• 미생물학회지
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• 제20권4호
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• pp.183-188
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• 1982

Clostidium botulinum type B가 생성하는 독소를 정제할 수 있는 방법을 연구하였다. 정제과정은 독소를 ammonium sulfate로 배양액에서 침전시켜 추출한후 Polymin P를 처리하여 핵산 및 기타 단백질을 최대한 제거한 후 Sephaex G-I00에서 gel fiItration을 시키고 DEAE-Sephadex로 이온교환 크로마토그래피를 시켰다. 이러한 과정으로 정제된 독소의 회수율은 17%였으며 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis 결과 하나의 선을 나타내 동질성을 증명하였다. 정제된 독소의 분자량은 163,000이였으며 $\beta$-mercaptoethanol을 사용하여 환원시킨 결과 분자량 106,000과 56,000의 하위 단위체로 분리되었다.

• 미생물학회지
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• 제25권1호
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• pp.1-8
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• 1987

An extracellular $\beta$-1, 3-glucanase from Pseudomonas stutzeri KF 13 was purified about 390 with 26% recovery. The purified enzyme revealed a single band by polyacrylamide gel electrophoresis and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The enzyme was stable in a pH 6.0 to 9.0, and relatively thermostable. The optimal pH and temperature on the enzyme activity were found to be 5.8 and 45.deg.C, respectively. The activation energy was calculated to be 16,130 cal per mole. The Km value for laminarin was found to be 3ng per ml and the molecular weight was determined to be 28,000 by gel filtration and 26,000 daltons by SDS-acrylamide gel electrophoresis. The enzyme was inhibited by 1.0mM of $Hg^{2+}$, and strongly inhibited by 1.0mM of p-chloromercuribenzoic acid.

• KSBB Journal
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• 제14권5호
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• pp.539-542
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• 1999

의 대량생산과 분리.정제 기술의 개발을 위해 Arthrobacter ureafaciens KCTC 3387 균주를 이용한 발효 및 분리정제된 효소반응을 통한 DFAIII의 생산과 회수에 대하여 조사하였다. 첫 번째 방법으로는 Arthrobacter ureafaciens 균주를 발효배양하여 DFAIII 양이 최고가 되는 시점에서 발효정지 시킨후 silica gel를 통해 gel filtration을 분리하였고, 두 번째 방법으로는 정제된 효소로 반응시킨 다음 silica gel을 통해 gel filtration을 하여 분리하였으며, 세 번째 방법으로는 발효배양상등액에 에탄올을 첨가하여 생산물을 침전시켜 DFAIII를 분리하였다. 25 g/L의 초기 inulin 농도로부터 각각 1.57, 4.40, 0.34 g/L 의 정제분말이 얻어져 각각 6.3, 17.6, 1.4%의 수율로 회수되었고, 81, 97, 87%의 순도를 각각 나타내었다. 효소반응을 통한 DFAIII 생산 및 회수가 가장 높은 수율과 순도로 회수되었으며, 발효배양을 통한 DFAIII의 생산은 초기기질농도 25 g/L의 50%에 해당하는 DFAIII가 생산되었으나 효소반응에 의한 생산보다는 낮은 수율로 회수되었고 순도는 세 가지 방법 중 가장 낮았으며, 에탄올 침전반응은 가장 낮은 수율을 나타내었다.

• 한국임상수의학회지
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• 제7권2호
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• pp.471-487
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• 1990

Present experiment was performed in order to establish the optimum conditions for quantitation of ${\gamma}$-GTP and AGS activities in rat urine and investigate the applicability of the these enzymes in experimental assessment of nephrotoxicity in rats. The results obtained were as follows. 1. The optimal pH of Tris-BCI buffer containing glycylglycine for determination of urinary ${\gamma}$-GTP activity was 7.6(37$^{\circ}C$). 2. The Michaelis constant of urinary ${\gamma}$-GTP ranged from 1.1 to 1.2 mmol/$\ell$. 3. The optimal pH of citrate buffer for determination of urinary AGS activity was 3.6(37$^{\circ}C$). 4. The Michaelis constant of urinary AGS ranged from 0.8 to 0.9mmo1/$\ell$. 5. Coefficient of variance for within-run imprecision of urinary ${\gamma}$-GTP ranged from 3.8 to 6.4％ and that of urinary AGS ranged from 2.5 to 4.1％. 6. There was no significant difference between gel-filtered samples and crude samples in the mean activity of urinary ${\gamma}$-GTP and the intra-individual differences by gel-filtration were either increased or decreased. Mean values of ${\gamma}$ -GTP activities in gel-filtered samples and crude samples were 1570 and 1590 U/$\ell$, repectively. 7. The mean activity of urinary AGS increased significantly after gel-filtration and all the individual urines revealed higher activities after gel-filtration. 8. ${\gamma}$-GTP and AGS activities were linear to 135 and 7U/$\ell$, respectively. 9. Urinary ${\gamma}$-GTP and AGS excretion before administration of potassium dichromate were 22.1 ${\pm}$ 11.2 and 0.5${\pm}$0.2 U/24hrsㆍkg body weight respectively and increased significantly to 102.3${\pm}$44.5 and 5.8${\pm}$3.30/24hrsㆍkg body weight respectively within 24 hours after administration. 10. BUN increased continuously from 24 hours following exposure to potassium dichromate in all 10 rats. From these findings it is concluded that the urinary ${\gamma}$-GTP and AGS excretions are early and sensitive indicators for nephrotoxicity assessment in rat.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제31권3호
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• pp.224-229
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• 2003

경기도 일대의 가금류 공장부근 토양로부터 keratinolytic protease 생산성이 우수한 균주 KP-364를 선별하여 본 효소를 정제하고 일반적인 특성을 조사하였다. 본 효소는 ulkafiltration, ammonium sulfate fiactionation, DEAE-cellulose ion-exchange chromatography, Sephadex G-150 gel filtration 등을 통하여 정제되었으며 회수율은 25.2%이었다 SDS-PAGE와 gel filtration으로. 단일성과 분자량을 추정한 결과 전기영동 상에 단일 band를 나타내었으며 분자량은 약 36,000 dalton이였으며 1개의 subunit로_구성되어 있었다. 효소반응의 최적조건을 검토한 결과 최적 pH는 6.5, pH 3.0에서 10.0까지 90%이상의 활성을 나타냈으며 반응 최적 온도는 $37^{\circ}C$이였고 $60^{\circ}C$에서 1시간동안 80%이상의 활성을 유지하였다. 정제된 효소의 활성은$ FeSo_4$, KCI, $Li_2$$SO_4$를 첨가하였을 때 증가하였으며 $Ag_2$$SO_4$, $CuCl_2$, $HgCl_2$에 의해 저해되었다. 또한 EDTA, EGTA에 의해 저해되는 것으로 보아 metalloprotease의 일종이라고 판단되며 $Li^{ +}$를 cofactor로 함유하고 있는 것으로 조사되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권5호
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• pp.440-446
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• 1989

Penicillium sp. CB-20의 polygalacturonase 생성을 위한 최적조건은 탄소원으로 펙틴을 사용하여 16 시간 배양시 최대 활성을 나타내었으며, Sephadex G-25, G-75 및 G-150을 사용한 gel filtration과 DEAE-cellulose, DEAE-Sephadex A-50에 의 한 ion exchange chromatography를 통하여 이 효소를 약 30배 가량 정제할 수 있었고, 수율은 2.31%였다. 정제효소는 polyacrylamide gel electrophoresis에 의하여 단일 밴드로 확인 되었으며, 분자량은 SDS PAGE에 의하여 21,000 정도로 측정되었다. 효소의 결정구조는 마름모꼴을 형성하고 있었으며 아미노산 조성은 17종류로써 glutamic acid, glycine, hlstidine의 함량이 비교적 많았다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제30권4호
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• pp.305-310
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• 1987

대두 및 고구마로부터 얻은 ${\beta}-Amylase$의 단백질 구조를 CD Spectra, 항체반응, 화학적 절단을 통하여 비교하였다. 고구마 ${\beta}-Amylase$는 4개의 동일한 subunit로 구성되어 있으며 대두 ${\beta}-Amylase$는 Subunit구조를 하고 있지 않았다. 또한 두 효소는 변성시킨 상태에서 SDS-gel전기영동, gel filtration한 결과 분자량은 동일하였다. 그리고 대두 및 고구마 ${\beta}-Amylase$는 CD spectra상 유사한 2차구조를 나타내고 있으나 방향족 측쇄가 상이함을 나타냈다. 한편 cyteine 잔기 및 methionine 잔기의 화학적 절단한 결과 두 효소는 동일한 아미노산 배일을 나타냈다. 또한 면역학적인 방법에 의해서도 두 효소는 유사성이 인정되었다. 한편 대두 ${\beta}-Amylase$에 대한 항체는 고구마 ${\beta}-Amylase$의 활성을 억제하였으나 밀, 보리, 무우 ${\beta}-Amylase$에 대해서는 활성 억제가 나타나진 않았다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제27권4호
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• pp.271-277
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• 1984

Pseudomonas stutzeri IAM 12097이 생산(生産)하는 Exo-maltotetraohydrolase의 gel filtration에 의하여 추정(推定)된 분자량(分子量)은 60,000이었고, SDS-polyacrylamide gel electrophoresis에 의하여 추정(推定)된 분자량(分子量)은 63,000이었으며 등전점(等電點)은 PH 4.8이었다. 최적(最適)pH는 6.6, PH안정(安定)범위는 $6.0{\sim}10.5$, 최적온도(最適溫度)는 $45{\sim}50^{\circ}C,\;40^{\circ}C$이하(以下)에서는 안정(安定)하였으며, $55^{\circ}C$이상(以上)에서는 급격하게 불활성화(不活性化)되었다. 본효소(本酵素)는 $Ag^+,\; Hg^{++},\;I_2,\;{\beta}-cycoldextrin$에 의하여 완전(完全)히 저해(沮害)되었고 EDTA, ${\rho}-CMB$, IAA에 의하여 약간 저해(沮害)되었다. soluble starch, amylopectin, amylose에 대(對)한 Michaelis constant(Km)는 각각(各各) 7.70mg/ml, 6.17mg/ml, 5.56mg/ml이었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제33권1호
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• pp.73-78
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• 1990

한국산 토마토로부터 endo-polygalacturonase를 gel filtration과 이온교환크로마토그라피에 의하여 약 24배 정제할 수 있었고, 최대 효소활성을 위한 PH는 5.0, 최적온도는 $50^{\circ}C$ 였으며 pH안정범위는 $4.0{\sim}5.0$, 열안정성은 $50^{\circ}C$에서 1시간 열처리 하였을 때 약 45 % 실활 되었다. 정제된 이 효소는 SDS-polyacrylamide gel 전기영동에 의하여 단일밴드로 확인되었으며, 그 분자량은 50,000정도였고, Km값은 $1.43{\times}10^{-1}\;mol/l이었다. 금속이온중 $Ag^+$, $Zn^{++}$이온이 효소의 활성을 촉진시켰으며, $Na^+$, $K^+$등의 이온에 의해서는 활성이 저해되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제11권1호
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• pp.15-21
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• 1983

전보에서 분리 동정한 Y-33 균주의 $\beta$-galactosise 효소생산조건을 검토하고 효소를 정제하여 정제효소의 성질을 조사한 결과는 다음과 같다. 1. 효소생산을 위한 최적초발 pH는 7.0이었고 최적온도는 $65^{\circ}C$이었다. 2. 효소는 lactose와 galactose에 의하여 유도되어졌으며 세포내효소이었다. 3. 조효소액을 1차 DEAE-cellulose, 2차 DEAE-cellulose column chromatography 및 Sephadex G-150로 gel filtration하여 정제도가 28.3배, 수율이 15.2%의 정제효소를 얻었다. 4. 정제효소는 polyacrylamide gel 전기 영동에 의하여 순도가 검정되었다. 5. 정제효소의 유당가수분해를 위한 최적작용 온도는 $65^{\circ}C$. pH는 6.5이었다.