1) 조효소액(粗酵素液)을 유안염석(硫安鹽析)(0.5포화도(飽和度)) Sephadex G 25에 의(依)한 제염(除鹽), CM Cellulose column chromatography, Sephadex G 25에 의(依)한 농축(濃縮), Sephadex G 75 gel filtration에 의(依)하여 Specific activity 126.5/mg protein, 원활성(原活性)의 약(約) 45배(倍), 수율(收率) 4.2%의 정제효소(精製酵素)를 얻었다. 2) 정제효소(精製酵素)를 Acrylamide gel disc electrophoresis에 의(依)하여 분리(分離)시킨 결과(結果) 하나의 주(主)된 band와 그 양측(兩側)에 2개(個)의 희미한 band가 나타나 있으므로 하나의 순수(純粹)한 단백질(蛋白質)이라고는 할 수 없으나 조효소액(粗酵素液)에 비(比)하여 상당(相當)히 정제(精製)되었다.
Type II제한효소 Stu I을 순수정제하고 그 효소적 특성을 연구하였다. 100g(we weight)의 Streptomyces tubercidicus(ATCC 25502)로부터 얻은 crude extranct를 ammonium sulfate fractionation한 후, DEAE-Sephadex(A-50), QAE-Sephadex(A-50) 그리고 Heparin-agarose의 순서로 column chromatography를 수행하여 1,2mg의 비특이성 nuclease가 없는 Stu I 제한효소를 얻었다. 이 시료에 포함되어 있는 다른 오염 단백질은 Sephadex G-100 column으로 gel filtration 하여 제거함으로써, 순수한 Stu I 단백질을 얻을 수 있었다. 정제된 Stu I 제한효소는 10% SDS-polyacrylamide gel electrophoresis 결과 한 개의 band로 나타났으며, 그 분자량은 34,000 $\pm$ 1,000 dalton이었다. 이 효소는 $Mg^{2+}$이온 존재하에 중성의 pH(7.0-8.0)에서 최대의 활성을 나타내었다. NaCl은 이 효소의 활성에는 필요하지 않았다.
PIeurotus ostrealus의 배양액에서 syringic acid에 의해 유도되는 peroxidase의 활성이 추정되었다. 본 효소는 DEAE Sephadex A-50 이온교환크로마토그래피와 Sephadex G-150 첼 여과크로마토 그래피를 통하여 순수분리 되었다. 순수분리된 효소는 당함량이 35.7%인 당단백젤이었으며. SDS-linear polyacrylamide gradient gel 전기영동과 젤여과크로마토그래피에 의해 분자량(Mr) 72.400인 2개의 동일한 소단위체로 이루어진 이합체로 판명되었다. 본 효소는 흡광 스펙프럼의 분석결과, iron protoporphyrin IX의 구조를 갖는 2개의 heme을 조효소로 가지고 였는 것으로 추정되였다. 본 효소의 등전점은 4.26 이었고 $H_2O_2$에 대한 $K_m$값은 $7.2{\mu}M$이었다. 본 효소의 반응 최적온도는 $40^{\circ}C$, 최적 pH는 3.5에서 4.0 사이였다. Ferulic acid와 sinapic acid에 대한 본 효소의 친화도(Km)는 horseradish peroxidase에 비해 각각 2.4. 12.3배 더 높은 것으호 계산되었다.
Lactobacillus plantarum 용균 효소를 생산하는 균주를 배양하여 생산된 효소를 정제한 결과 비활성도가 5.8 units/mg protein 이었고 정제도 8.3배, 수율은 30%이었다. 정제효소의 분자량은 gel filtration과 SDS-polyacrylamide gel eletrophoresis를 이용하여 측정한 결과 60,000 kDa 이었다. 용균 효소의 최적 반응 시간은 20분이었으며 최적 온도는 4$0^{\circ}C$, 최적 pH는 3.0이었다. 온도 안정성은 각 온도에서 30분간 처리하였을 때 $30^{\circ}C$까지는 안정하였으나 4$0^{\circ}C$에서는 80% 활성을 나타내었다. 효소의 pH 안정성은 실온에서 1시간 처리하였을 때 pH 4~7에서 안정성을 나타내었다.
콩 유용성분 탐색의 일환으로 그리고 향후 콩 ferritin 항체 및 유전자 확보를 목표로 발아된 콩으로부터 ferritin을 분리 정제하여 그 몇가지 특성을 조사하였다. 72시간 발아된 콩으로부터 ammonium sulfate 침전(0.55 saturation), DEAE-cellulose, Sephacryl S-300, Bio-Scale Q2 column chromatographies를 통하여 ferritin을 분리하였다. 정제된 콩 ferritin은 SDS-PAGE 분석에서 21 kDa의 크기를 나타냈으며, Sephacry S-300을 통한 겔거르기 chromatography와 non-denaturing 폴리아크릴아마이드 전기영동 분석에서 $510{\sim}560\;kDa$의 크기로 측정 되었다. 또한, immunodiffusion test에서 anti-soybean ferritin antiserum과 상호 반응하였다. 원자흡광광도계와 표준 철 용액을 이용한 정제된 콩 ferritin 중의 철 함유량은 833 mol Fe/mol protein 이었으며, 이는 호박씨로부터 분리한 ferritin보다 31배 더 많은 양의 철 함유량 이었다. 정제된 콩 ferritin중의 철은 horse spleen ferritin 중의 철과 유사하게 iron staining 되었다.
Phytase(myo-inositol hexakisphosphate phosphohydro-lase;EC 3.1.3.8)는 흰주 소장 점막으로 부터 분리${\cdot}$정제 하였다. 이 정제된 효소를 Sephacryl S-200 gel filtration방법으로 측정한 분자량으니 160kDa이고, 순도 및 이 효소의 서브유니트를 SDS-polycrylamide gel전기영동법(SDS-PAGE)으로 조사한 결과 서브유니트 구조는 분자량이 10kDa와 90kDa으로 구성된 hetrodimer(이종이량체)임을 알 수 있었다. 그리고 $ MgCl_{2}$ 존재 하에서는 효소 활성이 증가하나 $ZnCl_{2}$, $MnCl_{2}$, 및 EDTA존재 하에서는 효소 활성이 저해되었다. 기질 트이성과 pH범위에서 기질인 phytic acid(inositol-hexakispho-sphate)에 대해 높은 친화력을 보였다. Phytic acid에 대한 Km값은 pH 7.4에서 0.31mM이다. 따라서 흰쥐의 소장 점막 phytase는 주로 inositol의 대사계에서 중요한 역할을 하는 것으로 생각된다.
Water-soluble browning pigments were artily purified from Korean red ginseng through the several procedures such as fractionation by n-butanol, precipitation by ethanol, dialysis and gel filtration. At least four kinds of water-soluble browning pigment were separated from each other, two kinds of low-molecular-weight and two kinds of high-molecular-weight pigments.
Pectinesterase was isolated from the culture medium of Aspergillus japonicus and partially purified by DEAE-Sephadex batchwise, Sephadex G-75 gel filtration and ion exchange chromatography. The purified enzyme solution was completely free from polygalacturonase which depolymerizes pectin molecule. The ability of the pectinesterase to demethylate high methoxyl pectin was investigated. On 20 minute of incubation methoxyl content of low methoxyl pectin decreased from 88% to 6.93%. In general gel prepared with the pectin containing lower methoxyl content showed the lower value of percent sag, and showed the hieher Bel strength. Textural characteristics of pectin gel determined by Rheometer showed that as the methoxyl content was lowered, hardness and resilience of the gel were increased and cohesiveness was decreased. Apple juice containing HMP and organic acids can be converted into low methoxyl pectin apple jelly by the action of pectinesterase and addition of calcium ion. The strength of low methoxyl pectin apple jelly increased when it stored at room temperature.
제주도산 우뭇가사리로부터 agar를 제조하여 분석용 등급의 agarose 제조를 위하여 cetylpyridium chloride (CPC), polyethylene glycol (PEG), chitosan을 처리하여 agaropectin을 제거하여 agarose를 분리, 정제하였다. 3가지 방법중 chitosan을 처리하여 정제한 agarose는 황산기 함량이 가장 낮았으며, electroendosomosis도 가장 낮은 수치를 나타내어 분석용 agarose 제조를 위한 가장 효율적인 방법으로 나타났으며 실제 DNA 전기영동 실험에서도 가장 우수한 resolution을 나타내었으며 교차면역 전기영동에서도 시판되고 있는 제품에 비하여 품질이 양호함을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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