BACKGROUND: Recent studies have described the importance of bacteria that can degrade polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs). Here we screened bacterial isolates from commercial gasoline for PAH degraders and characterized their ability to degrade PAHs, lipids and proteins as well as their enantioselective epoxide hydrolase activity, salt tolerance, and seawater survival. METHODS AND RESULTS: One hundred two bacteria isolates from commercial gasoline were screened for PAH degraders by adding selected PAHs on to the surface of agar plates by the sublimation method. A clear zone was found only around the colonies of PAH degraders, which accounted for 13 isolates. These were identified as belonging to Bacillus sp., Brevibacterium sp., Micrococcus sp., Corynebacterium sp., Arthrobacter sp., and Gordonia sp. based on 16S rRNA sequences. Six isolates belonging to Corynebacterium sp., 3 of Micrococcus sp., Arthrobacter sp. S49, and Gordonia sp. H37 were lipid degraders. Arthrobacter sp. S49 was the only isolate showing high proteolytic activity. Among the PAH-degrading bacteria, Arthrobacter sp. S49, Brevibacterium sp. S47, Corynebacterium sp. SK20, and Gordonia sp. H37 showed enantioselective epoxide hydrolase activity with biocatalytic resolution of racemic styrene oxide. Among these, highest enantioselective hydrolysis activity was seen in Gordonia sp. H37. An intrinsic resistance to kanamycin was observed in most of the isolates and Corynebacterium sp. SK20 showed resistance to additional antibiotics such as tetracycline, ampicillin, and penicillin. CONCLUSION: Of the 13 PAH-degraders isolated from commercial gasoline, Arthrobacter sp. S49 showed the highest lipid and protein degrading activity along with high active epoxide hydrolase activity, which was the highest in Gordonia sp. H37. Our results suggest that bacteria from commercial gasoline may have the potential to degrade PAHs, lipids, and proteins, and may possess enantioselective epoxide hydrolase activity, high salt tolerance, and growth potential in seawater.
본 연구에서는 디젤로 오염된 토양에서 디젤 분해능이 우수한 Gordonia sp. SD8을 분리하였고, 이 균주의 디젤 분해특성을 액상과 토양에서 조사하였다. SD8은 유일 에너지원과 탄소원으로 디젤을 이용하여 생장 가능하였다. SD8 균주의 성장과 디젤 분해속도에 미치는 디젤 농도 영향을 조사한 결과, 20,000 mg-TPH $L^{-1}$농도에서 최대 비성장속도($0.67{\pm}0.05\;d^{-1}$)와 최대분해속도($1,727{\pm}145$ mg-TPH $L^{-1}\;d^{-1}$)를 얻을 수 있었다. 또한, 이 균주는 40,000 mg-TPH $L^{-1}$의 고농도 디젤을 분해할 수 있었으며, $30^{\circ}C$에서 비성장속도와 디젤분해속도가 가장 빨랐다. 디젤로 오염된 토양 정화에 미치는 Gordonia sp. SD8 접종 효과를 조사한 결과, 17일 경과 후, SD8을 접종하지 않은 대조군 토양의 디젤 잔류 농도는 $8,150{\pm}755$ mg-TPH kg-dry $soil^{-1}$이었으나, SD8을 접종한 경우에는 3,724 mg-TPH kg-dry $soil^{-1}$이었다. 이러한 결과는 Gordonia sp. SD8는 향후 디젤 등을 포함한 석유계 탄화수소화합물로 오염된 토양을 정화하는데 활용 가능한 유용 미생물 자원임을 의미한다.
섬 해안가 토양에서 방선균주 Gordonia sp. MMS17-SY073를 분리하여 유전체 분석을 실시하였고, 그 결과 5,962,176 염기쌍 및 67.4%의 G + C 함량으로 이루어진 유전체 정보를 확보하였다. 유전정보 분석 결과 총 5,201개 단백질 지정 유전자, 6개 rRNA 유전자 및 45개 tRNA 유전자를 확인하였다. MMS17-SY073 균주는 16S rRNA 유전자를 이용한 분석 결과 분류학적으로 Gordonia soli의 표준균주와 가장 가까웠으며 그 유사도는 98.5%로 나타났다. MMS17-SY073 균주는 non-ribosomal peptide synthetase 유형을 비롯한 다수의 이차대사산물 생합성 유전자를 보유하고 있는 것으로 나타났다.
다환 방향족 탄화수소(PAH; polycyclic aromatic hydrocarbon)는 발암성, 돌연변이 유발성, 유전독성을 지니기 때문에 인체위해성이 큰 물질로 알려져 있다. 기존 PAH 분해 미생물 탐색 방법중 독성이 강한 유기용매에 PAH를 용해시켜 미생물에 직접 분무하는 분무법, 미생물과 직접 혼합하는 한천중층법은 미생물 생장에 영향을 줄 뿐만 아니라, 특히 많이 쓰이는 분무법의 경우 분무되는 PAH의 양을 조절하기가 어렵고 멸균상태를 유지하기가 힘들다는 단점이 있다. 그래서 본 논문에서는 이와 같은 단점을 보완한 방법으로 승화법(Alley, Jeremy F. and Lewis R. Brown. 2000. Use of sublimation to prepare solid microbial media with water-insoluble substrates. Appl. Environ. Microbiol. 66, 439-442)을 도입하여 적용하였다. 그 결과 상용휘발유 및 태안유류유출지 시료로부터 분리한 350분리균주 중에서 7균주가 단일 PAH 또는 복수의 PAH 분해에 관여했다. 특히 Corynebacterium sp. SK20, Rhodococcus sp. TA24, Streptomyces sp. TA27은 시험한 pyene, phenanthrene, naphthalene에, Gordonia sp. H37는 pyrene, naphthalene에, Arthrobacter sp. S49는, naphthalene, phenanthrene에 활성이 있었다.
본 연구에서는 유류 분해능이 있고 식물 성장 촉진능력을 가진 Gordonia sp. S2RP-17, 중금속에 내성을 가지며 식물 성장촉진 능력이 있는 Serratia sp. SY5 및 옥수수를 이용하여 유류 및 중금속 오염 토양의 정화 특성을 조사하였다. 유류 및 중금속 오염 토양에서 51일간 재배한 옥수수의 평균 뿌리 건중량은 $1.9{\pm}0.2\;g$이었으나, 근권세균을 접종한 오염 토양에서 재배한 옥수수의 뿌리 건중량은 $5.6{\pm}0.7\;g$로, 근권세균 접종에 의해 옥수수의 뿌리의 중량이 유의적으로 증가함을 알 수 있었다(p<0.01). 초기에는 토양의 TPH 농도는 $21,576{\pm}3,426\;mg-TPH{\cdot}kg-dry\;soil^{-1}$이었는데, 51일 후 옥수수만을 식재한 토양의 잔류 TPH 농도는 $220{\pm}98\;mg-TPH{\cdot}kg-dry\;soil^{-1}$이었고, 옥수수와 함께 근권세균을 접종한 토양의 잔류 TPH 농도는 $20{\pm}41\;mg-TPH{\cdot}kg-dry\;soil^{-1}$이었다. 이러한 결과로부터 옥수수 식재에 의해 대부분의 TPH를 제거할 수 있으며, 옥수수와 함께 근권세균을 접종하면 TPH 효율이 조금 더 향상됨을 알 수 있었다. 그러나, 중금속 제거효율에 미치는 근권세균 접종 효과는 거의 없었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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