소의 갑상선에 있는 xanthine oxidase 효소도 flavin adenine dinucleotide(FAD), 모리브덴 및 철을 cofactor로서 가지고 있었으며 그 비율은 1 : 0.36 : 1.6이었다 갑상선 xanthine oxidase의 분자량은 gel filtration과 gel electrophoresis방법으로 측정하였을 때 우유에서 추출한 xanthine oxidase의 분자량과 큰 차이가 없었다. 그 효소의 활성도는 pH7.8에서 가장 높았고 isoelectric point는 electrofocusing으로 측정하였을 때 pH 6.2 였다. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis 실험 결과는 소의 갑상선에서 추출된 xanthine oxidase가 세개의 subunit로 분해되었음을 지적했고, 최소 단위분자량 65,000정도의 polypeptide 4개로서 완전한 xanthine oxidase 한 분자를 구성하고 있을 가능성을 보였다. 갑상선 호소의 absorption spectrum을 우유에서 추출된 효소와 비교하였을 때 상당한 상이점을 나타내었다.
We propose a method for rapid evaluation and permanent record of sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoretic runs. This method is based on the photocopy process, rather than on photography and requires no extensive or expensive investment. Comparison of a print obtained through this method and a 35mm photography indicated, on a balanced gel, equal sensitivity.
연근별로 인삼 단백질의 생화학적 특성을 체계적으로 규명하기 위하여 polyacrylamide gel 전기영동, SDS-PAGE, gel filteration 및 아미노산 자동분석기에 의한 실험결과는 다음과 같다. 인삼의 수용성 단백질을 Sephadex G-200으로 분획하여 얻은 2개의 peak 중주 단백질은 SDS-polyacrylamide gel 전기영동에 의해 분자량은 43,000으로 추정되었다. Polyacrylamide gel 전기영동 및 SDS-PAGE에 의한 band의 수는 연근에 따라 별 차이 없이 각각 8 및 $7{\sim}11$개 확인되었다. 인삼의 수용성 단백질과 그의 주 단백질을 아미노산 분석한 결과 arginine이 각각 45.17과 57.36%로 최대의 함량을 나타내었고 methionine과 cystine의 함량은 매우 낮았다.
한국산 초파리(Drosophila melanogaster)의 starch gel 영동상을 조사하기 위하여 춘천, 진주, 신촌(서울), 대전의 초파리 4계통을 starch gel media를 사용하여 벤드의 분포, 염색강도 및 이동도를 비교 검토한 결과는 다음과 같다. 1) 춘천, 진주, 신촌(서울)의 3계통은 벤드의 수와 분포, 염색강도, 이동도가 다 같이 심한 변이를 나타내고 있는데 반하여 대전계통은 변이가 거의 없다. 2) 이러한 전기영동상의 차이는 대전 계통의 초파리 집단이 ADH구성에 관하여 동질적(homogeneous)이고 다른 3계통의 집단은 이질적(heterogeneous)이라는 것을 암시하고 있다. 3) 전기영동상이 4계통의 초파리에서 다 같이 암$\\cdot$수에 따라 차이를 보이고 있는데 이것은 설명하기 매우 어려운 문제로서 장차 분석 검토할 필요가 있다고 본다. 4) Starch gel media가 cellulose acetate media보다 해상력이 월등하다는 것이 재확인 되고 있다. 5) Agar gel이나 acrylamide gel 같은 다른 영동 media를 써서 ADH의 전기영동 실험을 하여 starch gel media를 사용한 본 실험의 결과와 비교하는 것과 ADH에 관한 유전적 분석이 시급히 요구되는 앞으로의 과제이다.
The microbial community during composting of gargage was analyzed using 16S rDNA PCR - DGCE (denaturing gradient gel electrophoresis). Pseudomonas spp. was found throughout the process, and thermophilic Bacillus spp. was dominated at the thermophilic stage. Six thermophilic bacteria were isolated and identified as B. caldoxylolyticus, B. thermoalkalophilus, and B. thermodenitrificans.
The single cell gel electrophoressis(SCGE) assay, also known as the comet assay, is a rapid, simple, visual and sensitive technique for measuring and analysing DNA breakage in mammalian cells. The SCGE or comet assay is a promising test for the detection of DNA damage and repair in individnal cells. It has widespread potential applications in DNA damage and repair studies, genotoxicity testing and biomonitoring. In this microgel electrophoresis technique, cells are embedded in agarose gel on microscope slides, iysed and electrophoresed under alkaline conditions. Cells with increased DNA damage display increased migration of DNA from the nucleus towards the anode. The length of DNA migration indicates the amount of DNA breakage in the cell. The comet assay is also capable of identifying apoptotic cells which contain highly fragmented DNA. Here we review the development of the SCGE assay, existing protocols for the detection and analysis of comets, the relevant underlying principles determining the behaviour of DNA and the potential applications of the technique.
Proteins secreted from bifidobacteria are believed to play important roles in human intestines via interacting with different host cells. In this respect, proteins secreted from Bifidobacterium pseudocatanulatum BP1, which has been rarely studied, were analyzed by two-dimensional gel electrophoresis (2DE). Using this approach, approx-imately 21 protein spots on a 2DE gel were detected and 10 of these spots were identified by mass spectrometry. Five spots were identified as hypothetical proteins and the remaining 5 spots were identified as a putative iron-side-rophore binding lipoprotein, a short-chain dehydrogenase/reductase SDR, an exonuclease, cytochrome P450 hydroxylase, and a putative dehydrogenase. The identification of secreted putative iron-siderophore binding lipoprotein was highly interesting since it is an important protein that is involved in ferric iron uptake in pathogenic bacteria. This finding could accelerate studies on the probiotic effect of Bifidobacterium by explaining the competition between bifidobacteria and intestinal pathogens for ferric iron.
An extracellular $\beta$-1, 3-glucanase from Pseudomonas stutzeri KF 13 was purified about 390 with 26% recovery. The purified enzyme revealed a single band by polyacrylamide gel electrophoresis and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The enzyme was stable in a pH 6.0 to 9.0, and relatively thermostable. The optimal pH and temperature on the enzyme activity were found to be 5.8 and 45.deg.C, respectively. The activation energy was calculated to be 16,130 cal per mole. The Km value for laminarin was found to be 3ng per ml and the molecular weight was determined to be 28,000 by gel filtration and 26,000 daltons by SDS-acrylamide gel electrophoresis. The enzyme was inhibited by 1.0mM of $Hg^{2+}$, and strongly inhibited by 1.0mM of p-chloromercuribenzoic acid.
The proteins from functional rice cultivars (Nogwonchalbyeo, Giant embryonic, Arhyangchalbyeo, and Goamibyeo) and general white rice were extracted and separated using two-dimensional (2D) gel electrophoresis. A wide variation in the molecular weight (MW) and pH range of the expressed proteins in rice samples were observed. The green-kerneled rice (Nogwonchalbyeo) exhibited proteins with MW of 9-57 kDa and appeared at a pH range of 4-7. The Giant embryonic contained proteins with MW of 31-63 kDa and a pH range of 5-6. The aromatic glutinous rice (Arhyangchalbyeo) showed proteins with MW of 24-28 and pH of 5.8-6.8. The high-amylose rice (Goamibyeo) exhibited proteins with MW of 3-63 and pH of 5.2-5.6. The identified proteins uniquely found and highly expressed in each cultivar may have a significant role on rice functionality. The results illustrate that the 2D gel electrophoresis is a valuable method in the determination of the protein expression profiles in functional rice grains and may be useful in the identification of specific marker proteins associated with the functional property of rice.
We purified and characterized a bovine pregnancy-associated protein in pregnant cow urine using two-dimensional gel electrophoresis. Urine from cows was collected according to their status of pregnancy and non-pregnancy. Proteins in the cow urine were fractionated with 50% ammonium sulfate prior to two-dimensional gel electrophoresis. Proteins separated on the gels were compared in terms of expression level and new expression by molecular mass and isoelectric point. We localized two pregnancy-associated protein spots on the gels at molecular masses of 24 kDa and 20 kDa and isoelectric points of 5.5 and 5.7, respectively. Likewise, two non-pregnancy specific proteins were localized at 27 kDa and 28 kDa with isoelectric points of 5.7 and 5.9, respectively. To rule out the possibility that environmental or genetic factors might influence the expression of the proteins, we demonstrated the pregnancy-associated expression of the proteins in two-dimensional gels with pregnant urine taken from cows raised in a different institute. The pregnancy-associated protein with molecular mass of 20 kDa and isoelectric point of 5.7, namely spot 2, was microsequenced and found to be highly homologous to the bovine collagen alpha 1 chain.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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