• 대한치과교정학회지
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• 제31권1호
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• pp.71-83
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• 2001

악안면 부위에서 가장 빈번히 발생하는 선천적 기형의 하나인 구개열은 그 원인요소가 명확히 밝혀져 있지는 않지만 구개발생 과정 중 어느 한 단계에서의 이상으로 발생하며 양측 구개판의 융합 후 융합상피의 제거가 이루어지지 않는 것도 그 원인의 하나로 알려져 있다. 본 연구는 구개발생시 구개판 융합상피의 제거가 아포프토시스에 의한 것임을 확인하고 아포프토시스가 일어나는 시기와 위치를 규명하기 위해 시행되었다. 체중 200gm내외의 암컷흰쥐 12마리를 체중 250gm내외의 수컷흰쥐와 교배시켜 16.0일, 16.5일, 16.75일, 17.0일 태아를 얻었으며 각 태아에서 두부만을 파라핀 포매하여 전두절단 하였다. 조직절편에서 형태학적 소견을 관찰하기 위한 H-E 염색과 아포프토시스를 인지하기 위한 TdT염색을 시행한 후 광학현미경을 통해 관찰하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 16.0일과 16.5일 된 태아의 표본에서 접촉전의 양측 구개판의 내측단 상피에서는 아포프토시스를 관찰할 수 없었으며, 구개판의 접촉 직후 상피세포간의 융합이 이루어지는 부위에서는 극히 소수의 아포프토시스 세포들만이 관찰되었다. 2. 16.75일 된 태아의 표본에서 연속성을 거의 잃지 않은 정중 상피융합에서는 아포프토시스를 거의 관찰할 수 없었으나, 비강측과 구강측의 상피삼각 그리고 비중격과 구개판이 접촉하는 부위, 특히 비중격의 외측연과 접촉하는 부위에서는 다수의 아포프토시스 세포들이 관찰되었다. 3. 16.75일 된 태아의 표본에서 정중 상피융합이 연속성을 잃고 상피섬들로 나뉘어지는 시기 에서는 상피섬과 상피삼각부위에서 증가된 아포프토시스 세포들을 관찰할 수 있었으며 근접한 구강, 비강상피에서도 다수의 아포프토시스세포들이 관찰되었다. 4. 17.0일 된 태아의 표본에서 상피섬이 많이 소실되어 간엽조직에 의한 융합이 이루어지고 있는 부위에서는 아포프토시스 세포들이 거의 관찰되지 않았으나 상피삼각부위와 구강, 비강상피에서는 아직도 다수의 아포프토시스 세포들이 관찰되었다. 이상의 결과로 흰쥐 태아의 구개발생시 구개융합부위의 상피세포가 아포프토시스에 의해 제거된다는 사실을 알 수 있었으며 이러한 아포프토시스에 의한 융합상피세포의 제거는 주로 구개융합의 후반기에 상피섬과 상피삼각 부위에서 일어난다는 사실을 알 수 있었다.

• 대한치과교정학회지
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• 제31권1호
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• pp.121-136
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• 2001

치주인대에 일회성의 적절한 인장력을 가하였을 때 견인측 치근막에서 나타나는 혈관성장인자(VEGF)와 그 수용체(VEGFR)의 발현의 변화를 보기 위해 본 연구를 시행하였다. 8-10주된 Sprague-Dawley계 웅성 백서(rat)에서 상악좌측 제1대구치에 closed coil을 이용하여 근심 방향으로의 교정력을 가하였으며 1시간, 12시간, 1일, 3일, 1주, 2주 군으로 분리하여 각 군 당 5마리씩의 실험동물을 배정하였다. 우측 제1대구치는 치경부에 ligature wire만 결찰하고 동일 실험시간이 지난 후 대조군으로 이용하였다. 견인력이 가해진 치근막에서 VEGF와 VEGFR 및 이들의 mRNA의 발현 양상의 변화를 H&E 염색 및 면역조직화학적 염색과 in situ hybridization법으로 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 치주인대에 인장력을 가하면 치주인대의 신장으로 인한 혈관의 압박에 의해 울혈과 부분적인 출혈상이 초기에 나타났으나 3일 이내에 대조군과 같은 정도로 회복되었으며 신생골의 형성은 3일 이후 나타나서 2주간 지속되었다. 2. 치주인대에 인장력을 가하면 치주인대 세포와 조골세포, 백악아세포에서의 VEGF와 VEGF mRNA의 발현증가가 나타나며 이는 치주인대 혈관의 증가로 이어졌다. 3. 인장력을 가하고 3일 이후에는 VEGF와 VEGF mRNA의 발현은 주로 치조골 인접면의 치주인대세포와 조골세포에서만 관찰되었으며 2주후에는 VEGF와 VEGF mRNA, 치주인대혈관 모두 대조군과 유사한 정도로 감소하였다. 4. VEGF 수용체인 Flt-1과 Flk-1은 거의 동일한 발현 양상을 보였으며 주로 혈관 내피세포와 조골세포에서 관찰되었으나 치주인대에 인장력을 가하면 초기에 혈관내피세포에서 그 발현이 증가하였다. 조골세포에서의 발현증가는 내피세포에 비교해서 다소 늦게 나타났으나 발현의 증가는 더 뚜렷하였다. 결론적으로 교정력을 가했을 때 견인측 치주인대의 치주인대세포와 조골세포, 백악아세포에서 VEGF와 VEGF mRNA의 발현이 증가하며 이에 이어 혈관의 증가가 나타나고 신생골의 형성은 혈관의 증가 후에 나타나는 것을 관찰할 수 있었다. 백악아세포에서 발현이 증가된 VEGF mRNA는 치조골측으로 편재해 있던 혈관이 견인의 방향으로 치아를 향해 성장하도록 유도하는 것으로 사료되었다. VEGFR 및 VEGFR mRNA는 내피세포 뿐 아니라 조골세포와 골세포, 치주인대세포에서도 발현이 증가하여 VEGF가 paracrine한 방식 뿐 아니라 autocrine한 방식으로도 작용함을 알 수 있었다.

• Maxillofacial Plastic and Reconstructive Surgery
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• 제30권5호
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• pp.407-416
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• 2008

Purpose: The aim of the present study is to evaluate the effect of repetitive distraction and compression on new bone formation during distraction period. Materials and methods: Sixteen healthy rabbits, weighing about 2.5kg, were used in this experiment. A unilateral mandibular osteotomy was performed in the left mandible and the distractor(Track 1 $plus^{(R)}$, Gebruder Martin $GmbH^{(R)}$, Germany) was fixed with four screws (Cross driver screw $TI^{(R)}$, Gebruder Martin $GmbH^{(R)}$, Germany). After 4 days, the mandibles were distracted at a rate of 0.6mm/day for 10 days to obtain the amount of 6mm distraction in the control group(n=4). In the experimental group A(n=6), they were distracted at a rate of 1.2mm/day for 5 days and then compression of 0.6mm length and distraction of 0.6mm per 12 hours were carried out as counter direction for 5 days, relatively. In the experimental group B(n=6), distraction of 1.2mm length and compression of 0.6mm length per 12 hours were repeated for 10 days to obtain the amount of 6mm distraction finally. The experimental animals were sacrificed at 2 and 4 weeks after surgery and block specimens were obtained. With histologic and histomorphometric analysis, we observed the histologic changes of the cells and bone formation after H-E and Masson- Trichrome staining and then, measured Bone Deposition Rate with TOMORO $ScopeEye^{TM}$ ver. 3.5(Olympus, Japan), Results: Histologically, new bone formation was examined in all experimental groups and the control. But, the ability of bone formation of the experimental group A was somewhat better than any other groups. On the histomorphometric analysis, Bone Deposition Rate was higher in the experimental group A$(50.67{\pm}4.36%)$ than in the control group$(45.94{\pm}3.97%)$ and in the experimental group B$(42.68{\pm}5.70%)$. These data showed significant differences statistically(p<0.05). Conclusion: These results show that the distraction osteogenesis using repetitive compression and distraction force in the early consolidation period may be effective for new bone formation.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제24권1호
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• pp.21-26
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• 1997

본 연구는 체외생산된 생쥐 배반포기배의 ICM 세포에서 EGF-R 발현유무를 immunosurgery와 indirect immunofluorescence (간접 면역 형광방법) 을 이용하여 조사하고자 실시하였다. 본 실험에 사용된 ICM 세포는 체외수정 후 96시간째에 회수된 생쥐 배반포기배를 immunosurgery 방법을 이용하여 얻어졌으며, 회수된 ICM세포는 생사유무와 EGF-R 발현유무 조사에 공시 되어졌다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다. ICM세포의 회수율은 rabbit anti-mouse serum (antiserum) 과 guinea pig serum (complement) 에 각각 15-30 분과 15-60분 동안 처리 했을 경우 8.0-84.2% 였으며, 또한 처리시간이 각각 30분과 60분일 때 가장 높은 회수율 (84.2%) 을 얻었다. Immunosurgery 후 얻어진 ICM세포의 생존 유무를 조사하기 위해 live/dead염색 방법을 이용하였던 바, 처리된 ICM세포중 93.8-100%의 생존율을 나타내어 회수된 ICM세포는 유해한 영향을 받지 않았다는 것을 알 수 있었다. 또한, 간접면역 형광방법을 이용하여 ICM세포에서 EGF-R가 발현되는 것을 확인 하였다. 따라서, ICM세포에서의 EGF-R의 발현은 인위적으로 첨가된 EGF의 이용가능성을 높임으로서 체외에서의 착상전 배 발달을 증진시킬 수 있을 것으로 사료된다.

• 생명과학회지
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• 제27권10호
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• pp.1104-1110
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• 2017

히스톤 H3K4의 메칠화는 3T3-L1의 지방세포의 분화를 촉진하는 것으로 알려져 있으나, 히스톤 H3K4 메칠화 효소인 SET1A가 지방세포 분화를 조절하는지에 대해서는 보고된 바가 없다. 그러므로 본 연구에서는 SET1A의 3T3-L1 지방세포의 분화조절과 기전을 연구하였다. SET1A의 발현은 3T3-L1 지방세포 분화과정에서 증가함을 관찰하였다. 3T3-L1 지방전구세포에서 siRNA을 이용하여 SET1A의 발현을 감소시키면 3T3-L1 지방전구세포의 분화가 억제됨을 관찰하여 SET1A가 3T3-L1 지방전구세포의 분화를 촉진함을 알 수 있었다. 이에 대한 조절기전을 알기 위해, SET1A의 발현을 감소시킨 3T3-L1 지방전구세포의 세포증식을 측정한 결과, 분화 초기 단계인 분화 후 2일 동안 3T3-L1 지방세포의 증식이 감소하였다. 또한 분화 후 7일 동안 지방세포세포 분화 조절인자들의 발현을 측정한 결과, SET1A의 발현을 감소시킨 3T3-L1 지방세포에서 $PPAR{\gamma}$의 발현이 감소하였다. 위와 같은 연구결과를 바탕으로, SET1A는 분화초기단계에서는 mitotic clonal expansion 단계를 촉진하고, 분화후기단계에서는 $PPAR{\gamma}$의 발현을 증가시켜 3T3-L1 지방세포의 분화를 촉진함을 알 수 있었다.

• 대한치과교정학회지
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• 제27권4호
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• pp.559-568
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• 1997

교정력에 의한 치주조직의 변화를 알아보기 위해 성장중인 유성견에서 단기간의 교정력이 가해진 직후와 보정기간 동안 일어나는 치아와 골조직의 변화양상을 조직학적으로 관찰하였다. 본 연구에서는 생후 4-6개월된 유성견 3마리를 이용하여, 각 실험동물의 하악 좌측 견치 와 제1대구치는 실험군으로, 우측 견치 와 제1대구치는 대조군으로 하였다. 하악견치와 제1대구치에 치관사이에서 최초 교정력이 200gm이 되도록 0.018"x0.022" S.S closed coil spring(Dentarum Co)의 길이를 조절하여 치아에 결찰시키고 장치는 1주간 활성화기간을 갖은 후 14일, 28일의 보정기간을 거쳐 희생시켜 하악골을 절제하여 통법에 따라 H-E염색군, 연마표본군, ALP염색군, TRAP염색군등으로 나누어 염색을 시행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 교정력을 종료한 직후 견인측 치주인대 폭경이 대조군보다 더 증가된 상을 보이고, 반대로 압박측은 폭경이 감소된 소견을 보이며 치주인대의 섬유들이 치축에 수직으로 압축되며 초자양 변성이 관찰되었다. 대조군에서 관찰되는 다수의 규칙적인 배열을 보였던 조골세포가 견인측에서는 간혹 관찰되었다. 2. 교정력 종료후 14일 보정기간 경과군 치주인대내 섬유아세포들이 증식되어 초자지질대가 회복되는 소견이 관찰되었고 견인측 치주인대의 폭경이 교정력을 종료한 직후군보다 감소하였으며, 소수의 ALP(+) 조골세포와 함께 신생골형성도 관찰되었다. 압박측 치주인대의 폭경은 교정력을 종료한 직후군보다 다소 증가하였으며 골흡수도 증가되었다. 3. 교정력 종료후 28일 보정기간 경과군 치주인대섬유는 정상적으로 회복되어 대조군과 유사한 양상을 보였고 견인측 치조골내 다수의 ALP(+)조골세포와 활발한 신생골형성이 관찰됨과 더불어 압박측 치조골은 다수의 TRAP(+)파골세포와 왕성한 골흡수양상을 보였다. 이상의 결과를 종합해 볼 때 교정력을 7일간 가한 직후 유리질화가 관찰되었고 교정력을 종료후 28일 보정기간 경과군에서 압박측에서는 파골세포 견인측에서는 조골세포의 활성과 함께 각각에서 왕성한 골흡수와 신생골형성이 관찰됨을 알 수 있다.

• 대한한의학회지
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• 제34권1호
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• pp.116-135
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• 2013

Objectives: This study was intended to clarify how Jakyakkamchobuja-tang (hereinafter referred to JKBT) affects mice of C57BL/10 whose osteoarthritis was induced by papain. Methods: Osteoarthritis was induced in mice by injecting papain in the knee joint. Mice were divided into 4 groups (n=6). The normal group were not treated at all whereas the control group (OAC-control) were induced for osteoarthritis by papain and oral medicated with 200 ul of physiological saline per day. The positive comparison group (OAC-$Joins^{(R)}$) were injected with papain and after 7 days, 100 mg/kg of $Joins^{(R)}$ were medicated with 200 ul of physiological saline mixed. The experimental group (OAC-JKBT) were injected with papain and after 7 days were medicated with 400 mg/kg of JKBT mixed with 200 ul of physiological saline. OAC-$Joins^{(R)}$ and OAC-JKBT were oral medicated for each substance for a total of 4 weeks, once per day. After experiments (from 1 week after injection of papain to 4 weeks elapsed), the function of liver and kidney, inflammation cytokine values within serum, degree of revelation for inflammation cytokine genes, immune cells within blood, metabolism of arachidonic acid and amount of cartilage were measured and histopathological variations for knee joint structures were observed. Results: Functions of liver and kidney were not affected. IL-$1{\beta}$ (interleukin-$1{\beta}$), MCP-1 (monocyte chemoattractant protein-1) and TNF-${\alpha}$ (tumor necrosis factor-${\alpha}$) were significantly reduced and IL-6 (interleukin-6) was also reduced but not significantly. After analyzing inflammation cytokine in joints with mRNA (messenger ribonucleic acid), revelation of IL-6, TNF-${\alpha}$, COX-2 (cyclooxygenase-2) and iNOS-II (inducible nitric oxide synthase-II) were all significantly reduced. Revelation of IL-$1{\beta}$ gene was also reduced but not significantly. Neutrophil for WBC (white blood cell) within serum was significantly reduced; monocyte was also reduced but not significantly. PGE2 (prostaglandin E2), TXB2 (thromboxane B2) were significantly reduced and LTB4 (leukotriene B4) was also reduced but not significantly. Destruction of cartilage on micro CT (computed tomography)-arthrography was reduced but had no significant differences. In terms of histopathology, infiltration of inflammation, proliferation of synovial membrane, subsidence of cartilage and bone due to penetration of excessive formation of synovial cell and destruction of cartilage were small (H&E (hematoxylin and eosin), safranine O staining). Conclusions: Based on these results, Jakyakkamchobuja-tang (JKBT) is believed to be useful for suppressing the progress of osteoarthritis and its treatments because of its anti-inflammatory effects and alleviation of pain with histopathological effective efficacy.

• Toxicological Research
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• 제29권3호
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• pp.173-179
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• 2013

In-utero exposure to valproic acid (VPA) has been known as a potent inducer of autism spectrum disorder (ASD), not only in humans, but also in animals. In addition to the defects in communication and social interaction as well as repetitive behaviors, ASD patients usually suffer from gastrointestinal (GI) problems. However, the exact mechanism underlying these disorders is not known. In this study, we examined the gross GI tract structure and GI motility in a VPA animal model of ASD. On embryonic day 12 (E12), 4 pregnant Sprague-Dawley (SD) rats were subcutaneously injected with VPA (400 mg/kg) in the treatment group, and with phosphate buffered saline (PBS) in the control group; the resulting male offspring were analyzed at 4 weeks of age. VPA exposure decreased the thickness of tunica mucosa and tunica muscularis in the stomach and ileum. Other regions such as duodenum, jejunum, and colon did not show a significant difference. In high-resolution microscopic observation, atrophy of the parietal and chief cells in the stomach and absorptive cells in the ileum was observed. In addition, decreased staining of the epithelial cells was observed in the hematoxylin and eosin (H&E)-stained ileum section. Furthermore, decreased motility in GI tract was also observed in rat offspring prenatally exposed to VPA. However, the mechanism underlying GI tract defects in VPA animal model as well as the association between abnormal GI structure and function with ASD is yet to be clearly understood. Nevertheless, the results from the present study suggest that this VPA ASD model undergoes abnormal changes in the GI structure and function, which in turn could provide beneficial clues pertaining to the pathophysiological relevance of GI complications and ASD phenotypes.

• 대한한방내과학회지
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• 제28권4호
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• pp.694-708
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• 2007

Objectives : Jageum-Jung is used as an anti-cancer agent in oriental medicine, but the mechanism by which it induces cell death in cancer cells is still unclear. The purpose of this study was to investigate the effects of Jageum-Jung on apoptosis and cell cycle arrest in HepG2 hepatoma cells. Methods : Various cancer cell lines including HepG2, C6 glioma, SH-SY5Y, PANC-1, and MCF-7 cells, were used. Apoptosis was determined by DAPI nuclei staining and flow cytometry in HepG2 cells treated with various concentrations (from 25 to 200 ${\mu}g/ml$) of $H_2O$ extract of Jageum-Jung (JGJ) for 48 hrs. Expression of cell cycle arrest mediators including Rb, p53, p21, cyclin B1, cdk4, and cyclin E proteins were measured by Western blot analysis. To estimate intracellular hydrogen peroxide levels and intracellular nitric oxide levels, HepG2 cells were stained with DCFH-DA dye and DAF dye, subjected on flow cytometric analysis. Results : 1. Jageum-Jung decreased the viability of HepG2 cells in a dose-dependent manner. 2. Jageum-Jung induced the catalytic activation of caspase-3 in HepG2 cells. 3. Jageum-Jung increased the intracellular hydrogen peroxide and NO in HepG2 cells. 4. Jageum-Jung increased the expression of Rb, p53 and p21 in HepG2 cells. 5. Jageum-Jung induced the expression of cyclin B1, cdk4, and cyclin E in HepG2 cells. Conclusions : Taken together, we suggest that Jageum-Jung exhibits cytotoxic effects on HepG2 cells, causing apoptosis and cell cycle arrest. The results showed that Jageum-Jung may do so by regulating the expression of specific target molecules that promote efficient apoptotic cell death following $G_2$/M phase arrest in a dose-dependent manner.

• 대한한방소아과학회지
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• 제22권2호
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• pp.81-114
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• 2008

Objectives : The purpose of this study is to investigate the effect of Jeseupwiryeongtang-gagam(JWTG) on atopic dermatitis by in vivo experiment using NC/Nga atopic dermatitis mouse, which has histological and clinical similarities to the atopic dermatitis of human. Methods : To investigate the effect of JWTG on AD, we evaluated atopic dermatitis-like skin lesions by clinical skin index and analyzed immunological parameters in peripheral blood mononuclear cells(PBMCs), splenocytes, draining lymph node(DLN) and performed skin histology in ears and dorsal skin of atopic dermatitis-like skin NC/Nga mouse in vivo. Results and Conclusions : In vivo, clinical skin severity score were significantly lower in JWTG group than control group. IgE, IL-6, $TNF-{\alpha}$, IgM, IgG2a and IgG2b levels in serum were decreased remarkably in JWTG group than control group and $IFN-{\gamma}$ production, secreted in Th1 cell were increased by JWTG. After experiment ended, we analyzed immunological cells ($CD3^+$, $CD19^+$, $CD4^+$, $CD8^+$, $CD3^+$$CD69^+$, $CD4^+$$CD25^+$ and $CD49b^+$) by flow cytometry. It resulted that total absolute number of $CD3^+$, $CD19^+$, $CD4^+$ and $CD8^+$ cells were recovered as normal and $CD3^+$$CD69^+$ were decreased significantly compared with control group in isolated DLN and PBMCs from NC/Nga mouse and total absolute number of $Gr-1^+$, $CD11b^+$ and $CD3^+$ in dorsal skin of NC/Nga mouse were decreased by JWTG. We analyzed ear, DLN, and neck-back skin after biopsy and dyeing by hematoxyline/eosin(H&E) and toluidine staining (mast cells marker) and obtained results that JWTG were effective to histological symptoms (dermal and epidermal thickening, hyperkeratosis and inflammatory cell infiltration). Ear thickness was decreased significantly than the control group and the size of inflammatory lymphocytes cells(ILC) and plasma cells(PC) in DLN were also decreased.