Mwamula, Abraham Okki;Ko, Hyoung-Rai;Kim, Youngjoon;Kim, Young Ho;Lee, Jae-Kook;Lee, Dong Woon
The Plant Pathology Journal
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제34권4호
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pp.297-307
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2018
The sugar beet cyst nematode, Heterodera schachtii is a well known pathogen on Chinese cabbage in the highland fields of Korea. However, a race of cyst forming nematode with close morphological resemblance to H. trifolii was recently isolated from the same Chinese cabbage fields. Morphological species differentiation between the two cyst nematodes is challenging, with only minor differences between them. Thus, this study described the newly intercepted H. trifolii population, and reviewed morphological and molecular characteristics conceivably essential in differentiating the two nematode species. A comparison of morphometric measurements of both infective juveniles and vulval cones of cysts showed significant differences between the two cyst nematodes. When total RNA and genomic DNA were extracted from a mixed field population, COI genes and ITS regions were clearly amplified with primers of the two Heterodera species, suggesting that Heterodera population collected from the Chinese cabbage field consisted of a mixture of two species. COI and ITS of H. trifolii were predominantly amplified from nucleotides prepared from H. trifolii monoxenic population whereas those of H. schachtii were strongly detected in H. schachtii monoxenic cultures. Thus, this study confirms the coexistence of the two species in some Chinese cabbage fields; and the presence of H. trifolii in Korea is reported here for the first time.
우량(優良) 질소고정균주(窒素固定菌株)를 개발(開發)하여 척박(瘠薄)한 야산(野山) 개발지(開發地)에서 효율적(效率的)인 초지조성(草地造成)을 꾀하고자, 영남지역(嶺南地域) 목초지(牧草地) 근류균(根瘤菌)의 내산성(耐酸性) 정도(程度)를 시험(試驗)한 결과(結果)는 다음과 같았다. 1. 분리균주(分離菌株)의 내성산도(耐性酸度)는 R. meliloti의 경우(境遇) pH 4.3~5.5, R. trifolii에서는 pH 4.0~5.5 범위(範圍)이였음. 2. 내산성(耐酸性)이 큰 R. meliloti M3 및 M4와 R. trifolii T27, T30, T31, T33 균주(菌株)는 숙주접종(宿主接種)으로 근류(根瘤)를 형성(形成)하였고 질소고정력(窒素固定力)도 있었다. 3. 우리나라 야산(野山)의 평균산도(平均酸度)인 pH 4.8~5.0에서의 내산성(耐酸性) 균주(菌株)는 R. trifolii는 80~99%였으나 R. meliloti는 35~47%에 지나지 않으므로 보다 내산성(耐酸性)이 큰 R. meliloti의 선발(選拔)이 요구(要求)됨.
잎굴파리를 예찰할 때 이용하는 황색 끈끈이 트랩의 최적 설치 높이를 밝히기 위하여 트랩을 3단계의 높이로 설치하여 4회에 걸쳐 높이별 부착수를 조사하였다. 거베라에서 트랩의 설치 높이는 작물과 같은 높이로 설치했을 때가 그 위 30cm, 60cm에 설치했을 때보다 잎굴파리의 유인량이 많았다. 시간대별 잎굴파리의 행동향상을 파악하기 위하여 황색 끈끈이 트랩을 작물높이에 설치한 후 1시간과 2시간 간격으로 일주활동을 조사하였다. 5월 조사에서 08~10시와 14~18시에 두 번의 피크가 나타났으며 7월 조사에서는 08시까지 잡힌 잎굴파리가 가장 많았고, 10월 조사에서는 12~14시에 가장 많이 잡혔다 잎굴파리의 배행활동에는 온도뿐만 아니라 일사강도 등 다른 환경요인도 작용하는 것으로 조사되었다. 또한, 황색 끈끈이트랩에는 암컷보다 수컷이 트랩의 높이나 시간에 관계없이 더 잘 유인되었다.
To identify four cyst nematodes (Heterodera schachtii, H. trifolii, H. glycines, H. sojae) that are economically important plant-parasitic nematodes in Korea, restriction fragment length polymorphism (RFLP) by 8 endonucleases (PstI, VspI, AlwI, RsaI, MvaI, EcoRI, Eco72I, Hinf I) was performed based on sequence difference of mitochondrial DNA cytochrome c oxidase subunit I (COI) gene. As a result, species-specific DNA band patterns by RsaI endonuclease were observed in H. schachtii. The specific patterns was in H. trifolii by 3 endonucleases (VspI, AlwI, Hinf I), and was in H. glycines by Hinf I. While, H. sojae was not digested by 4 endonuclease (VspI, AlwI, RsaI, Hinf I). This study showed that four cyst nematodes could be distinguished using RFLP by 4 endonucleases (RsaI, VspI, AlwI, Hinf I) based on the sequence difference of COI gene.
토마토에서 Hemiptarsenus zilahisebessi에 의한 아메리카잎굴파리의 밀도억제 효과를 실내와 온실에서 확인하였다. 토마토에서 외부기생봉류에 의한 아메리카잎굴파리의 기생율은 26~45%이었으며 이 중 H. zilahisebessi의 비율은 47~75%이었다 암컷 성충의 기주체액섭취율이 기주 1령유충과 3령유충에서 각각 40.4%와 37.9%이었으나 1령과 3령유충을 동시에 접종할 때 1령보다는 3령유충을 주로 체액섭취하였다 사육실에서 H. zilahisebessi 암컷과 기주 3령유충을 1 : 10, 1 : 20, 1 : 30으로 접종시 기주 시망율은 각각 93.1%, 92.1%, 89.8% 이었다. 토마토 포장에서 주당 암컷 3마리, 5마리를 접종한 결과 접종 4주째에 80%정도의 기생율을 나타냈으며 시간이 경과됨에 따라 아메리카잎굴파리의 유충밀도도 감소되는 경향을 보였다. 피해엽률 또한 접종 4주후부터 무접종구에 비하여 낮아지는 경향을 보였다. 그러나 접종밀도에 따른 기생을, 기주 유충 생충율 및 피해엽률의 차이는 없었다.
아메리카잎굴파리 외부기생봉인 Hemiptarsenus zilahisebessi의 수명은 20, 25, 3$0^{\circ}C$에서 각각 23.0일, 16.9일과 12.7일 이었으며 특히, $25^{\circ}C$와 3$0^{\circ}C$에서는 교미후 바로 산란이 이루어졌다. 암컷의 산란수와 일평균산란수는 20, 25, 3$0^{\circ}C$에서 각각 82.3개/3.6개, 90.3개/6.0개, 95.5개/7.8개로 온도가 높아질수록 많아지는 경향이었다. H. zilahisebessi이 내적자연증가율과 순증식율은 20, 25, 3$0^{\circ}C$에서 각각 0.1160/31.0, 0.1852/40.2. 0.2659/40.8이었다. 암컷은 주로 3령유충에 산란하였으며 기주령기에 따른 성비는 1령에서 0.1, 3령에서 0.42로 기주유충이 클수록 암컷의 많아졌다.
광학 살충활성 연구를 위하여 H, 4'-methoxy phenoxy 및 4'-tert butyl phenoxy의 치환기가 도입된 3가지 구조의 dihydroxyl phoshorus triazatetrabenzocorrole 유도체를 합성하였다. 도입된 치환체에 따른 바닥상태의 흡광도와 aggregation 유무를 확인하였으며, 빛에 의해 singlet oxygen을 생성하는 것을 확인하였다. 이를 토대로 아메리카잎굴파리를 대상으로 광학 살충 활성 시험을 실시한 결과 500 ppm의 농도에서 전체적으로 100~85.7%의 방제가를 나타내었으며, 특히 H로 치환된 dihydroxy1 phosphorus(V) triazateterabenzocorrole은 100%의 살충활성을 보였다.
본 연구는 우리나라 고랭지 배추재배지에서 근래에 문제되고 있는 Heterodera속의 사탕무씨스트선충(H. schachtii)과 클로버씨스트선충(H. trifolii)에 대한 살선충 물질(Burkholderia rinojensis, fluazaindolizine, fluopyram, fosthiazate, hydrogen peroxide, imicyafos)들의 알과 유충에 대한 약제 반응 차이를 알아보기 위하여 수행하였다. 실험 물질에 따른 부화율 비교 결과 부화율은 처리 약제별에 따라 차이를 보였는데 fluopyram, fosthiazate, imicyafos 처리에서는 두 선충 모두 99%의 매우 높은 부화억제 효과를 보였으며 선충간 약효차이는 hydrogen peroxide를 제외하고는 없었다. 부화유충에 대한 처리별 살선충 활성은 부화 억제효과 실험에서 높은 부화억제 효과를 보였던 fluazaindolizine 처리에서만 두 선충 모두에 대하여 30%미만의 낮은 살선충 효과를 보였고, 나머지 처리에서는 90%이상의 치사율을 보였다. 처리 24시간 후와 48시간 후 모든 실험물질에 대한 2령충들의 약제반응은 종간 차이를 보이지 않았다. 실내 실험에서 동일한 기주를 가해하는 두 씨스트선충들의 살선충제들에 대한 약제 반응이 동일하게 나타나 두 선충 혼생지에서 동시방제가 가능할 것으로 판단된다.
The soybean cyst nematode, Heterodera glycines, is a major plant-parasitic nematode that has caused important economic losses to Korea's soybean production. Four species of cyst nematodes, H. schachtii, H. glycines, H. trifolii, and H. sojae, all belong to schachtii group are coexist in field soil in Korea. The rapid identification of the nematode is crucial for preventing crop damage and in decision making for controlling this nematode. This study aimed to develop a species-specific primer set for quantitative PCR (qPCR) assay of H. glycines. The specific primer set (HGF1 and HGR1) for H. glycines was designed based on the cytochrome c oxidase subunit I (COI) sequence of mitochondrial DNA. After optimization, it is possible to identify the H. glycines using a qPCR assay with DNA extracted from a single cyst and single second-stage juvenile (J2). The specificity was confirmed by the absence of SYBR fluorescent signals of three other Heterodera species. A serial dilution of DNA extracted from a single cyst was obtained for the sensitivity test. The result showed that the standard curve of the test had a highly significant linearity between DNA concentration and Ct value (R2 = 0.996, slope = -3.49) and that the detection limit concentration of DNA of the primer set was 10 pg of DNA per reaction. Our findings suggested that H. glycines could be distinguished from H. sojae and other Heterodera species when a qPCR assay is used with a specific primer set.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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