The effects of operating pressure, lactate concentration, impurities, and pH on solution flux and lactate rejection in nanofiltration were investigated with model sodium lactate solutions (lactate 10~200g/L) as a model system. In the tested range of pressure(80~140 psig), the solution flux was observed to be proportional to the operating pressure and the rejection of lactate increased only slightly with the pressure. Both of the flux and the rejection decreased with lactate concentration, while the recovery rate of lactate increased. The effects of glucose and yeast extract as impurities on lactate rejection were negligible, but the flux decreased significantly with the addition of yeast extract. At low lactate concentrations, the rejection of lactate increased with pH due to the increased repulsion (Donnan exclusion effect) between lactate ions and membrane surface. But, at high lactate concentrations, the donnan effect was observed to be overwhelmed by the effect of sodium ions added to adjust the pH, and the rejection of lactate decreased with pH. When fermentation broth containing about 89g/L of lactate was nanofiltered, the flux and the rejection of lactate were 2.8L/$m^2$h and 5%, respectively at 120psig. Both of them were slightly lower than those with model solutions. The recovery rate was 2.6mol/$m^2$h.
The orf8(chlD) gene cloned from Streptomyces antibioticus T$\"{u}$99 was overexpressed using an E. coli system to confirm its biological function. Induction of the E. coli strain transformed with recombinant plasmid pRFJ 1031 containing orf8 resulted in the production of a 43,000 dalton protein. Glucose-1-phosphate thymidylyltransferase activity of the cell extract obtained from the transformed strain was 4-5 times higher than that of the control strain. The expressed protein was purified 18-fold from E. coli cell lysate using three chromatographic steps with a 17% overall recovery to near homogeneity. The N-terminal amino acid sequence of the purified protein agrees with the nucleotide sequence predicted from the orf8 gene. The SDS-PAGE estimated subunit mass of 43,000 dalton agrees well with that calculated from the amino acid composition deduced from the nucleotide sequence of the orf8 gene (43,000 Da). Also, the native enzyme has a monomeric structure with a molecular mass of 43,000 dalton. The purified protein showed glucose-1-phosphate thymidylyltransferase activity catalyzing a reversible bimolecular group transfer reaction, and was highly specific for dTTP and ${\alpha}$-D-glucose 1-phosphate as substrates in the forward reaction, and for dTDP-D-glucose and pyrophosphate in the reverse reaction.
A method for the determination of glucose in human whole blood by chemiluminescence method using a stopped flow injection system has been studied. The method is based on the differences in the chemiluminescence intensities of luminol due to the different amounts of hydrogen peroxide produced from the glucose oxidase catalyzed reaction. The enzyme reactor was prepared by immobilization of glucose oxidase on aminopropyl glass beads and the chemiluminescence from a flow cell was measured by means of an optical fiber bundle. In order to obtain the optimum experimental conditions, effects of pH for the chemiluminogenic solution and enzyme reactor, flow rate and temperature on the chemiluminescence intensity were investigated. The calibration curve obtained under optimum experimental conditions was linear over the range from $1.0{\times}10^{-1}$ mM to 7.0 mM and the detection limit was $6.0{\times}10^{-2}$ mM. The proposed method was applied to the determination of glucose in whole human blood sample and the results were compared with those obtained by an official method. The present method was also evaluated by the results of recovery experiments.
Degradation and glucose production from wood chips of white pine (Pinus strobus) and tulip tree (Liriodendron tulipifera) by several white rot fungi were investigated. The highest weight losses from 4 g of wood chips of P. strobus and L. tulipifera by the fungal degradation on yeast extract-malt extract-glucose agar medium were 38% of Irpex lacteus and 93.7% of Trametes versicolor MrP 1 after 90 days, respectively. When 4 g of wood chips of P. strobus and L. tulipifera biodegraded for 30 days were treated with cellulase, glucose was recovered at the highest values of 106 mg/g degraded wood by I. lacteus and 450 mg/g degraded wood by T. versicolor. The weight loss of 10 g of wood chip of L. tulipifera by T. versicolor on the nutrient non-added agar under the nonsterile conditions was 35% during 7 weeks of incubation, and the cumulative amount of glucose produced during this period was 239 mg without cellulase treatment. The activities of ligninolytic enzymes (lignin peroxidase, manganese peroxidase, and laccase) of fungi tested did not show a high correlation with degradation of the wood chips and subsequent glucose formation. These results suggest that the selection of proper wood species and fungal strain and optimization of glucose recovery are all necessary for the fungal pretreatment of woody biomass as a carbon substrate.
Flavin adenine dinucleotide-dependent glucose dehydrogenase (FAD-GDH) can utilize a variety of external electron acceptors and also has stricter substrate specificity than any other glucose oxidoreductases, which makes it the ideal diagnostic enzyme in the field of glucose biosensors. A gene coding for a hypothetical protein, similar to glucose oxidase and derived from Aspergillus terreus NIH2624, was overexpressed in Pichia pastoris GS115 under the control of an AOX1 promoter with a level of 260,000 U/l in the culture supernatant after fed-batch cultivation for 84 h. After a three-step purification protocol that included isopropanol precipitation, affinity chromatography, and a second isopropanol precipitation, recombinant FAD-GDH was purified with a recovery of 65%. This is the first time that isopropanol precipitation has been used to concentrate a fermentation supernatant and exchange buffers after affinity chromatography purification. The purified FAD-GDH exhibited a broad and diffuse band between 83 and 150 kDa. The recombinant FAD-GDH was stable across a wide pH range (3.5 to 9.0) with maximum activity at pH 7.5 and $55^{\circ}C$. In addition, it displayed very high thermal stability, with a half-life of 82 min at $60^{\circ}C$. These characteristics indicate that FAD-GDH will be useful in the field of glucose biosensors.
With cells of Streptomyces spp K-45 isolated from soil, the immobilization of glucose isomerase by a series of treatments ; heat, carefully manipulated drying, extrusion with a thickening agent, and glutaraldehyde-induced crosslinking, was presented. This was aimed to obtain a mechanically stable form of whole cell containing glucose isomerase. The resulted pellet form had a good mechanical strength, compared with a commercial product, and showed 26 % of the activity recovery. The specific activity was 48.1 units per g of the dry material. The immobilized glucose isomerase generally showed properties similar to those of the soluble enzyme ; optimal pH at $7.5{\sim}9.0$, optimal temperature at $80{\sim}85^{\circ}C$, activation energy of 10.9 kcal/mole, and $K_m$ for glucose of 10.9M. The immobilized enzyme was very thermostable and pH stable.
Baclgrpimd; Recent studies have suggested that the cardioprotective effect of ischemic preconditioning(IP) is closely related to glycogen depletion and attenuation of intracellular acidosis. In the present study, the authors tested this hypothesis by perfusion isolated rabbit hearts with glucose(G) is closely related to glycogen depletion and attenuation of intracellular acidosis. In the present study, the authors tested this hypothesis by perfusion isolated rabbit hearts with glucose(G)-free perfusate. Material and Method; Hearts isolated from New Zealand white rabbits(1.5~2.0 kg body weight) were perfused with Tyrode solution by Langendorff technique. After stabilization of baseline hemodynamics, the hearts were subjected to 45 min global ischemia followed by 120 min reperfusion with IP(IP group, n=13) or without IP(ischemic control group, n=10). IP was induced by single episode of 5 min global ischemia and 10 min reperfusion. In the G-free preconditioned group(n=12), G depletion was induced by perfusionwith G-free Tyrode solution for 5 min and then perfused with G-containing Tyrode solution for 10 min; and 45 min ischemia and 120 min reperfusion. Left ventricular functionincluding developed pressure(LVDP), dP/dt, heart rate, left ventricular end-distolic pressure(LVEDP) and coronary flow (CF) were measured. Myocardial cytosolic and membrane PKC activities were measured by 32P-${\gamma}$-ATP incorporation into PKC-specific peptide and PKC isozymes were analyzed by Western blot with monoclonal antibodies. Infarct size was determined by staining with TTC(tetrazolium salt) and planimetry. Data were analyzed by one-way analysis of variance (ANOVA) and Turkey's post-hoc test. Result ; In comparison with the ischemic control group, IP significantly enhanced functional recovery of the left ventricle; in contrast, functional significantly enhanced functional recovery of the left ventricle; in contrast, functional recovery were not significantly different between the G-free preconditioned and the ischemic control groups. However, the infarct size was significantly reduced by IP or G-free preconditioning(39$\pm$2.7% in the ischemic control, 19$\pm$1.2% in the IP, and 15$\pm$3.9% in the G-free preconditioned, p<0.05). Membrane PKC activities were increased significantly after IP (119%), IP and 45 min ischemia(145%), G-free [recpmdotopmomg (150%), and G-free preconditioning and 45 min ischemia(127%); expression of membrane PKC isozymes, $\alpha$ and $\varepsilon$, tended to be increased after IP or G-free preconditioning. Conclusion; These results suggest that in isolated Langendorff-perfused rabbit heart model, G-free preconditioning (induced by single episode of 5 min G depletion and 10 min repletion) colud not improve post-ischemic contractile dysfunction(after 45-minute global ischemia); however, it has an infarct size-limiting effect.
The efficiency of clove oil, MS-222, and 2-phenoxyethanol was evaluated as anesthetics in juvenile Scomber japonicus. Stage A5 of anesthesia was assumed to be sufficient for conducting routine aquaculture procedures in less than 3 min, with recovery (stage R5) in less than 5 min. The lowest effective doses of the three anesthetics were 50 mg $L^{-1}$ clove oil (anesthetic time of 71.3 s and recovery time of 167.0 s), 100 mg $L^{-1}$ MS-222 (anesthetic time of 70.7 s and recovery time of 115.7 s), and 400 mg $L^{-1}$ 2-phenoxyethanol (anesthetic time of 86.7 s and recovery time of 95.0 s). Anesthetic times decreased with increasing doses for all three anesthetic agents, and fish anesthetized with clove oil exhibited the longest recovery times. After 30 min, the highest plasma cortisol and lactate levels were detected with the use of clove oil, whereas the lowest values were observed with 2-phenoxyethanol. In addition, high glucose levels were maintained during recovery with clove oil, but the treatments did not significantly differ. The most effective of the three anesthetic agents was 2-phenoxyethanol, although all were considered acceptable for use in cultures of juvenile Scomber japonicus.
Although extracorporeal circulation (ECC) has been routinely used for cardiovascular surgery, hyperoxemia during ECC may produce oxygen toxicity and cellular injury. This study was performed to investigate the clinical influences of hyperoxemic ECC during cardiovascular operation. 40 adult patients scheduled for elective cardiovascular surgery were classified into normoxemic (arterial oxygen tension: 115 mmHg, n=20) and hyperoxemic (arterial oxygen tension: 380 mmHg, n=20) ECC. At preoperative and postoperative period, total leukocyte and neutrophil counts, platelet counts, iron, glucose, aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), blood urea nitrogen (BUN), and creatinine in peripheral arterial blood, malondialdehyde (MDA) and troponin-T concentration (TnT) in coronary sinus blood, pulmonary vascular resistance (PVR), and postoperative blood loss volume (BLS) were measured and compared between groups. Hyperoxemic group had postoperatively higher total leukocyte and neutrophil counts, MDA, TnT, PVR total BLS, iron, glucose, AST, ALT, BUN, and creatinine than normoxemic group (p<0.05).0 conclusion, hyperoxemic ECC results in greater inflammatory response and oxidative damaging effects on the heart lung, liver and kidney, probably being adverse to postoperative patient recovery. For reducing these deleterious effects and improving postoperative outcomes, management lowering oxygen tension during ECC is recommended.
Tinospora crispa (L.) is a medicinal plant traditionally used to treat various ailments including diabetes. The stem has been widely studied for its antidiabetic properties, however the antidiabetic potential of its leaves has not been explored. This study investigates the antidiabetic properties of methanolic T. crispa stem and leaves extracts on alloxan-induced diabetic rats. The stems and leaves were extracted using Soxhlet extraction with methanol as solvent. Crude extracts were administered at 500 mg/kg body weight (BW) (high dose) and 250 mg/kg BW (low dose) via oral route to alloxan induced diabetic rats. T. crispa stem and leaves extracts was found to significantly reduce blood glucose following a twelve-week treatment period. The highest mean difference in blood glucose level was exhibited by animals in the high dose treated stem and low dose leaf extracts. Both extracts showed approximately 75% percentage recovery from hyperglycaemia. The highest regenerative capacity was observed in animals treated with the low dose leaf extract.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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