• 자연과학논문집
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• 제14권1호
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• pp.7-24
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• 2004

Thiol peroxidase인 E.coli AhpC의 아미노산 서열을 database를 이용해 분석하여, TPx와 상동성이 있는 새로운 형태의 Thiol peroxidase를 찾아내었다. 그 중 병원성을 갖는 박테리아인 Haemophilus Influenzae에서 존재하는 TPx와 유사하고, GRX와 함께 fusion 되어있는 새로운 형태의 단백질의 유전자를 클로닝하여 E.coli에서 과발현시켜 분리정제 하였다. 정제된 TPx-GRX는 환원제로 thiol 성분을 갖는 MCO system(Fe, DTT, Oxygen)에 의하여 Glutamine Synthetase(GS)의 불활성화를 방어하는 티올 특이적 향산화활성을 갖고, peroxides를 제거하는 peroxidase 활성을 갖는 것을 밝혔다. 이 결과들로부터 TPx-GRX는 새로운 형태의 Thiol perosidase임을 알 수 있었다. 더 나아가서 이 결과들은 TPx-GRX가 병원성 박테리아에서 oxidative stress를 막는 생리적으로 중요한 역할을 할 것이라는 것을 시사한다.

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제50권2호
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• pp.143-150
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• 2007

목 적: 인체의 항 PRP IgG 항체를 정량적으로 측정하기 위한 방법인 표준화된 효소면역법의 타당성을 연구하는 것이 목적이다. 방 법: 인체의 항 PRP IgG 항체를 정량적으로 측정하기 위한 방법인 표준화된 효소면역법의 타당성을 연구하기 위해 특이성, 반복성, 실험실내 정밀성, 정확성, 최소 정량 한계, 및 안정성을 평가하였다. 결 과: 본 연구에서 사용한 효소면역법은 검사에 사용된 항원(HbO-HA)에 특이성을 보였으며 반복성, 실험실내 정밀성 등의 정밀성은 허용기준(반복성 : $CV{\leq}15%$, 실험실내 정밀성 : $CV{\leq}20%$)을 만족하였다. 정확성은 28개 혈청을 대상으로 한 RABA 정량결과와 효소 면역법 정량결과 비교시험에서 높은 상관계수를 보였고 첨가 회복 검사 결과 허용기준($100{\pm}20%$)을 만족하였다. 최소 정량 한계 시료 정량결과의 정밀성과 정확성은 공칭 양의 -14.7~-4.7%로 모두 허용기준(정밀성 : $CV{\leq}25%$, 정확성 : ${\pm}25%$)을 만족하였다. 안정성 중 냉 해동 안정성과 단기 온도 안정성도 모두 허용기준(${\pm}20%$ 이내)을 만족하였다. 결 론: 이상의 결과로 이화여자대학교 의과학연구소 백신효능연구센터에서 시행한 본 효소 면역법은 혈액 내에 존재하는 항 PRP IgG 항체를 정량적으로 측정하는 시험법으로 적절하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제31권2호
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• pp.103-110
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• 2003

그람 양성세균에서 PyrR단백질에 의하여 피리미딘의 생합성이 조절된다는 발견을 바탕으로 하여, Synechocystis sp.PCC6803과 Haemophilus influenzae의 PyrR orthologue 유전자를 Bacillus subtilis에서 형질전환 시켜 피리미딘 생합성의 조절 유무를 조사하였다. Synechocystis sp.PCC6803과 H. influenzae의 PyrR orthologue유전자를 pUC19과 T-vector에 클로닝 한후 pKH1, pKH2, pHPSK1, pHPSK2으로 각각 명명하였다. 이것을 다시 Escherichia. coli와 B. subtiius용 shuttle vector인 pHPS9에 클로닝 하여 pKH3, pKH4, pHPSK3, pHPSK4로 각각 명명하였다. B. subtilis DB104Δ PyrR에 pKH3, pKH4, pHPSK3, pHPSK4을 형질전환후 ATCase 활성을 측정결과 pHPSK3을 가진 균주만 피리미딘에 의한 조절작용이 일어난다는 사실을 통하여, H. influenzae의 PyrR orthologue 유전자의 선도 부분에 조절에 관여하는 미지의 부분이 있음을 예측할 수 있었다. 서로 다른 유래의 PyrR orthologue단백질을 정제하기 위하여 pET14b에 클로닝후 pKH5, pHPSK5으로 각각 명명하였다. SDS-PAGE로 분석한 결과 각각 약 18 kDa과 21 kDa의 분자량을 나타내었다. 정제된 PyrR orthologue 단백질의 UPRTase 활성을 측정한 결과 H. infuenzae의 PyrR orthologue 단백질은 UPRTase 활성을 나타내었으며 다양한 pH에서 측정한 결과 pH 5에서 가장 높은 활성을 나타내었다. 반면에, Synechocystis sp. PCC6803의 PyrR orhologue 단백질은 UPRTase 활성을 나타내지 않았다. 여러 가지 균주의 PyrR 아미노산 서열을 비교한 계통수 분석은 PyrR 단백질의 조절기작과 어느 정도 연관됨을 시사해 주었다.

• 대한약학회:학술대회논문집
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• 대한약학회 2002년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2
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• pp.147-148
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• 2002

Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae and Neisseria meningitidis are encapsulated bacteria which encounter the respiratory mucosa and cause nasopharyngeal carriage that may lead to mild mucosal infections or severe invasive disease. (omitted)

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제13권3호
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• pp.469-472
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• 2003

A method that effectively precipitates capsular polysaccharide of Haemophilus influenzae type b (polyribosylribitol phosphate, PRP) conjugated to tetanus toxoid (TT), PRP TT in a liquid vaccine has been developed to measure free PRP present in TT-conjugate vaccine. The method involves adding anti-TT antibody and ammonium sulfate to precipitate PRP-TT conjugate and measuring free PRP in tile supernatant. This new method provides a complete precipitation of the total PRP-TT, and provides an accurate and reproducible measurements of free PRP. The accuracy of the assay was confirmed by spiking known amounts of unconjugated PRP to PRP-TT conjugate, and the new method was found to have no effect on free PRP while precipitating PRP-TT. The published acid precipitation method did not produce reproducible results due to incomplete precipitation of PRP-TT, especially when the vaccine is formulated in a salt-buffered solution.

• Pediatric Infection and Vaccine
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• 제24권3호
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• pp.125-133
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• 2017

목적: 1995년 한국에서 b형 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae type b [Hib]) 백신이 도입된 이후, 2013년 국가예방접종에 포함되었다. Hib 백신 도입 시기 이후 다른 나라의 일부 연구에 따르면, 침습적 Hib 질환은 소아보다 성인, 특히 노인 및 면역 저하 환자에서 더 자주 발생한다고 보고하였다. 따라서, 본 연구는 20-85세의 한국 성인에서 항-polyribosylribitol phosphate (PRP) 항체의 양적 및 질적 측정을 통하여 질병 감수성을 평가하고자 하였다. 방법: 혈청은 39명의 건강한 성인(20-50세)과 면역 저하 상태가 아닌 30명의 노인(75-85세)에서 수집하였다. 모든 피험자는 7일 이내에 항생제를 복용하지 않았다. 항-PRP 면역글로불린 G (immunoglobulin G [IgG]) 항체가 및 혈청 살상능 역가(serum bactericidal index [SBI])는 효소결합면역흡착측정법과 혈청 살상능 평가분석을 통해 측정하였다. 결과: 항-PRP IgG 항체가의 기하평균 및 SBI의 기하평균은 성인군에서 각각 $0.88{\mu}g/mL$ (95% 신뢰 구간, 0.17-3.85) 및 354 (95% 신뢰구간, 50-2,499)이었고, 노인군에서는 각각 $1.67{\mu}g/mL$ (95% 신뢰구간, 0.53-5.24) 및 449 (95% 신뢰구간, 146-1,376)이었다. 소아에서 Hib 감염에 대한 방어 농도로 인정하고 있는 0.15 및 $1.0{\mu}g/mL$을 적용하였을 때, 항체 양성률은 성인군에서 87.2%, 노인군에서 100%였다. SBI의 양성률($SBI{\geq}4$)은 성인군에서 82.1%, 노인군에서 100%였다. 결론: 대부분의 성인군과 노인군에서 양적으로나 기능적으로 Hib 질환에 대한 방어 면역력을 가지고 있었으나 모두는 아니었다. 높은 면역력과 낮은 Hib 순환율은 인구에서 Hib에 대한 자연면역을 감소시킬 수 있으므로, Hib 면역과 질병에 대한 지속적인 감시가 필요하다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제32권8호
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• pp.2549-2552
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• 2011

In this study, the kinetic properties of wild-type and C117D mutant H. influenzae MurA (Hi MurA), which catalyzes the first reaction in the biosynthetic pathway of the cell wall, were characterized. Purified recombinant Hi MurA was active at pH values ranging from pH 5.5 to pH 10, and its $K_m$ (UNAG), $K_m$ (PEP), and $k_{cat}$ values were measured to be 31 ${\mu}M$, 24 ${\mu}M$, and 210 $min^{-1}$, respectively. Hi MurA activity was effectively inhibited by fosfomycin with an $IC_{50}$ value of 60 ${\mu}M$. Hi MurA contains a cysteine residue (C117) at the loop region near the PEP binding, whereas MurA from fosfomycin resistant Mycobaterium tuberculosis or Chlamydia trachomatis contain an aspartate residue instead of the cysteine at the corresponding site. Aspartate substitution of Cys117 in Hi MurA shifted its optimum pH from 7.8 to 6.0. In addition, the $K_m$ values for UNAG and PEP were increased to 160 ${\mu}M$ and 150 ${\mu}M$, respectively, and the $k_{cat}$ value was significantly reduced to 41 $min^{-1}$. Furthermore, the C117D mutant form of Hi MurA was not inhibited by 1 mM fosfomycin. These results indicate that the Cys117 of Hi MurA is the binding site of fosfomycin and plays an important role in the fast turnover of the catalytic reaction.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제28권10호
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• pp.1730-1735
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• 2018

Bacterial pneumonia is one of the most common causes of mortality in Korea. In 2016, the mortality rate from pneumonia was 16,476 deaths per 100,000, which was an 11% increase from the previous year. The aim of our study was to determine the distribution of the bacterial pathogens causing respiratory symptoms in different age groups over a 10-year period. Between January 2008 and September 2017, 1,861 specimens from 1,664 patients admitted to Dankook University Hospital with respiratory symptoms were examined. We used multiplex polymerase chain reaction (PCR) to detect six bacterial pneumonia pathogens: Bordetella pertussis, Chlamydophila pneumoniae, Haemophilus influenzae, Legionella pneumophila, Mycoplasma pneumoniae, and Streptococcus pneumoniae. We detected bacterial pneumonia pathogens in 1,281 (68.83%) specimens. Of the 1,709 pathogens detected, S. pneumoniae was the most common (48.57%; n = 830) followed by H. influenzae (40.08%; n = 685). Most infections were found among children younger than 10 years (92.69%; n = 1,584). Although S. pneumoniae was the most common pathogen detected in all age groups, M. pneumoniae infection increased in prevalence with age (p < 0.05). The rate of co-infection was also high among these patients (31.1%; n = 399), which peaked in 2015 (54.55%; n = 42/77). The prevalence of bacterial pneumonia in Cheonan, along with the proportion of co-infections among patients increased over the 10-year study period. The findings will aid the development of treatment and prevention guidelines.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1996년도 제4회 추계심포지움
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• pp.65-73
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• 1996

LPS/LOS, the compound found only in gram-negative bacterial outer membrane, plays important roles in bacterial maintenance as well as its pathogenesis. We isolated and characterized several genes required for NTHi 2019 LOS biosynthesis, which encode enzymes required for sugar substrate synthesis or the transfer of substrates to receptor molecules. The htrB gene, however, appears to have more complex role. It has acryltransferase activity as well as various other activity, which may control regulation of LOS biosynthesis as well as its pathogenicity. Evidences supporting the latter come from the observations that the lipid A of the B29 induced significantly less TNF ${\alpha}$ from macrophages than that of the wild type LOS (unpublished data). H. influenzae A2-htrB mutant strain was also significantly less invasive than the wild type strain. The structural similarities of the enterobacterial LPS and the Haemophilus LOS enabled us to isolate the NTHi 2019 genes involved in LOS biosynthesis genes by using the S. typhimurium LPS deep core mutants. While a similar approach has been used for E. coli, this technique for selection of an LPS phenotype has not been applied to nonenterobacterial species. The difficulties inherent in the molecular manipulation of organism such as Neisseria and Haemophilus species make this approach particularly attractive in the identification and cloning LOS genes. Studies on genetic features of LPS/LOS biosynthesis would be useful for understanding bacterial pathogenesis as well as for developing vaccines for these gram-negative pathogenic bacteria.

• Pediatric Infection and Vaccine
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• 제7권2호
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• pp.233-239
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• 2000

목 적 : 중이염은 나이 어린 소아에 많이 발생하며 항생제가 흔히 처방되는 질환이 최근에는 세균의 항생제에 대한 내성률이 증가되고 있어 중이염 환자에서 항생제 선택이 신중해야 함이 심도 있게 거론되고 있다. 국내에서는 중이염에 대한 체계적인 연구가 부진한 상태이며 이에 저자들은 중이염의 원인 및 항생제 감수성을 파악하기 위하여 후향적으로 본 연구를 실시하였다. 방 법 : 1994년 7월부터 1999년 6월까지 한양대학교병원 소아과 및 이비인후과에서 이루를 동반한 중이염으로 진단 받은 15세 미만의 소아 중 이루 배양 검사 결과 세균이 분리된 65명을 대상으로 의무 기록을 후향적으로 분석하였다. 결 과 : 총 65명의 환아 중 남자 37명(57%), 여자 28명(43%)이었으며 평균 나이는 2.9세로 나이가 어릴수록 많아 1세 미만 27명(41.5%), 1~3세 24명(36.9%)이었으며, 3세 이하가 78%를 차지하였다. 분리된 균주의 분포는 Staphylococcus aureus 32명(49.2%), Streptococcus pneumoniae 19명(29.2%), Haemophilus influenzae 9명(13.8%), Streptococcus oralis 3명(4.6%), Moraxella catarrhalis 1명(1.5%) 등이었다. 구순열/구개열을 동반한 9명(14%)의 환아에서 분리된 균주의 분포는 구순열/구개열을 동반하지 않은 환아에서와 유사하였다. 분리된 S. aureus의 항생제 내성률은, erythromycin, imipenem, cephalothin, clindamycin에 90% 이상, oxacillin 86.2%, chloramphenicol 25%, trimethoprim-sulfamethoxazole(TMP-SMX) 12.5%, vancomycin과 teicoplanin에 0%이었다. S. pneumoniae의 내성률은 penicillin에 71.4%, erythromycin, tetracycline 및 trimethoprim-sulfamethoxazole(TMP-SMX) 60% 이상, chloramphenicol 7.1%, vancomycin, teicoplanin, ciprofloxacin에는 0%이었다. H. influenzae의 내성률은 ampicillin, TMP-SMX에 각각 55.5%이었으나 chlroramphenicol, ceftriaxone, aztreonam, imipenem, ciprofloxacin에는 모두 감수성이 있었다. 결 론 : 본 연구조사 결과 이루를 동반한 중이염의 원인은 S. aureus, S. pneumoniae 및 H. influenzae로 판명되었으며, 분리된 균주들의 높은 항생제 내성률은 중이염의 치료를 위한 항생제 선택에 반영되어야 할 것으로 사료된다. 향후 전향적인 고막천자를 이용한 연구조사가 이루어져 급성 중이염을 더 정확히 파악할 수 있어야겠다.