개별인정형 건강기능식품 기능성 원료로 개발한 창녕양파추출액의 표준화를 위해 지표성분으로 quercetin을 설정하였으며, HPLC를 이용하여 지표성분 quercetin의 분석법을 확립하며 그에 따른 유효성 검정을 실시하고자 하였다. 유효성 검정 결과, 본 시험법에서 표준용액의 피크유지시간과 창녕양파추출액의 피크유지시간이 일치하였으며 동일한 spectrum을 나타내어 특이성을 확인하였다. 검량선의 상관계수($R^2$)는 0.9986로 높은 직선성을 보여 분석에 적합함을 알 수 있었으며, 검출한계는 0.2 mg/L, 정량한계는 0.5 mg/L 로 설정되었다. Quercetin의 회수율은 0.05 mg/mL에서는 82.36~95.26%, 0.075 mg/mL는 82.70~98.24%, 0.1 mg/mL은 87.91~95.11%의 범위의 회수율을 보였으며, intra-day에서의 정밀도(RSD)는 0.10~3.28%, inter-day에서는 0.96~5.79%의 정밀도를 나타내어 창녕양파추출액의 지표성분인 quercetin의 분석법은 적합한 시험법임이 검증되었다.
버섯 생산 후 발생되는 부산물인 팽이버섯 수확 후 배지로부터 7종의 고온성 균주를 분리하였으며 이 중 곰팡이독소를 생성하는 Asp. flavus와 Asp. ochraceous에 대한 항균활성이 높으면서 xylanase와 cellulase 생성능이 우수한 균주를 최종 선발하여 UJ03으로 명명하였다. Bacillus ID kit와 VITEK 2 system를 이용하여 분리균 UJ03의 생리적 생화학적 특성을 조사한 결과 분리균 UJ03은 Bacillus 속과 유사한 특징을 나타내었으며 16S rDNA 염기서열 분석 결과에서는 B. amyloliquefaciens와 98.9%의 상동성을 나타내었다. 이와 같은 결과를 종합하여 분리균 UJ03은 Bacillus sp. UJ03으로 동정되었으며 분리균 UJ03이 생성하는 항균물질은 TLC와 HPLC 분석에서 Bacillus 속 균주가 생성하는 펩타이드성 항균물질인 iturin A와 유사한 특성을 나타내었다.
Bacillus subtilis AH18균주는 auxin, siderophore 그리고 cellulase를 동시에 생산하는 PGPR 균주이자 생물방제균주로 항진균성 siderophore의 특성을 확인한 결과 catechol type의 siderophore로 확인하였다. $Siderophore_{AH18}$ 의 정제는 Amberlite XAD-2, sephadex LH-20 column chromatography 그리고 HPLC를 통해 정제 및 정제여부를 확인하였으며, GC-MS, $^1H$-NMR, 그리고 $^{13}C$-NMR을 통해 구조 및 분자량을 확인하였다. 그 결과 B. subtilis AH18이 생산하는 siderophore은 분자량 883의 bacillibactin임을 확인하였으며, 포자발아억제활성을 나타냄을 확인하였다. B. subtilis AH18은 P. capsici에 의한 고추역병을 효과적으로 방제하였으며(방제력 55%), 이는 bacillibactin에 의한 효과가 포함되리라 추측된다.
The purpose of this study was to optimize the solid state cultivation of Monascus ruber on sterile rice. A single-level-multiple-factor and a single-factor-multiple-level experimental design were employed to determine the optimal medium constituents and to optimize carbon and nitrogen source concentrations for lovastatin production. Simultaneous quantitative analyses of the ${\beta}$-hydroxyacid form and ${\beta}$-hydroxylactone for of lovastatin were performed by the high performance liquid chromatography (HPLC) method with a UV photodiode-array (PDA) detector. The total lovastatin yield ($4{\sim}6\;mg/g$, average of five repeats) was achieved by adding soybean powder, glycerol, sodium nitrate, and acetic acid at optimized levels after 14 days of fermentation. The maximal yield of lovastatin under the optimal composition of the medium increased by almost 2 times the yield observed prior to optimization. The experimental results also indicated that the ${\beta}$-hydroxylactone form of lovastatin (LFL) and the ${\beta}$-hydroxyacid form of lovastatin (AFL) simultaneously existed in solid state cultures of Monascus ruber. while the latter was the dominant form in the middle-late stage of continued fermentation. These results indicate that optimized culture conditions can be used for industrial production of lovastatin to obtain high yields.
A strain of Streptomyces cavourensis subsp. cavourensis (coded as SY224) antagonistic to Colletotrichum gloeosporioides infecting pepper plants was isolated. SY224 produced lytic enzymes such as chitinase, ${\beta}$-1,3-glucanase, lipase, and protease in respective assays. To examine for antifungal activity, the treatments amended with the nonsterilized supernatant resulted in the highest growth inhibition rate of about 92.9% and 87.4% at concentrations of 30% and 10%, respectively. However, the sterilized treatments (autoclaved or chloroform treated) gave a lowered but significant inhibitory effect of about 63.4% and 62.6% for the 10% supernatant concentration, and 75.2% and 74.8% for the of 30% supernatant concentration in the PDA agar medium, respectively, indicative of the role of a non-protein, heat stable compound on the overall effect. This antifungal compound, which inhibited spore germination and altered hyphal morphology, was extracted by EtOAc and purified by ODS, silica gel, Sephadex LH-20 column, and HPLC, where an active fraction was confirmed to be 2-furancarboxaldehyde by GS-CI MS techniques. These results suggested that SY224 had a high potential in the biocontrol of anthracnose in pepper, mainly due to a combined effect of lytic enzymes and a non-protein, heat-stable antifungal compound, 2-furancarboxaldehyde.
The aim of this study was to select compounds for the standardization of fermented Kalopanax pictus Nakai (KP-F), to develop the analysis method using HPLC-PDA and to perform method validation. KP-F is a fermented powder developed to improve the original physiological activities and create a new functionality. Eleutheroside E, Acanthoside B, and Syringaresinol were selected as the standard compounds and developed our own method for simultaneous analysis. The analyte was isolated using C18 column with a gradient elution of 0.05 M phosphoric acid in water and methanol as the mobile phase at a flow rate of 1 mL/min and detected at 210 nm. As a result, all standard compounds showed good linearity with an $R^2$ (coefficient of correlation) of 1.000 and for the limit of detection range of $0.710{\sim}0.831{\mu}g/mL$, and the limit of quantification as $2.150{\sim}2.520{\mu}g/mL$. The precision was RSD (%) of less than 4.80%, while the accuracy was 4.70%>RSD (%) for the range 102.44~110.48%. In conclusion, the developed analysis method is suitable for the detection of Eleutheroside E, Acanthoside B, and Syringaresinol in KP-F.
In this study, we evaluated the whitening activity of prethanol A and water extracts from Abeliophyllum distichum Nakai. The extracts were prepared using 0, 50, 70, and 100% prethanol A at $121^{\circ}C$, 1.2 atm for 15 minutes. To confirm effective extraction, the acteoside content of each extract was analyzed with the HPLC-PDA method. The antioxidant activity was evaluated using DPPH and ABTS scavenging activity assays, and the whitening activity was evaluated based on inhibitory activities on the protein and mRNA expression of tyrosinase, tyrosinase-related protein 1 (TRP-1), tyrosinase-related protein 2 (TRP-2), and microphthalmia-associated transcription factor (MITF) in B16 F10 cells. Each extract showed strong antioxidant and whitening activity. $IC_{50}$ values of antioxidant activity from each extract were in order of 100%, 70%, 50%, and 0%. In addition, whitening activity inhibited the protein and mRNA expression of melanin synthesis factor, following the same pattern as antioxidant activity. In conclusion, water and prethanol A extracts of A. distichum showed effective antioxidant and whitening activity and are thus considered to be valuable materials for whitening cosmetics. The results of this study will also provide basic data for the safe and efficient production of A. distichum as a cosmetic material.
Seo, Chang-Seob;Park, Eunsook;Lee, Mee-Young;Shin, Hyeun-Kyoo
Natural Product Sciences
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제25권3호
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pp.238-243
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2019
In this study, the marker compounds of Curcumae Rhizoma (CR) were simultaneously quantified by high-performance liquid chromatography equipped with a photodiode array detector and the anti-inflammatory effects of CR extract and marker compounds in human benign prostatic hyperplasia epithelial-1 (BPH-1) cell lines were investigated. The marker components (4S,5S)-(+)-germacrone-4,5-epoxide, furanodienone, and germacrone, were separated on Gemini $C_{18}$ columns ($250mm{\times}4.6mm$, $5{\mu}m$) at $40^{\circ}C$ by using a gradient of two mobile phases eluting at 1.0 mL/min. Prostaglandin $E_2$ ($PGE_2$) levels in Human BPH-1 cells were determined with an ELISA kit. The coefficients of determination in a calibration curve of each analyte were all 0.9997. The limits of detection and quantification of the three compounds were $0.10-0.32{\mu}g/mL$ and $0.30-0.98{\mu}g/mL$, respectively. The content of three compounds, (4S,5S)-(+)-germacrone-4,5-epoxide, furanodienone, and germacrone, in the CR sample were found to be 5.79 - 5.92 mg/g, 4.72 - 4.86 mg/g, and 1.06 - 1.09 mg/g, respectively. Regarding pharmacological activity against benign prostatic hyperplasia, CR and its components significantly suppressed $PGE_2$ levels of BPH-1 cells. The established analysis method will help to improve quality assessment of CR samples and related products. In addition, CR and its components exhibit antiinflammatory activity in BPH-1 cells, suggesting the inhibitory efficacy of these compounds against the pathogenesis of BPH.
This study aimed to determine the changes in the vitamin B5 content of raw and cooked vegetables. The nineteen vegetables were subjected to different cooking methods, viz. blanching, boiling, pan-broiling, and steaming. Vitamin B5 was quantified by reversed-phase high-performance liquid chromatography (HPLC) using photodiode-array (PDA) detection (200 nm). The standard reference materials (SRM) were used to validate the accuracy of vitamin B5 measurement method used in this study. The cooking yields ranged from 82.63 to 107.62% and decreased in most of the vegetables except bitter melon, curled mallow, and eggplant. The raw kabocha squash, Danhobak, had the highest vitamin B5 content (0.671 mg/100 g) among the samples. All cooked vegetables showed lower vitamin B5 content compared to the raw samples. The true retention ranged from 0% (crown daisy, blanching) to 84.49% (kabocha squash, steaming). These results indicate that vitamin B5 is degraded after cooking. Pan-broiling and steaming are better cooking methods than the others for retaining vitamin B5. The true retention of vitamin B5 in the samples markedly depends on the cooking method and food matrix. These results can be used as important basic data for nutritional evaluation of meals.
Ganghwaljetongyeum (GHJTY) is a complex herbal decoction comprising 18 plants; it is used to treat arthritis. In order to develop a new anti-arthritic herbal medication, we selected 5 out of 18 GHJTY plants by using bioinformatics analysis. The new medication, called ChondroT, comprised water extracts of Osterici Radix, Lonicerae Folium, Angelicae Gigantis Radix, Clematidis Radix, and Phellodendri Cortex. This study was designed to investigate its chondroprotective and anti-inflammatory effects to develop an anti-arthritic herb medicine. ChondroT was validated using a convenient and accurate high-performance liquid chromatography. photodiode array (HPLC-PDA) detection method for simultaneous determination of its seven reference components. The concentrations of the seven marker constituents were in the range of 0.81-5.46 mg/g. The chondroprotective effects were evaluated based on SW1353 chondrocytes and matrix metalloproteinase 1 (MMP1) expression. In addition, the anti-inflammatory effects of ChondroT were studied by Western blotting of pro-inflammatory enzymes and by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) of inflammatory mediators in lipopolysaccharides (LPS)-induced RAW264.7 cells. ChondroT enhanced the growth of SW1353 chondrocytes and also significantly inhibited IL-1β-induced MMP-1 expression. However, ChondroT did not show any effects on the growth of HeLa and RAW264.7 cells. The expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) was induced by LPS in RAW264.7 cells, which was significantly decreased by pre-treatment with ChondroT. In addition, ChondroT reduced the activation of NF-κB and production of inflammatory mediators, such as IL-1β, IL-6, PGE2, and nitric oxide (NO) in LPS-induced RAW264.7 cells. These results show that ChondroT exerted a chondroprotective effect and demonstrated multi-target mechanisms related to inflammation and arthritis. In addition, the suppressive effect was greater than that exhibited by GHJTY, suggesting that ChondroT, a new complex herbal medication, has therapeutic potential for the treatment of arthritis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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