• BMB Reports
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• 제33권2호
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• pp.179-183
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• 2000

The glutathione S-transferase (GST) activities of S-type and L-type thioltransferases (TTases), which are purified from the seeds and leaves of Arabidopsis thaliana, respectively, were identified and compared. The S-type and L-type TTases showed $K_m$ values of 9.72 mM and 3.18mM on 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB), respectively, indicating the L-type TTase has higher affinity for CDNB. The GST activity of the L-type TTase was rapidly inactivated after being heated at $70^{\circ}C$ or higher. The GST activity of the S-type TTase remains active in a range of $30-90^{\circ}C$. $Hg^{2+}$ inhibited the GST activity of the S-type TTase, whereas $Ca^{2+}$ and $Cd^{2+}$ inhibited the GST activity of the L-type TTase. Our results suggest that the GST activities of two TTases of Arabidopsis thaliana may have different catalytic mechanisms. The importance of the co-existence of TTAse and GST activities in one protein remains to be elucidated.

• BMB Reports
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• 제31권1호
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• pp.20-24
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• 1998

Thioltransferase, also known as glutaredoxin, is an enzyme that catalyzes the reduction of a variety of disulfides, including protein disulfides, in the presence of reduced glutathione. Thioltransferase was purified from kale through ammonium sulfate fractionation, DE-52 ion-exchange chromatography, Sephadex G-75 gel filtration, and Q-Sepharose ion-exchange chromatography. Its molecular size was estimated to be about 31,000 daltons on SDS-PAGE. The purified enzyme has an optimum pH of about 8.0 with 2-hydroxyethyl disulfide as a substrate. The enzyme also utilizes L-sulfocysteine, L-cystine, bovine serum albumin, and insulin as substrates in the presence of GSH. The enzyme has $K_m$ values of 0.24-0.67 mM for these substrates. The enzyme was partly inactivated after heating at $80^{\circ}C$ or higher temperature for 30 min. The enzyme was stimulated by various thiol compounds such as reduced glutathione, dithiothreitol, L-cysteine, and $\beta$-mercaptoethanol. This is a second example of a plant thioltransferase which was purified and characterized.

• BMB Reports
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• 제53권2호
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• pp.106-111
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• 2020

Glutaredoxin 1 (GLRX1) has been recognized as an important regulator of redox signaling. Although GLRX1 plays an essential role in cell survival as an antioxidant protein, the function of GLRX1 protein in inflammatory response is still under investigation. Therefore, we wanted to know whether transduced PEP-1-GLRX1 protein inhibits lipopolysaccharide (LPS)- and 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate (TPA)-induced inflammation. In LPS-exposed Raw 264.7 cells, PEP-1-GLRX1 inhibited cyclooxygenase-2 (COX-2), inducible nitric oxide synthase (iNOS), activation of mitogen activated protein kinases (MAPKs) and nuclear factor-kappaB (NF-κB) expression levels. In a TPA-induced mouse-ear edema model, topically applied PEP-1-GLRX1 transduced into ear tissues and significantly ameliorated ear edema. Our data reveal that PEP-1-GLRX1 attenuates inflammation in vitro and in vivo, suggesting that PEP-1-GLRX1 may be a potential therapeutic protein for inflammatory diseases.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제46권3호
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• pp.327-337
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• 1999

연구배경: 활성산소종(reactive oxygen species)은 발암 기전의 여러 단계 과정에 관여한다. 대부분의 종양 세포주 및 종양 조직내의 종양 세포는 활성산소종을 생성하는 반면 종양 세포의 catalase, Mn- 및 CuZn-SOD등 기존 항산화 단백의 활성도는 대부분 저하되어 있다. 이로 인한 종양 조직내의 지속적인 산화 스트레스는 종양의 국소 침습 및 전이를 촉진한다. 12-kDa thioredoxin은 glutathione 및 glutaredoxin과 함께 세포내 산화-환원 전위를 조절하여 세포 활성, 증식, 분화 및 산화-환원에 의한 아포토시스 조절에 관여하는 것으로 알려져 있다. 한편 histiocytic lymphoma 세포 (U937, human)에서 14-kDa 및 10-kDa의 eosinophilic cytotoxic enhancing factor(ECEF)로 정제되었으며 호산구 자극의 생물학적 기능은 10-kDa에서 20배 이상 높은 것으로 알려져 있다. 성인 T-세포백혈병, 자궁경부상피세포암 및 간세포암에서 thioredoxin 양이 증가 되어 있고 폐암에서는 thioredoxin mRNA가 증가되어 있는 것으로 알려져 있다. 이에 폐암 조직과 주위 정상 조직을 비교하여 catalase, CuZn-SOD 및 glutathione peroxidase 등 기존 항산화 단백과 thioredoxin 발현 변화를 비교 관찰하고 대식세포에서 산화 스트레스 및 내독소에 의한 thioredoxin 발현 변화를 관찰하고자 하였다. 방 법: 동일한 환자의 폐암 조직과 주변의 정상 폐 조직을 immunoblot 분석으로 catalase, CuZn-SOD, glutathione peroxidase 및 thioredoxin 발현을 비교 관찰하였으며 대식세포인 mouse monocyte-macrophage 세포 (RAW 264.7)에 5 ${\mu}M$ menadione 및 1 ${\mu}g/ml$ endotoxin을 처치하여 thioredoxin 발현을 관찰하였다. 결 과: Immunoblot 분석상 12-kDa의 thioredoxin 발현은 폐암 조직에서 정상 폐조직과 비교하여 의미있는 증가를 보였으나 catalase 및 CuZn-SOD의 발현은 폐암 조직에서 정상 폐조직과 비교하여 감소하였고 glutathione peroxidase의 발현은 일정 하지 않은 변화를 보였다. 절단형(truncated) thioredoxin 역시 폐암에서 증가하였다. Mouse monocyte-macrophage cells에 5 ${\mu}M$ menadione 및 1 ${\mu}g/ml$ endotoxin을 처치하였을때 thioredoxin 발현은 12시간에 최고로 증가하여 48 시간까지 지속되었다. 결 론: 폐암에서 기존의 항산화 단백과는 달리 12-kDa 및 절단형 thioredoxin 발현이 증가하며 이는 종양 조직내의 지속적인 산화 스트레스와 밀접한 연관이 있다. 특히 절단형 thioredoxin의 생물학적 기능을 고려할 때 절단형 thioredoxin 발현 증가는 종양 세포 증식을 통한 종양 성장에 더욱 의미있는 역할하리라고 생각된다.