• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제52권2호
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• pp.145-155
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• 2002

연구배경 : 혈관내피세포와 호중구의 상호작용은 급성염증반응의 생리 및 병리학적 핵심적인 과정으로서 특별한 분자들에 의해서 매개되고 있다. 적절한 자극이 주어질 때 혈관 내피세포에서는 부착 및 신호인자가 표현되며 이들은 호중구의 수용체에 의해 인지된다. 본 연구에서는 IL-1과 LPS로 혈관내피세포를 자극하였을 때 CXC chemokine family에 속하는 GRO-${\alpha}$, IL-8 및 ENA-78이 내피세포에서 분비되는 양상을 관찰하였고, ENA-78과 GRO-${\alpha}$가 호중구-내피세포의 부착에 미치는 영향을 평가하였다. 방 법 : 인제대혈관 내피세포를 배양하여 다양한 농도로 IL-1과 LPS로 자극하였다. 자극된 내피세로로부터 분비 되어진 GRO-${\alpha}$, IL-8 및 ENA-78의 농도는 ELISA로 측정하였다. recombinant human ENA-78 및 GRO-${\alpha}$로 자극된 내피세포에 동위원소가 부착된 정상백혈구를 이용하여 부착능을 측정하였다. 결 과 : IL-1a과 LPS로 자극된 내피세포에서 GRO-${\alpha}$ IL-8 및 ENA-78의 분비는 자극의 농도와 지속시간에 비례하여 증가되었고, recombinant human ENA-78과 GRO-${\alpha}$의 농도가 증가함에 따라 호중구의 부착율이 더욱 증가하였다. 결 론 : ENA-78과 GRO-${\alpha}$는 CXC chemokine family에 속하며 주로 상피세포에서 발현되어 백혈구의 화학적 주성을 유발하며 염증성 반응을 매개하는 중요한 물질로 알려져 있다. 본 연구에서는 다양한 농도의 IL-1과 LPS로 자극된 내피세포에서 농도에 비례하여 GRO-${\alpha}$, IL-8 및 ENA-78이 분비됨을 확인할 수 있었으며, 또한 ENA-78과 GRO-${\alpha}$를 각각 다른 농도로 배양한 후 호중구 부착능이 농도에 따라 증가함을 알 수 있었다. 따라서 본 연구의 결과는 염증성 자극으로 혈관내피세포에서 분비되는 ENA-78과 GRO-${\alpha}$ 등의 CXC chemokine 이 염증반응의 진행 기전에서 중요한 역할을 담당할 것임을 시사하며, 향후 염증성 질환의 발병기전 규명이나 치료법개발을 위한 기초적 자료를 제공하는데 도움이 될 것으로 생각된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제46권3호
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• pp.338-349
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• 1999

연구배경: 호중구는 급성염증이 있을 때 존재하는 제일 많은 세포로서 폐의 염증이 있을 때에도 말초혈액에서부터 이동됨과 동시에 활성화된 호중구에서 분비하는 단백분해효소, 산화물 및 여러 가지 cytokine등에 의해 염증이 더욱 심해지고 호중구의 이동이 더욱 증가되는 것으로 알려져 있다. 호중구의 이동을 증가시키는 물질로 현재까지 LTB4, PAF, C5a, fMLP, TNF, IL-8 등이 밝혀져 있으며 특히 IL-8은 chemokine이라고 부르는 조그만 cytokine에 속하며 GRO/MGSA는 IL-8과 같은 C-X -C subgroup에 속하는 단백질로서 이 유전인자는 PF-4, IL-8등과 같은 chromosome 4q12-q21에 위치한다. IL-8이 호중구의 이동 및 활성화에 강력한 영향을 미치는 것은 잘 증명되어 있지만 같은 C-X-C subgroup에 속하며 최근에 발견된 GRO/MGSA의 기능 및 발현과정 등에 대해서는 잘 밝혀져 있지 않다. 내피세포는 TNF$\alpha$나 IL-1$\beta$ 등의 자극을 받으면 호중구의 유착을 돕는 접착분자 및 IL-8등의 생성이 증가되는등 염증반응에 능동적인 역할을 한다고 밝혀지고 있다. 저자들은 인체의 제대정맥에서 내피세포를 분리하여 TNF나 IL-1로 자극을 가하였을때 호중구의 이동을 증가시키는 IL-8이나 GRO/MGSA mRNA의 발현과 분비가 일어나는지 또한 호중구 화학주성에 미치는 각각의 기여도를 비교, 관찰하고자 하였다. 방 법: 제대정맥에서 내피세포를 분리, 배양하고 여기에 TNF-$\alpha$ IL-1$\beta$ 등을 0.2, 2, 20 ${\mu}g/ml$ 농도로 자극을 가하고 1, 4, 8, 24 시간이 경과하여 IL-8 및 GRO/MGSA mRNA의 발현을 RT-PCR로 관찰하고, 배양상층액내 IL-8 및 GRO/MGSA의 양을 ELISA로 측정하였으며 상층액의 호종구 화학주성 활성화도를 Neuro Probe 48 well chemotactic chamber를 이용하여 측정하였다. 결 과: 제대정맥 내피세포에 TNF-$\alpha$ 및 IL-1$\beta$로 자극하였을 때 내피세포에서의 IL-8 mRNA는 1 시간후부터, GRO/MGSA mRNA의 발현은 4 시간후부터 각각 관찰되었으며 TNF-$\alpha$ 및 IL-1$\beta$의 자극농도에 따른 뚜렸한 차이는 없었다. TNF-$\alpha$ 및 IL-1$\beta$로 자극한 내피세의 배양상층액에서 측정한 IL-8도 1시간후부터 현저히 증가되었고 GRO/MGSA의 양은 4시간후부터 현저히 증가되어 있었다. TNF-$\alpha$ 및 IL-1$\beta$로 자극한 내피세포의 배양상층액의 호중구 화학주성활성화도는 각각으로 1시간 자극 후에 현저히 증가되어 있었다. 결 론: 이상의 결과에서 제대정맥 내피세포를 TNF-$\alpha$ 및 IL-1$\beta$로 자극시 IL-8 및 GRO/MGSA mRNA 발현 및 단백이 분비되며, 특히 IL-8은 1시간 후에 GRO/MGSA는 4 시간후에 각각 증가되고 호중구화학주성활성화는 1시간후부터 최고치로 증가됨을 관찰하여, GRO/MGSA보다는 IL-8 이 호종구유주인자로서의 중요한 역할을 할것으로 생각된다.

• KSBB Journal
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• 제23권5호
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• pp.403-407
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• 2008

본 연구에서는 현재 산업적 응용이 활발하게 이루어지고 있고, 여러 장점을 지닌 효소인 Candida antarctica에서 유래된 lipase B (CalB)의 신속한 개질을 위해 취급이 용이한 E. coli를 이용하여 CalB 발현시스템을 구축하였다. E. coli 발현 시스템에서 효소활성을 지니지 못하는 내포체를 생성하는 단점을 지니고 있어, soluble한 형태의 CalB 생성을 위해 저온 발현이 가능한 pCold I vector와 단백질 접힘을 도와주는 chaperone을 사용하여 CalB를 발현하였다. Liu 등(17)은 E. coli Origami2와 B, 그리고 $DH5{\alpha}$를 실험한 결과, Origami 균주에서만 CalB에 의한 halo의 형성이 관찰되었으나, 동 연구에서는 실험한 3종의 균주와 5종의 chaperone plasmid중 Rosettagami와 $DH5{\alpha}$에서 groES/groEL chaperone이 CalB와 동시에 발현되면 soluble한 형태의 Cal B가 발현됨을 관찰할 수 있었다. 또한 신속한 CalB의 발현시스템을 구축하기 위해서는 유전자 조작의 용이성 및 안정성에서 우월한 $DH5{\alpha}$가 Rosettagami에 비해 soluble한 CalB의 발현에 더욱 적합한 균주임이 관찰되었다. 즉 재조합 pCold plasmid와 pGro7 plasmid (groES/groEL)로 형질이 전환된 $DH5{\alpha}$가 CalB 발현시스템에 가장 적합하다.

• Journal of Yeungnam Medical Science
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• 제24권2호
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• pp.129-136
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• 2007

2002년 1월 1일부터 6월 30일까지 비재발성 또는 약한 재발성 마른기침을 주증상으로 영남대학교 의료원 소아과를 내원한 환아들 중 연구의 목적에 동의한 소아를 대상으로 이들에서의 케모카인 IFN-${\gamma}$-inducible protein 10 (IP-10), Macrophage cationic protein 1 and 3 (MCP-1, 3), Interleukin (IL)-8, RANTES, eotaxin 및 Gro-${\alpha}$의 발현 양상을 알아보았다. 1) 대상 환아는 모두 6명(남 3명, 여 3명)으로, 평균 연령은 73.2개월(34개월~122개월)이었다. 2) 케모카인 IP-10, MCP-3는 모든 환아에서, RANTES는 5명에서, IL-8은 3명에서 발현되었다. 3) Eotaxin, Gro-${\alpha}$ 및 MCP-1은 모든 환아에서 전혀 발현되지 않았다. 4) 추적 관찰에 응한 1례에서 회복기에 MCP-3, RANTES 및 IL-8 발현의 감소가 관찰되었다. 단순 기침 환아에서 케모카인 MCP-3, RANTES 및 IL-8 등이 매우 중요한 역할을 하는 것으로 확인되었다. 향 후 이에 관한 더 많은 비교 연구가 필요할 것으로 생각한다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제8권5호
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• pp.509-516
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• 1998

A plasmid vector, pXGPRMATG-lac-Tgx, was developed for overproduction of $\beta$-galactosidase in Escherichia coli using the genetic components of groEx, a heat-shock gene cloned from symbiotic X-bacteria in Amoeba proteus. The vector is composed of intragenic promoters P3 and P4 of groEx, the structural gene of lac operon, transcription tenninator signals of lac and groEx, and ColEl and amp'of pBluescript SKII. The optimized host, E. coli DH5$\alpha$, transfonned with the vector constitutively produced 117,310-171,961 Miller units of $\beta$-galactosidase per mg protein in crude extract. The amount of enzyme in crude extract was 53% of total water-soluble proteins. About 43% of the enzyme could be purified to a specific activity of 322,249 Miller units/mg protein after two-fold purification, using two cycles of precipitation with ammonium sulfate and one step of gel filtration. Thus, the expression system developed in this study presents a low-cost and simple method for purifying overproduced $\beta$-galactosidase in E. coli.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제19권1호
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• pp.72-77
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• 2009

Here, we demonstrate that the overexpression of the GroELS chaperone system, which assists the folding of intracellular proteins and prevents aggregation of its biological targets, can enhance the thermotolerance of Escherichia coli strains and facilitate the production of recombinant protein under thermal stress. The overexpression of GroELS led to an about 2-fold higher growth rate of E. coli XL-1 blue than control at $45^{\circ}C$ and induced the growth of the strain even at $50^{\circ}C$, although the growth was not sustained in the second-round culture. The effect of GroELS overexpression was also effective on other E. coli strains such as JM109, $DH5{\alpha}$, and BL21. Finally, we have shown that coexpression of GroELS allows us to produce recombinant protein even at $50^{\circ}C$, a temperature at which the protein production based on E. coli is not efficient. This study indicates that the employment of the GroELS overexpression system can expand the range of environmental conditions for E. coli.

• Journal of Yeungnam Medical Science
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• 제20권2호
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• pp.129-141
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• 2003

Background: Leptin is a 16-KDa non-glycosylated peptide hormone synthesized almost exclusively by adipocytes. The well-known function of leptin is regulation of food intake and energy expenditure. Leptin also plays a regulatory role in immune and inflammatory process including cytokine production. The purpose of this study was to investigate the effect of leptin on the expression of several chemokine genes(RANTES, IL-8, MCP-1, IP-10, Mig, MIP-$1{\alpha}$, MIP-$1{\beta}$, and GRO-${\alpha}$) in THP-1 cells. Materials and Methods: Total RNA of THP-1 cells were prepared by Trizol method, and then stimulated with the leptin(250 ng/$m{\ell}$) or LPS(100 ng/$m{\ell}$). We examined the expression patterns of various chemokine mRNAs in THP-1 cell lines by RT-PCR and Northern blot. Results: Leptin did not induce the expression of chemokine mRNAs in THP-1 cells. The expression patterns of RANTES, IL-8, MCP-1, IP-10, and Mig mRNAs in THP-1 cells stimulated with leptin and LPS simultaneously was almost same to the patterns of LPS alone-induced chemokine mRNAs. RANTES mRNA expression was independent on the concentrations of leptin. Although leptin did not have strong effect on the expression of RANTES, IL-8, MCP-1, IP-10, Mig, MIP-$1{\alpha}$, MIP-$1{\beta}$, and GRO-${\alpha}$ mRNAs in THP-1 cells, leptin could induce the expression of long isoform of leptin receptor(OB-RL) mRNA, and its expression was elevated in simultaneous stimulation of leptin and LPS. Conclusion: These data suggest that leptin is able to induce OB-RL in THP-1 cells, however, leptin has little effect on the expression of pro-inflammatory chemokine genes.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2000년도 춘계학술발표대회
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• pp.219-222
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• 2000

Physiological changes of Escherichia coli during the fed-batch fermentation process were characterized in this study. Overall cellular protein samples prepared at the different stage of fermentation were separated by 2-dimensional gel electrophoresis (2-DE), and differently expressed 15 proteins, Phosphotransferase enzyme I, GroEL, Trigger factor, ${\beta}$ subunit of ATP synthase, Transcriptional regulator KDGR, Phosphoglycerate mutase 1, Inorganic pyrophosphatase, Serine Hydroxymethyl-transferase, ${\alpha}$ subunit of RNA polymerase, Elongation factor Tu, Elongation factor Ts, Tyrosine-tRNA ligase, DnaK suppressor protein, Transcriptional elongation factor, 30S ribosomal protein S6 were identified using matrix-assisted laser desorption / ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS). When bacterial cells grow to high cell density, and IPTG-inducible heterologous protein is produced, expression level of overall cellular proteins was decreased. According to their functions in the cell, identified proteins were classified into three groups, proteins involved in transport process, small-molecule metabolism, and synthesis and modification of macromolecules.

• 한국응용곤충학회지
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• 제55권2호
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• pp.177-188
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• 2016

알파 프로테박테리아(${\alpha}-proteobacterium$)인 볼바키아(Wolbachia) 세균은 절지동물 세포내의 중요한 공생균 중의 하나이다. 그람 음성 세균인 이 공생균은 기주동물의 여러 생물적 과정에 관여하고 있으며, 현재 생물적 방제 수단으로 주목 받고 있다. 볼바키아는 기주 세포의 세포질에 서식하는 세균인데 암컷을 통하여 세대간 전염된다. 볼파키아의 감염 개체 밀도를 높이기 위해 기주의 생식방식을 조작하는 다양한 전략을 발달시켰다. 볼바키아 유전자형 계통은 볼바키아 표면 단백질(WSP)의 고변이영역 아미노산 서열과 복합좌위 서열 타이핑(Multilocus sequence typing, MLST)으로 결정된다. 상이한 유전계통 판별은 wsp, 16S rRNA, ftsZ, gltA, groEL 등 유전자 분자표지를 이용하게 된다.. 이 계통 볼바키아 세균과 그들의 우월한 표현형이 농업해충과 인간의 질병매개 곤충에 대한 방제 프로그램에서 이용 가능성이 고려되고 있다. 볼바키아 표현형들은 세포질불일치(cytoplasmic incompatibility, CI), 단성생식 유도(parthenogenesis induction, PI), 여성화(feminization, F), 수컷치사(male killing, MK) 등을 유발하는 것으로 알려져 있다. 기타 볼바키아 세균의 농업과 위생곤충 방제 프로그램에서 응용 방안을 고찰하였다.

• 생명과학회지
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• 제8권6호
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• pp.638-647
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• 1998

Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), bryostatin, dioctanoyl glycero1 (DiC8)과 같은 Protein Ki-nase C (PKC)의 활성제는 세포질로부터 막이나 핵으로 PKC 동위효소의 전위를 유도한다. 활성화된 PKC는 일반적으로 암을 유발시키는 역할을 하지만 그와 반대로 사람유방암세포의 성장을 약화시키는 기능을 가지고 있다. PKC의 항증식효과와 전위가 MCF-7 세포에서 조사되었다. PMA, bryostatin, DiC8로 활성화된 PKC 동위효소의 전위는 MCF-7 세포의 여러 장소에서 나타났다. PMA는 PKC $\alpha$ 와 $\beta$는 핵이나 핵막 그리고 PKC $\delta$와 $\varepsilon$은 세포막으로 일부 전위시켰고, 반면 DiC8과 bryostatin은 PKC $\alpha$와 $\beta$를 각각 핵과 핵막으로 전위를 유도하였다. PKC 활성제의 항증식 효과에 있어서 PMA ($IC_{50}$/ values of 1.2$\pm$0.3nM)와 DiC8 ($IC_{50}$/ values of 5.0$\pm$1.1$\mu$M)는 세포의 성장을 억제시켰다. Bryostatin 역시 세포의 성장을 억제시켰지만, PMA로 관찰된 것보다는 낮은 수준이었다. 즉 100nM bryostatin에 의해 16% 정도 성장이 감소되었다. 그러나 PMA는 bryo-stalin과 함께 처리하였을 때 PMA의 항증식 효과는 낮았으나, 10$\mu$M DiC8과 함께 처리하였을 때는 효과가 없었다. 이러한 결과들은 각 PKC 동위효소들이 다른 특이한 위치로 전위되었으며, 특히 PKC $\alpha$ 동위효소가 세포성장의 항증식 기능을 조절하는데 중요한 역할을 함을 시사한다.