20-39세 사이의 성인 남자 34명과 여자 35명에 대하여 혈청 유리 아미노산의 정상치를 구하였다. 성인 남녀 다 같이 threonine(일부glutamine이 포함)alanine, lysine이 아미노산 중에서 약 40%를 차지하고 있었으며, 총 필수 아미노산의 함량은 총비필수 아미노산의 함량보다 유의하게 낮았다. 혈청아미노산 조성에서 뚜렷한 성별의 차이가 나타났는데 성인 남자에서는 alanine, cystine, valine, isoleucine, leucine, tyrosine, tryptophan, threonine, methionine, proline 등이 , 여자에서는 lysine, histidine이 각각 유의하게 높은 수준을 보였다. 총 필수 아미노산의 함량 그리고 총비필수 아미노산 및 총 아미노산에 대한 총필수 아미노산의 몰비도 성인 남자가 유의성 있는 높은 수준을 나타내었다. 아울러 총필수 아미노산에 대한 각 필수 아미노산의 몰비를 구하여 성별로 비교하였다.
A synthetic defined medium, fortified with amino acids, was developed for the stable production of the kringle fragments of human apolipoprotein(a) (apo(a)), rhLK68. Using a complex rich medium containing yeast extract and a high-cell-density fed-batch culture, the expression level of rhLK68 reached 17% of the total cellular protein, which corresponded to $5\;g\;l^{-1}$ of the culture. To replace the complex media with chemically defined media, several amino acids that positively affect cell growth and gene expression were chosen by a statistical method. The various combinations of the selected amino acids were tested for its fortifying effect on a minimal defined medium. When glutamine only was added, the overall expression level of rhLK68 reached 93% of the complex rich medium increasing the specific expression level by 22.4% and decreasing the cell growth by 24%. Moreover, the addition of glutamine resulted in a 2-fold increase in the concentration of rhLK68 in the culture broth, compared with the minimal defined medium. The synthetic defined media developed in this study could be generally applied to high-cell-density cultures of the recombinant Escherichia coli BL21(DE3), especially for the production of therapeutic proteins that require a strict quality control of the culture media and fermentation processes.
Atmospheric nitrogen containing organic compounds(e.g. amino acids) has attracted considerable attention from the viewpoint of the oceanic biogeochemical cycle of nitrogen as well as the long range transfer. However, only a few measurements of organic nitrogen compounds have been conducted due to analytical difficulties. In this study, total of nine amino acids such as Glutamic acid, Histidine, Arginine, Tyrosine, Cystine, Valine, Methionine, Phenylalanine, Lysine have been analytically determined by Liquid Chromatography - Mass Spectrometry Mass Spectrometry (LC-MSMS). As results, Fragmentor Voltage (FV), Precursor Ion, Collision Energy, Product Ion related to individual amino acid compounds are shown. Based on the operational conditions, Lysine, Glutamine Acid, Tyrosine were analyzed during the China Oriented Smog Period. High concentrations of Lysine, Glutamine Acid, and Tyrosine are discussed with organic carbon (OC), elemental carbon (EC), and water soluble ions. The results can provide to understand the sources with aging process related to amino acids influenced by the long-range transport from the Yellow Sea area.
우유 casein단백질을 alcalase로 가수분해시켰을 때, 생성되는 peptide 중 철분과 결합력이 있는 peptide인 IBP가 $immobilized\;Fe^{3+}\;affinity\;chromatography$에 의하여 용이하게 분리되었다. IBP의 분자량은 2,175 dalton이었으며 $pH\;6,\;37^{\circ}C$에서 1시간동안 일정량의 철분과 항온처리하였을 경우, 25, 50, 100 g/mL의 IBP는 각각 4.2, 5.7, 7.1 g의 철분을 가용화시키는 능력을 보였다. IBP는 proline (24.5 Mol%), lysine (15.7 Mol%), glutamic 또는 glutamine (14.9 Mol%) 등의 아미노산으로 구성되어 있었으며 이들의 N-terminal sequence는Met-Ala-Pro-Lys-His의 순으로 이루어져 있었다. 분자량, 아미산 조성, N-terminal sequence등의 결과를 종합해 보면 IBP는 casein 중 -casein의 아미노산 서열 $102{\sim}119$에 해당하는 18개의 아미노산으로 구성된 peptide임을 알 수 있었다.
수도품종명 도열병 저항성 차이와 도체내 성분과의 관계를 구명코저 저항성 품종, 중간정도 품종, 감수성인 품종의 실소 및 당 함량을 비교한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1) 전질소, 전당 함량은 저항성인 품종이 감수성인 품종에 비해 전질소는 적고 전당은 많았다. 따라서 C/N 률은 저항성 품종이 감수성인 품종에 비해 높았다. 2) Free amino acid에 있어서는 저항성인 품종이 감수성인 품종에 비해 Glutamine, Valine 그리고 Leucine 과 Iso-leucine함량이 많았다. 3) 각종당액에서 전분합성은 저항성인 품종이 감수성인 품종에 비해 Fructose, Glucose에서는 높았고 Sucrose에서는 낮았으나 Indica type로 저항성인 Zenith에서는 오히려 전분합성이 감수성인 다다조 보다 떨어졌다. 4) 질소비료를 증시하면 전질소함량은 보비보다 증가하는데 그 증가율은 저항성인 품종에서 낮은 경향이었다. 전당은 분벽초기에 감소되며 그 감소율은 저항성인 품종이 더 떨어졌고 분벽최성기에는 오히려 증가하였는데 그 증가율은 저항성인 품종이 높은 경향이었다.
매미누꽃동충하초(Paecilomyces sinclairii)를 전라남도 백양사의 인근 숲에서 채집하여 균주를 순수 분리하고 균사의 최적 배양조건과 특성을 조사하였다. 균사생장에 적합한 pH는 $5{\sim}9$의 범위였으며 pH 8에서 가장 왕성한 균사생장을 보였고, 온도는 $25{\circ}C$가 적합하였다. 균사생장에 가장 적합한 배지는 Hamada 배지였으며 탄소 영양원은 dextrin, 질소 영양원은 glutamine인 것으로 조사되었다. 균사의 생장은 C/N비가 20:1일 때, 옥수수추출물과 우유가 혼합한 배지에서 가장 양호하였다. 자실체는 20%의 누에번데기가 첨가된 현미배지에서 500lux, $25{\circ}C$의 조건으로 배양할 때 가장 자실체 형성이 우수하였다.
본 연구는 섬유소분해능이 우수한 L. japonicus의 균사생육에 미치는 중요 인자에 대한 배양학적 특성을 규명하여 인공재배 및 균사체 배양을 이용한 섬유소분해효소의 생산을 높일 수 있는 기초자료를 얻고자 실험을 수행하였다. 그 결과, 균사체 배양의 최적온도는 $30^{\circ}C$이었으며, 최적 pH 는 6.0이었다. 균사생장에 적합한 배지는 glucose peptone 배지, malt yeast extract 배지, yeast malt peptone 배지, potato dextrose 배지, Hennerberg 배지 등으로 조사되었다. 균사생장에 가장 양호한 탄소원은 dextrose 였으며, 최적농도는 1.2%이었다. 또한 질소원으로서 균사생장에 가장 양호한 유기, 무기질소원, 아미노산의 종류 및 최적농도는 각각 yeast extract(1.7%), $(NH_4)_2HPO_4(0.2%)$, glutamine(0.2%) 이었다. 균사생장에 양호한 무기염류는 $Al_2(SO_4)_3{\cdot}14H_2O$인 것으로 조사되었으며 최적농도는 0.1 M 이었다.
체세포배 유도를 통해 두릅나무 역병 저항성 개체인 '자오'의 효율적인 재분화가 가능하였다. 절편에 따라 배발생 캘러스에 요구되는 생장조절제의 종류가 다르게 나타났다. 잎의 경우 MS 배지에 2,4-D와 TDZ, L-glutamine이 처리된 배지에서 캘러스와 체세포배의 유도가 양호하였으며, 엽병과 뿌리는 2,4-D 단독처리 시 가장 좋은 결과를 얻을 수 있었다. 적정 배양조건하에서 배발생캘러스 유도율은 잎, 엽병, 뿌리로부터 각각 75%, 67% 및 83%를 나타냈다. 삼투압제 처리에 따른 체세포배의 발아율은 sucrose, glucose, maltose모두 90% 이상의 발아율을 보였으나, 식물체 형성은 2% sucrose에서 72%로 가장 좋았다. 어린 식물체는 생장조절제를 첨가하지 않은 1/2MS 배지에서 정상 식물체로 생장하였고, 인공상토에 이식하여 95% 이상 순화하였다. 본 실험결과는 두릅나무 역병 저항성 개체 '자오'의 체세포 배발생을 통한 기내 대량증식이 가능함을 보여주었다.
Tropomyosin (TM) is an important actin binding protein involved in regulation of muscle contraction. Unacetylated striated tropomyosin failed to bind to actin whereas unacetylated smooth tropomyosin bound well to actin. It has been demonstrated that high actin affinity of unacetylated ${\alpha}-tropomyosin$ was ascribed to the carboxyl terminal amino acid residues. In order to define the role of the carboxyl terminal residues of tropomyosin molecule on actin binding, two mutant tropomyosins were constructed. TM11 is identical to the striated tropomyosin except that the carboxyl terminal last three amino acids was replaced with $^{282}NNM^{284}$ whereas in TM14 $^{276}HA^{277}$ was substituted with smooth specific $^{276}QT^{277}$. TM11 and TM14 were overproduced in Escherichia coli and analyzed for actin affinity. The apparent binding constants (Kapp) of unacetylated tropomyosins were $2.2{\times}10^6M^{-1}$ for sm9, $1.03{\times}10^6M^{-1}$ for TM14, $0.19{\times}10^6M^{-1}$ for TM11, $>0.1{\times}10^6M^{-1}$ for striated, respectively. This result indicated that higher actin affinity of the unacetylated smooth tropomyosin was primarily attributed to the presence of QT residues in the smooth sequence. In case of the Ala-Ser (AS) dipeptide extension of the amino terminus of tropomyosin, Kapp were $21.1{\times}10^6M^{-1}$ for AS-sm9, $8.0{\times}10^6M^{-1}$ for AS-11, $4.7{\times}10^6M^{-1}$ for AS-14, $3.8{\times}10^6M^{-1}$ for AS-striated. AS-TM11 showed considerably higher actin affinity than AS-TM14, implying that interaction of Ala-Ser of the amino terminus with the carboxyl terminal residues. Since Kapp of AS-TM11 was significantly lower than that of AS-sm9, the presence of QT might be required for restoration of high actin affinity of the smooth ${\alpha}-tropomyosin$. These results suggested that the carboxyl terminal amino acid residues Glutamine275-Threonine276 are important for actin affinity of the recombinant smooth ${\alpha}-tropomyosin$, particularly of unacetylated smooth ${\alpha}-tropomyosin$.
고염에서 자라는 원시 박테리아인 Halococcus agglomeratus에서 Thiol-specific antioxidant 활성을 보이는 분자량이 22-kDa인 향산화 단백질을 순수 분리 정제하여 향산화 활성의 특성을 조사하였다. 그 결과 진핵 세포의 Thiol-specific antioxidant protein (TSA of TPx)과 유사한 활성을 갖는 것을 확인 할 수 있었다. 정제된 Thiol-specific antioxidant protein 은 환원제로 thiol 성분을 갖는 비효소적 금속 촉매 산화계( $Fe^{3+}$, $O^2$, DTT 또는 2-mercatoethanol : thiol- MCO system)에 의하여 Glutamine Synthetase (GS)의 불활성화를 방어하고 Ascorbate 같은 nonthiol 성환원제를 갖는 금속 촉매 산화계 ( $Fe^{3+}$, $O^2$, Ascorbatenol: nonthiol- MCO system)에 의해서는 GS의 불활성화를 방어하지 못하였다. 이것은 환원형 thiol성분이 항산화 단백질의 항산화 활성에 전자 공여체로 요구되어 지기 때문이라고 판단된다. 이 단백질은 다른 TPx와는 다르게 100%의 활성을 나타내려면 NaCl의 농도가 500mM이상이 되어야 한다. 이상의 결과는 원시 박테리아에도 TPx가 존재하여 활성 산소종을 제거하는 생화학적 역할을 수행함을 시사하고 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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