90%, 88%, 90%로 크게 저해하였다. 이러한 항균, 항염증 활성을 보이는 보골지, 당후박, 목향, 구절초 추출물의 복합 소재를 이용하여 여드름 완화 효과를 갖는 화장품으로의 개발이 가능할 것으로 보인다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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