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Site-Directed Mutagenesis를 이용하여 변이된 돼지 성장 호르몬 결합 단백질의 대장균 내 발현과 정제 (Expression and Purification of Mutated Porcine Growth Hormone Binding Protein by Using Site-Directed Mutagenesis in E. coli)

  • Choi, K.H.;Chung, K. S.;Lee, H.T.
    • 한국가축번식학회지
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    • 제25권4호
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    • pp.381-388
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    • 2001
  • 본 연구는 돼지에서 성장호르몬과 결합되는 부위에 변이를 유도하여 결합력이 향상된 성장호르몬 결합단백질을 획득하기 위하여 수행되었다. 돼지의 지방으로부터 얻은 성장호르몬 수용체 RNA 내 성장호르몬 결합단백질 부분을 756 bp의 cDNA로 전향하고 클로닝한 후 site-directed mutagenesis 방법을 이용하여 26과 122번째 아미노산을 변이시켰다. 26번째 아미노산은 성장 호르몬과의 결합에 관련이 있다고 알려져 있는 돼지 성장호르몬 수용체 외막에 존재하는 다섯 군데의 N-linked glycosylation 부위와 가까이 위치한 부분이고, 122번째 아미노산은 소에서의 결합부위로 알려져 있다. 이렇게 변이를 유도한 성장호르몬 결합 단백질을 pET-32(c) 발현벡터에 삽입시키고 과발현시켰고 이를 정제하여 30 kDa의 변이를 유도한 성장호르몬 결합 단백질을 얻었다. 이러한 방법으로 성장호르몬 결합 단백질을 성장기에 있는 세포나 동물에 주입한다면 보다 향상된 성장을 볼 수 있을 것으로 사료된다.

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