발정주기와 상관없이 CIDR을 삽입하는 날에 50 mg progesterone, 2.5 mg estradiol benzoate를 근육주사하였다. CIDR 삽입 후 4, 5일에 28 AU FSH (Antorin R10)을 4일 동안 감량법으로 주사하였다. 6, 7회 FSH 주사 후 25 mg, 15 mg $PGF_2{\alpha}$를 각각 주사한 다음, CIDR는 7회 FSH 주사 후 제거하였다. 1회째 $PGF_2{\alpha}$ 주사 후 48시간에 $200{\mu}g$ GnRH를 주사하였다. 공란우는 발정확인 후 12시간 간격으로 3회 인공수정을 실시하였으며, 수정란의 채란은 발정확인 후 7일째 회수하였다. 과배란 처리된 공란우에서 회수된 총 난자수, 이식가능 수정란, 퇴행란 및 미수정란은 각각 $11.6{\pm}7.9$, $5.5{\pm}4.4$, $3.0{\pm}3.3$ 및 $2.6{\pm}4.1$개였다. 1~2산의 공란우($8.9{\pm}1.9$)보다 3~5산의 공란우($14.3{\pm}1.3$)에서 총 난자수가 유의적으로 많았다(P<0.05). 회수된 정상 수정란 수도 3~5산의 공란우($7.3{\pm}0.8$)에서 6산 이상의 공란우($3.7{\pm}1.5$)보다 유의적으로 많았다(P<0.05). 회수된 총 난자수와 정상수정란도 각각 가을($10.1{\pm}1.8$, $4.5{\pm}1.1$)과 겨울($6.3{\pm}1.8$, $3.3{\pm}1.1$)보다 여름($16.4{\pm}2.3$, $8.1{\pm}1.4$)에 유의적으로 많았다(P<0.05). 이식가능 수정란은 겨울($3.0{\pm}1.0$)보다 여름($7.6{\pm}1.3$)에서 유의적으로 많이 회수하였다(P<0.05). 결론적으로 공란우의 산차, 과배란 처리계절은 한우수정란 생산에 영향을 미치는 것으로 나타났다.
This study was carried out to establish an effective embryo production system by analyzing several factors ifluencing in vivo embryo production in Hanwoo. The results are summarized as follows : 1. The number of total, fertilized and transferble embryos by gonadotropins were no significant difference among PMSG, FSH and FSH+PMSH. 2. The numbers of recovered and transferable embryos by type of FSH were no significant difference in both FSH-P and FOLLTROPIN-V but significant difference with SUPER-OV(p<0.01). 3. The numbers of recovered and transferable embryos by age of donor were highest in 5 years old. 4. The recovered number of transferable embryos was highest in the cows at the 1 st and 3rd parity but significantly lower in hifers and the cows at more than 6th parities(p<0.01). 5. The numbers of trasferable embryos by postparient were more<270 days than > 270 days in significant difference(p<0.01). 6. Embryo production after treatment of repeated super ovulation was no significant difference. 7. Recovered and trasferable embryos production after treatment of repeated super ovulation interval was highest 81∼100 days and significant difference(p<0.01). 8. The numbers of recovered and transferable embryos by seasons were no significant difference.
This study was performed in order to determine optimum flushing solution using the direct embryo collection (DEC). Donors, at random stages of the estrous cycle, received a CIDR. 7 days later, 200 mg FSH was treated with 40, 30, 20, 10 mg FSH levels in declining doses twice daily by intramuscular injection for 4 days. On the 3$^{rd}$ day administration of FSH, 25 mg $PGF_2{\alpha}$ was administered and CIDR was withdrawn. After FSH injections were complete, donors were artificially inseminated twice at 12 hr intervals. The donor cattle received 250 ${\mu}g$ GnRH at time of 1$^{st}$ insemination and embryos were recovered 8 days after the 1$^{st}$ insemination. Embryo collection from superovulated donors were performed to flushing by DEC and conventional method. As a results, the average number of recovered embryos were significantly higher as 19.1${\pm}$1.40 with DEC method than 12.0${\pm}$0.44 with conventional embryo collection method, respectively (p<0.05). Also, The average number of transferable embryos were significantly higher (p<0.05) as 15.8${\pm}$1.72 with DEC method than 6.9${\pm}$0.35 from conventional embryo recovery procedures. Meanwhile, number of recovered embryos and number of recovered transferable embryos following the number of flushing times until 6${dr}$ flushing were significantly higher as 8.6${\pm}$0.53 and 8.6${\pm}$0.53 from 2$^{nd}$ flushing time than other groups (p<0.05). No. of Ear. B stage embryos were significantly higher as 3.9${\pm}$0.90 and 3.9${\pm}$0.90 with 2$^{nd}$ flushing time in total collected embryos and transferable embryos (p<0.05). Com M stage embryos were significantly higher as 3.7${\pm}$1.00 in 2$^{nd}$ flushing time and as 2.2${\pm}$0.76 in 3$^{rd}$ flushing time for recovered embryos (p<0.05). In transferable embryos, Com. M stage embryos were significantly higher (p<0.05) as 3.7${\pm}$1.00 in 2$^{nd}$ flushing time and as 2.2${\pm}$0.76 in 34$^{dr}$ flushing time, also. No. of degradation embryos was significantly higher as 2.2${\pm}$0.72 in 5${rd}$ flushing time, On the other hand, degradation embryos was not observed in transferable embryos (p<0.05). In conclusion, these results suggest that DEC method should effective methods for production of in vivo embryos using less flushing solution following perform until 4$^{rd}$ flushing time than conventional embryo collecting method. Also, it might be effectively collection of transferable embryos following more less procedure times compared to conventional embryo recovery methods.
This study was performed in order to simplify the operation and minimize stress of donor and be readily available in the field with low cost and high quality embryos using the Direct Embryo Collection (DEC). Donors, at random stages of the estrous cycle, received a CIDR. 7 days later, 200 mg FSH was treated with 40, 30, 20, 10 mg FSH levels in declining doses twice daily by intramuscular injection for 4 days. On the 3rd day administration of FSH, 25 mg $PGF_2{\alpha}$ was administered and CIDR was withdrawn. After FSH injections were complete, donors were artificially inseminated twice at 12 hr intervals. The donor cattle received 250 ${\mu}g$ GnRH at time of 1 st insemination and embryos were recovered 8 days after the 1st insemination. Embryo collection from superovulated donors was performed to flushing by non-surgical methods of 3-way, 2-way and DEC (l-way). The average number of recovered embryos were 11.25${\pm}$0.63, 12.5${\pm}$0.65 and 11.75${\pm}$0.48 from operations of 3-way, 2-way and DEC methods, respectively. There were no significant differences among the embryo collection methods. Also, The average number of transferable embryos were 6.25${\pm}$0.48, 7.25${\pm}$0.48 and 7.25${\pm}$0.63 from each embryo collection procedures. The number of transferable embryos was no differences among the 3-way, 2-way and DEC methods, respectively. Meanwhile, the ratio of transferable embryos for all recovered embryos from DEC methods was higher as 61.7 % than 55.6 %, 58 % from methods of 3-way, 2-way. And the flushing solution required for recovering embryos by DEC method was significantly lower as 0.28${\pm}$0.32 1 than 1.8${\pm}$0.12 1, 1.75${\pm}$0.10 1 from 3-way, 2-way methods (p<0.05). Also, the time required for recovering embryos by DEC methods was significantly lower as 27${\pm}$2 min than 51${\pm}$3, 45${\pm}$2 min, respectively (p<0.05). In conclusion, these results suggest that DEC method for embryo collection may be effectively used for production of in vivo embryos using less flushing solution and, it might be effectively available in the field compared to conventional embryo recovery methods using 3-way or 2-way balloon catheter.
Effects of recombinant bovine somatotropin (bST) on plasma hormonal concentration, embryo quality, and pregnancy rate were examined during the superovulation and synchronization treatment in donor and recipient cows. Hanwoos (Korean native beef cattle) were treated with controlled internal drug release (CIDR) combined with bST (CIDR+bST) or without bST (CIDR) as donor cows. The embryos recovered from donors were transferred into Holstein recipient heifers treated with bST (CIDR+bST) or without bST (CIDR) for synchronization. The correlation between IGF-I and P4 showed a positive pattern in the CIDR+bST group (r=0.44, p<0.01), but a negative pattern was shown in the CIDR group (r = -0.59, p<0.02) at day 7 of estrous cycles. Although the number of recovered, transferable, and degenerated embryos was not different, quantities of grade 1 (excellent) embryos in CIDR+bST group were significantly higher than those of the CIDR group (p<0.01). The pregnancy rate was higher in the CIDR+bST recipient group compared to CIDR group (p<0.05), when the embryos were recovered from the donors treated with CIDR. However, the pregnancy was maintained highly in both recipient groups, when the embryos were produced by CIDR+bST treated donors. It can be concluded that bST administration combined with CIDR is an effective method for superovulation and synchronization treatment to stabilize plasma hormonal levels, to obtain excellent quality of embryos, and to get higher pregnancy rate.
Up-to-date artificial insemination (AI) using frozen sperm consider as the most widely using technology for improvement of Korean Native Cow (Hanwoo) embryo production. However, it is time consuming, required at least 15~20 years to make more than 6 generations, and their offspring number is limited. To overcome such limitations, superovulation and in vitro fertilization have been developed. For superovulation, the number of produced embryos are not enough for commercialization and donor cows need rest period. This led to use of slaughterhouse ovary for in vitro fertilization, but it is impossible to repeat the collection from the same individual and it only can improve the genetic merits of offspring for one generation. Production of embryos using Ovum Pick-Up (OPU) technique, where oocytes can be repeatedly collected from living elite donor, might overcome these limitations. In this study, we investigated the possibility of using OPU technique from donors at different age and different session periods for mass-embryo-production. Oocytes were collected from 26 donor cows twice per week, 3 - 4 months per year, between 2013 and 2016. Results showed that, the average number of embryo produced in first year used donor was significantly higher than that in second year used donor ($3.89{\pm}2.85$ vs $3.29{\pm}2.70$), however, there was no significant difference between third year used donor ($3.51{\pm}3.32$) and other groups. Taken together, our data showed that repeated using of donor up to three years is possible for in vitro embryo mass-production. Moreover, OPU can be used as suitable embryo producing technique for livestock breed improvement.
본 연구는 한우와 홀스타인 젖소에서 연속적인 다배란 처리 시 효율성 및 부작용에 대한 문제점을 연구하고자 다른 종간 다배란 처리효과를 비교, 조사하였다. 연속적인 다배란 처리를 위하여 estradiol benzoate(EB)와 CIDR plus, FSH 호르몬을 이용하여 한우에서는 17두, 젖소에서는 9두를 2회 이상 반복 이용하였다. 다난포 발생을 위해서는 FSH 호르몬을 이용하고 호르몬 처리 동기화를 위해서는 CER plus 기구를 질 내 삽입하였으며, 주요 조사 항목으로는 번식기관의 문제점, 배란 효율, 회수된 수정란 수, 우수 수정란 수 등을 분류하고, 종합적으로 종간 연속적인 다배란 효과를 비교, 조사하였다. 한우에서는 17두 중 4두(23.5%)에서 자궁경관의 협착이 발생하였고, 자궁 내에 손상이 발생하여 채란이 되지 않는 경우도 4두(23.5%)의 발생이 조사되었으나, 상대적으로 젖소에서는 9두 중 4두에서 일시적으로 배란이 전혀 일어나지 않는 경우가 있었다. 연속 처리 후 채란된 수정란의 수를 종합해 보면, 젖소에서는 평균 $4.3{\pm}3.4$개, 한우에서는 $2.7{\pm}2.5$개였으며, 종간 호르몬 효율과 연관된 배란율 조사에서는 한우에서는 89.7%, 젖소에서는 80.4%의 성적을 보였다. 또한, 3회까지 연속 다배란 처리를 한 결과, 한우나 젖소에서 채란된 수정란의 수는 비슷한 수준으로 채란되었다. 이와 같은 성적을 종합해 볼 때 EB제나 CIDR plus, FSH를 이용하여 1개월 주기로 연속적인 수정란 채란을 위한 다배란 처리가 소의 종에 무관하게 가능하다고 사료되지만 일시적으로 배란이 일어나지 않는 소에 대한 문제나 번식기관의 손상, 채란되는 수정란의 수가 적다는 것에 더 많은 연구가 필요하다고 사료된다.
본 연구는 $2001{\sim}2005$년(5년간) 제주도에서 사육중인 제주 한우와 흑우를 체내 수정란의 생산과 수정란 이식 기술을 통하여 조기 증식하고자 실시하였다. 한우 고등 등록우 286두와 흑우 경산우 69두(총 355두)에 대하여 발정 주기에 관계없이 CIDR를 질내에 삽입 후 7일째부터 성선 자극 호르몬($Folltropin^{(R)}-V$) 400 mg을 50 mg씩 균등하게 나누어 4일간 12시간 간격으로 근육주사하였다. 투여 6회째에 CIDR를 제거하였으며, 동시에 $PGF_{2{\alpha}}$ 25mg을 근육 주사하여 과배란을 유기하였다. 공란우의 인공수정은 $PGF_{2{\alpha}}$투여 후 발정을 확인하고 12 시간 간격으로 3회 인공 수정하였으며, 2회 인공 수정시 GnRH $250{\mu}g$을 근육 주사하였다. 수정란 회수는 1차 인공 수정 후 $7{\sim}8$일째에 비외과적 방법으로 채란하였다. 수란우는 CIDR를 7일간 삽입하였다가 제거하는 동시에 $PGF_{2{\alpha}}$ 25 mg을 근육 주사하여 공란우와 발정을 동기화 시켰다. 수정란 이식은 발정이 동기화된 수란우 1,219두에 대하여 6명의 수정란 이식 시술자가 비외과적 방법으로 황체가 존재하는 자궁각에 이식하였다. 한우 및 흑우 공란우의 평균 회수 총 난자수 및 이식 가능 수정란 수는 각각 7.4개 및 4.7개 였으며, 회수 총 난자수는 2 품종간에 차이가 없었으나, 이식 가능 수정란 수는 한우(5.0개)가 흑우(3.5개)에 비해 많았다(p<0.05). 공란우의 반복 과배란 처리에 따라 흑우에서는 과배란처리 두수 대비 수정란 채란우 비율이 감소되었으며(p<0.05), 한우에서는 회수 총 난자수 및 이식 가능 수정란 수의 감소가 나타났다(p<0.05). 과배란 처리 계절에 따른 수정란 회수 성적은 여름(5.6개)이 겨울(2.9개)에 비해 이식 가능 수정란의 수가 많았다(p<0.01). 수정란 이식 후 수태율은 평균 40%를 나타내었으며, 공란우의 품종간 차이가 없었으며, 이식년도가 2001년에서 2004년으로 경과될 때 수태율이 증가하였으며(p<0.05), 수정란 이식 시술자에 따른 수태율의 차이가($33.0{\sim}45.9%$) 인정되었다(p<0.01). 본 연구의 결과는 제주 한우 및 흑우에서 CIDR를 이용한 과배란 처리 및 수란우의 발정동기화 처리는 한우 체내 수정란의 안정적인 생산과 수란우의 준비가 가능함을 보여 주었다.
The objective of this study was to investigate the relationship between body weight, body condition score (BCS), blood urea nitrogen (BUN), glucose, cholesterol and number of transferable embryos for the purpose of improving reproductive performance in Hanwoo donors. Seventy five cows, at random stages of the estrous cycle, received a CIDR together with injection of 1mg estradiol benzoate and 50 mg progesterone, and gonadotropin treatment begann. Four days later, the animals were superovulated with a total of 28AU FSH (Antorin, 2AU = 1 ml) administered twice daily in constant doses over 4 days. On the 3rd administration of FSH, CIDR was withdrawn and 25 mg $PGF_2{\alpha}$ was administered. Cows were artificially inseminated twice after estrous detection at 12 hr intervals. The cows received $100{\mu}g$ GnRH at the time of 1st insemination. Embryos were recovered 7 days after the 1st insemination. In conclusion, cows with body weight < 400, 400~450 and > 450kg had number of transferable embryos of $4.2{\pm}1.7$, $6.1{\pm}2.7$ and $4.8{\pm}2.6$, cows with BCS <2.25, 2.25~2.75 and ${\geq}2.75$ had number of transferable embryos of $4.6{\pm}1.6$, $5.7{\pm}2.4$ and $5.1{\pm}2.7$ respectively. These data indicate that a body weight and BCS for superovulation of CIDR-treated Korean native cows does not affect the embryo yield.
발정 주기와 상관없이 CIDR를 삽입하는 날에 2.5 mg estradiol benzoate, 50 mg progesterone을 주사하였다. CIDR 삽입 후 4일 동안 FSH를 감량법으로 12시간 간격으로 주사하였으며, FSH 주사 5, 6회째에 $PGF_{2{\alpha}}$를 투여했다. 1회째 $PGF_{2{\alpha}}$ 주사 24시 간 후 CIDR를 제거하고 GnRH를 주사하였다. 공란 우들을 1번째 $PGF_{2{\alpha}}$ 주사 후 60시간과 72시간에 수정을 시켰다. 인공수정 7일 후 회수된 수정란을 수정란 이식 때 prosesterone 농도를 증가시켜 수태율을 향상시키기 위해 수란우에 hCG 1,500 IU를 주사하였다. 수란우의 발정 동기화는 (1) 자연 발정우(natural), (2) 직장 검사로 황체가 존재하는 수란우에 25 mg $PGF_{2{\alpha}}$ 처리구($PGF_{2{\alpha}}$), (3) CIDR를 질내에 7일간 삽입하고 제거하는 당일 $PGF_{2{\alpha}}$ 25 mg을 투여하는 방법(CIDR + PG법) 및 (4) CIDR를 삽입하고 2.5 mg estradiol benzoate, 50 mg progesterone 주사 후 7일 후 제거하는 당일 $PGF_{2{\alpha}}$ 25 mg 투여 후 뒷날 estradiol benzoate 투여(E/P/CIDR/$PGF_{2{\alpha}}$/E) 방법으로 발정을 유도하였다. 계절에 따른 과배란 반응은 회수된 수정란들은 계절간에 유의적 차이가 보여주지 못하였다(봄; 4.18, 여름; 4.36, 가을; 5.50, 겨울 4.38). 신선란(43.4%) 이식 후 수태율은 동결란(17.2%)보다 높게 나타났다. 신선란을 이식하여 hCG 처리한 한우 수란우의 수태율(45.7%)은 대조구(35.3%)보다 약간 높게 나왔다. 그러나 동결란을 수란우에 이식하였을 때, 대조구의 수태율(25.0%)이 hCG 처리구(16.0%)보다 높게 나타났다. 수정란 이식 후 -2, -1, 0 및 1일째의 수란우와 수정란의 동기화 일에 따른 수태율은 20.0, 54.0, 30.3% 그리고 26.3%였다. 자연 발정 수란우, $PGF_{2{\alpha}}$, CIDR/ $PGF_{2{\alpha}}$, E/P/CIDR/ $PGF_{2{\alpha}}$/E로 발정된 수란우들의 수태율은 각각 35.3, 48.0, 29.0 및 40.0%로 나타났다. 하지만 이들 동기화 방법에 따른 유의차는 없었다. 수정란 이식 후 태어난 수송아지와 암 숫송아지의 임신 기간은 각각 288일과 290.5일이었으며, 생시 체중은 각각 28.3과 30.0 kg이었다. 결론적으로 계절에 따른 과배란 반응의 변동은 없었고, hCG 처리, 수란우와 수정란의 동기화, 동기화 방법에 따른 수태율의 향상을 보여주지 못하였다. 향후에는 수정란 이식의 산업화를 위해서는 수정란의 동결과 수태율 향상에 관심을 가져야 할 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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